UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
Facultad de Ingeniería Química
Carrera de Ingeniería Química
Biotecnología Industrial
PRACTICA Nº 6
Docente:
Magdalena Díaz
Integrantes:
Steeven Chávez
Bryan Juiña
David López
Sebastián Patiño
Nicole Pinto
María José Realpe
Lizbeth Suntaxi
Gustavo Vintimilla
Samanta Zambrano
2020-2020
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LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
PRACTICA Nº 6
1. OBJETIVOS
1.1 Diferenciar los conceptos de bioestimulación y bioaumentación aplicados en una
misma matriz y determinar el que presenta mejores resultados.
1.2 Determinar el mecanismo de acción biológico en el caso estudiado.
1.3 Analizar publicaciones científicas sobre procesos de biorremediación.
1.4 Establecer los parámetros de control de crecimiento en biorremediación basados en
la investigación bibliográfica.
1.5 Evaluar la utilidad del uso de tratamientos biológicos en aguas contaminadas y
establecer los resultados obtenidos en el documento estudiado.
2. INTRODUCCIÓN
Publicación científica: Consorcio microbiano autóctono para el tratamiento de aguas
contaminadas con gasoil del puerto de Isla de Toas (Venezuela).
El trabajo a analizar presenta el caso de la Biorremediación de aguas contaminadas con
gasoil, mediante una comparación con procesos de bioestimulación y bioaumentación con
consorcios microbianos. Esto último debido a la necesidad de una descomposición de
diferentes hidrocarburos, lo cual se llevó a cabo con diferentes bacterias. Los resultados
obtenidos en el documento son representados a través de una reducción de materia
orgánica y disminución en la concentración de hidrocarburos.
3. OBSERVACIONES
3.1. Tipo de Biorreactor utilizado
Se construyó un modelo de tratabilidad con un volumen de 20L, compuesto de dos
tratamientos y un control triplicado. Las unidades de tratamiento (microcosmos) se
constituyeron de 9 unidades con capacidad de 49L, cada una de estas tenía 20L de agua
del puerto al 1% v/v de gasoil. Este dispositivo conectado en serie recibía aireación
mecánica y fotoperiodo de luz 12h:12h. Con una disponibilidad de nutrientes para 35días.
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Figura 1. Modelo de Tratamiento para biorremediación de aguas contaminadas
con Gasoil
Fuente: L. C. Díaz Borrego, J. C. Marín Leal, D. A. Alburque Díaz, S. J. Carrasquero
Ferrer, E. D. Morales Avendaño, “Consorcio microbiano autóctono para el tratamiento
de aguas contaminadas con gasoil del puerto de Isla de Toas (Venezuela),” Ciencia e
Ingeniería Neogranadina, vol. 28, no. 2, pp. 5-28. DOI: https://doi.
org/10.18359/rcin.2792
3.2Tipo de microorganismo, concentraciones del inóculo inicial
Para una concentración de gasoil del 1%v/v se utilizó un consorcio microbiano compuesto
por un cultivo mixto de tres cepas bacterianas (Pseudomonas pertucinogena,
Pseudomonas syringae y Sphingomonas paucimobilis), y un cultivo unialgal de Chlorella
spp. Para el modelo anterior se introdujo una concentración de 20%v/v del consorcio
microbiano autóctono.
3.3 Cantidad de contaminante a degradar
Para 20 L de agua de puerto contaminada se tiene una concentración teórica de gasoil del
1%v/v.
3.4 Características del contaminante y de la matriz
El contaminante del agua a tratar es el Gasoil es cual es un compuesto orgánico que está
formado fundamentalmente por hidrocarburos saturados o parafinas. La fórmula química
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más común para este compuesto es C12H26. La matriz para utilizarse en estos procesos de
bioaumentación y bioestimulación es el agua proveniente del Puerto de Isla Toas ubicado
en el Lago de Maracaibo, Venezuela, las cuales están contaminadas con 1% V/V de
gasoil. Los hidrocarburos son grandes contaminantes medioambientales debido a que
poseen una gran capacidad de disolverse en el agua, por lo que es de gran importancia el
tratamiento de aguas con estos contaminantes.
