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Determinación de Vitamina B12 por Espectrofotometría

Este informe de laboratorio describe la determinación espectrofotométrica de vitamina B12. Se preparó una curva de calibrado con 5 niveles de concentración de vitamina B12 entre 10-50 μg/ml. Se midió la absorbancia de cada nivel a 361 nm. Se preparó una muestra diluida con una concentración estimada de 30 μg/ml y se midió su absorbancia. La curva de calibrado tuvo un coeficiente de determinación R2 de 1. La concentración de la muestra se calculó en 973,51 μg/ml con un coeficiente

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Determinación de Vitamina B12 por Espectrofotometría

Este informe de laboratorio describe la determinación espectrofotométrica de vitamina B12. Se preparó una curva de calibrado con 5 niveles de concentración de vitamina B12 entre 10-50 μg/ml. Se midió la absorbancia de cada nivel a 361 nm. Se preparó una muestra diluida con una concentración estimada de 30 μg/ml y se midió su absorbancia. La curva de calibrado tuvo un coeficiente de determinación R2 de 1. La concentración de la muestra se calculó en 973,51 μg/ml con un coeficiente

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Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas


Carrera: Química y Farmacia
Informe de Laboratorio De Análisis Instrumental I
2020 – 2021 CI
Integrantes:
Número de 
práctica: Docente: Dra. Zoraida Burbano Gómez, M.Sc. Semestre: 6to Grupo: 1-A
#10
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE VITAMINA B12.
Objetivos de la práctica:

Introducción:

Reactivos de laboratorio:

Materiales de laboratorio:
Equipos de laboratorio:

Actividades por desarrollar


 PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRADO:
Pesar directamente en un matraz de 25 ml, en balanza analítica, 20 mg (± 5) de Cianocobalamina (B12),
adicione agua destilada, disuelva completamente y enrase con el agua destilada.
B12=20mg
C1 x V1= C2 x V2
C1 = C2 x V2 /V1
(20mg)(25ml)
C1=
(1000ml)
C1= 0,5 mg
C1= 500 µg

A partir de esta solución tome 5 alícuotas de:


CONCENTRACION
ALICUOTA VOL. DILUCION
µg/ml
Nivel 1 0,2 ml 10 ml 10
Nivel 2 0,4 ml 10 ml 20
Nivel 3 0,6 ml 10 ml 30
Nivel 4 0,8 ml 10 ml 40
Nivel 5 1 ml 10 ml 50

 PREPARACION DE LA MUESTRA:
De una muestra que contenga Vitamina B12 inyectable, que tenga una concentración (ver etiqueta) µg de
vitamina B12/ml, tome una alícuota de la muestra y transfiérala a un matraz volumétrico de 10 ml, de tal
forma que la concentración final de la dilución preparada este entre 20 y 30 µg/ml, enrase utilizando agua
destilada.
Vitamina B12= 900 µg/ml
C1 x V1= C2 x V2
V1 = C2 x V2 /C1
(30 µg/ml)(10ml)
V1=
(900µg/ml)
V1= 0,3 ml

 PARTE INSTRUMENTAL:
1. Lea las Absorbancias de las diluciones de trabajo y de la dilución de la muestra preparada a una
longitud de onda de 361 nm.
2. Use agua destilada como blanco.
 ACTIVIDADES:
1. Con los datos obtenidos en las diferentes mediciones de los estándares de trabajo, grafique la curva de
calibrado y obtenga la Ecuación de la recta y el valor de R².
2. Realice los cálculos necesarios para llegar a obtener la concentración de la muestra entregada. Aplique
la estadística CONCENTRACION (Promedio, Desviación
estándar, No. Nivel ABSORBANCIA Coeficiente de
µg/ml
Variación)
0 0 0
1 10 0,174
2 20 0,387
3 30 0,557
4 40 0,754
5 50 0,921
Absorbancia vs Concentración
1
0.9 f(x) = 0.02 x + 0
0.8 R² = 1
0.7
ABSORBANCIA

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 10 20 30 40 50 60
CONCENTRACIÓN

Réplicas
A = 0,542
B = 0,545
C = 0,543

Promedio:

∑x
x́ =
n

( 971 µg/ml + 976,52µg/ml + 973 µg/ml )


x́ = = 973,51 µg/ml
3

Desviación estándar:
√ (971 - 973,51) 2 + (976,52 - 973,51) 2 + (973 - 973,51) 2
s = = 2.79
3-1

Coeficiente de variación:
2.79
C.V.= x 100 = 0,29
973,51

Rango de aceptación 95% - 85%


900 µg/ml → 100%
973,51 µg/ml → X
X = 108.17 %

Conclusiones:

Recomendaciones:
Bibliografía:

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