3.5 Impacto del contaminante (Normativas)
En esta isla se localiza un puerto para el transporte marítimo de pequeñas embarcaciones
de pesca comercial y actividades turísticas, como resultado de estas actividades,
diariamente se aprecian manchas de hidrocarburos en la superficie del agua, lo que puede
provocar un efecto negativo sobre la biota acuática. El límite permisible de HTP
establecido en la normativa ambiental venezolana para el vertido a cuerpos de agua
naturales es de 20 mg/L, pero no pudo alcanzarse bajo las condiciones establecidas en el
estudio que se realizó, por lo que el efluente tratado requiere de un tratamiento
complementario para cumplir con dicha norma. No obstante, se obtuvieron altas tasas de
biodegradación del gasoil añadido. Las remociones de hidrocarburos saturados,
aromáticos, resinas e HTP estuvieron entre 6,6 y 81,7 %. Se obtuvieron diferencias
significativas (prueba de Tukey, p<0,05) para las remociones de hidrocarburos saturados,
aromáticos e HTP, de los tratamientos con respecto al control, así como entre el proceso
de bioestimulado y de bioaumentado. Los niveles de resinas (compuestos recalcitrantes)
no fueron significativamente diferentes (p>0,05) para las condiciones de tratamiento.
4. CURVAS DE CRECIMIENTO
El control exhibió una fase de adaptabilidad hasta el día 28 sin producción de biomasa la
cual comenzó a incrementar del día 35 al 42 (1,10 ± 0,56 x104 cél /mL), como resultado
del suministro adicional de fertilizante. Luego de pequeñas fluctuaciones se obtuvo la
mayor densidad de la microalga Chlorella spp. al final del ensayo (día 70), con una media
aritmética de 2,96 ±2,02x104 cél /mL. La mayor densidad de Chlorella spp. se reflejó a
los 70 días con una media de 2,33±2,08 x106cél/mL.
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Figura 2. Densidad bacteriana en Bioestimulación
160000000
Bioestimulación
Densidad Bacteriana (UFC/mL)
140000000
120000000
100000000
80000000
60000000
40000000
20000000
0
-20000000 0 20 40
Tiempo (días)
60 80
Fuente: L. C. Díaz Borrego, J. C. Marín Leal, D. A. Alburque Díaz, S. J. Carrasquero
Ferrer, E. D. Morales Avendaño, “Consorcio microbiano autóctono para el tratamiento
de aguas contaminadas con gasoil del puerto de Isla de Toas (Venezuela),” Ciencia e
Ingeniería Neogranadina, vol. 28, no. 2, pp. 5-28. DOI: https://doi.
org/10.18359/rcin.2792
Figura 3. Densidad bacteriana en Bioaumentación
Bioaumentación
250000000
Densidad bacteriana, UFC/mL
200000000
150000000
100000000
50000000
0
0 20 40 60 80
Tiempo (días)
Fuente: L. C. Díaz Borrego, J. C. Marín Leal, D. A. Alburque Díaz, S. J. Carrasquero
Ferrer, E. D. Morales Avendaño, “Consorcio microbiano autóctono para el tratamiento
de aguas contaminadas con gasoil del puerto de Isla de Toas (Venezuela),” Ciencia e
Ingeniería Neogranadina, vol. 28, no. 2, pp. 5-28. DOI: https://doi.
org/10.18359/rcin.2792
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5. ANALISIS DE TASA DE CRECIMIENTO
5.1 Tasa específica de crecimiento
Figura 4. Fase exponencial en Bioaumentación
Fase exponencial - Bioaumentación
250000000
Densidad bacteriana (UFC/mL)
200000000
150000000
100000000
y = 3E+07x
R² = 1
50000000
0
0 2 4 6 8
Tiempo (días)
Figura 5. Fase exponencial en Bioestimulación
Fase exponencial - Bioestimulación
160000000
Densidad bacteriana (UFC/mL)
140000000
120000000
100000000
80000000
60000000
y = -367347x2 + 2E+07x + 6E-08
40000000
R² = 1
20000000
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (días)
Con la Chlorella vulgaris, en concentraciones de 1 hasta 10.000 μg/L, se obtuvo tasas de
crecimiento especificas entre 2,7 y 6,7x105 cél/ mL.
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5.2 Ecuación que define el crecimiento
5.2.1Bioaumentación
𝑦 = 3 ∗ 107 𝑥 Ec.1
5.2.2Bioestimulación
𝑦 = −3673473 ∗ 𝑥 2 + 2 ∗ 107 𝑥 + 6 ∗ 10−8 Ec.2
5.3Tiempo de duplicación
En las unidades de estudio la media aritmética para la biomasa, fue la siguiente:
T2 (1,03±0,81x106 cél /mL) > T1 (1,64±8,10x105 cél/mL) > control (6,98±8,97x103
cél /mL).
Se determinan tiempos de duplicación celular de: 2,65 para la bioremediación y 3,34
para la bioaumentación.
6. ANÁLISIS DE LA DEMANDA QUÍMICA DE OXIGENO (DQO)
Los microcosmos control, T1 (bioestimulado) y T2 (bioaumentado) reflejaron una
disminución continua del contenido de materia orgánica (medida como DQO), durante el
periodo de tratamiento. Los valores medios para la remoción de materia orgánica (DQO)
fueron 23,3±2,3 % para la bioestimulación y de 16,1±0,38 % para la bioaumentación.
Las concentraciones medias de DQO fueron de:
Control: 766,6 ± 62,0 mg/L con rango de 709,2 ± 28,0 - 924,1 ± 41,2 mg/L
Bioestimulación: 678,1 ± 90,4 mg/L con rango de 556,3 ± 22,3 - 858,0 ± 32,2 mg/L
Bioaumentación: 606,7±185,8 mg/L con rango de 313,1 ± 36,5 - 884,4 ± 71,1 mg/L
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Figura 4. Valoración de DQO en las unidades experimentales
Fuente: L. C. Díaz Borrego, J. C. Marín Leal, D. A. Alburque Díaz, S. J. Carrasquero
Ferrer, E. D. Morales Avendaño, “Consorcio microbiano autóctono para el tratamiento
de aguas contaminadas con gasoil del puerto de Isla de Toas (Venezuela),” Ciencia e
Ingeniería Neogranadina, vol. 28, no. 2, pp. 5-28. DOI: https://doi.
org/10.18359/rcin.2792
7. PARAMETROS DE CONTROL
7.1Temperatura: Este parámetro es de alta importancia debido a que el crecimiento
microbiano depende mucho de este, además del tipo de microorganismo que se tiene para
el proceso de biorremediación. En este proceso, la temperatura tuvo un valor de 31,3 °C,
teniendo en cuenta una desviación de aquel valor de ± 0,2.
7.2 pH: El valor de esta condición se mantuvo casi cercano a un valor de pH neutro, esto
debido a que el microorganismo ocupado en este proceso debe mantenerse en la
neutralidad para que pueda experimentar un crecimiento adecuado para el proceso de
biorremediación. Los valores de pH garantizaron la supervivencia de una amplia variedad
de microorganismos neutrófilos, capaces de participar en las reacciones de
biodegradación de hidrocarburos. Debido a otros factores observados, existen variaciones
de pH, no obstante, estas variaciones pueden amortiguarse por la alcalinidad disponible y
deben monitorearse continuamente.
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7.3Concentración del Contaminante: Se encontró concentraciones basadas en
nitrógeno, fosforo e hidrocarburos, para el nitrógeno, se tuvieron rangos tanto de nitrito
como de nitrato, estos se encontraron en los rangos de:
Nitrato: 0.012 ± 0.002 [mg/L]
Nitrato: 0.16 ± 0.05 [mg/L]
Hay concentraciones de nitrógeno, las cuales, al ser analizados en conjunto con
los valores antes mencionados, hacen que el valor total de nitrógeno se encuentre
en el rango de 2.34 ± 0.12 [mg/L].
En el caso de concentración de fosforo, este se encuentra en forma de ortofosfatos, el cual
tiene una concentración en el rango de 1.08 ± 0.03. Este valor en adición con otros
compuestos, brindan un valor de concentración de fosforo de 1.36 ± 0.04 [mg/L]
Dentro de este parámetro se tiene también el DQO, el cual se mantiene en un rango de
427.9 ± 157.8 [mg/L].
7.4 Hidrocarburos Totales: Estos resultados demuestran la eficiencia del consorcio
microbiano autóctono empleado, siendo capaz de degradar las fracciones de
hidrocarburos del petróleo, presentes en el gasoil añadido. Los resultados de la
concentración de hidrocarburos se encuentran entre 2.826,4 ± 354,2 [mg/L].
7.5 Medio Minimal
Pseudomonas pertucinogena, Pseudomonas syringae y Sphingomonas paucimobilis
Temperatura: siendo 25 °C, como su temperatura mínima para su apropiado crecimiento
y biorremediación.
Figura 6. Componentes requeridos para un medio minimal
Componente Cantidad Función del componente
Na 2 SO 4 1g Fuente de Na y S, buffer
MgCl 0,1 g Fuente de magnesio
PO4 0,1 g Fuente de Fosforo
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NO2 5g Fuente de Nitrógeno
NO3 2g Fuente de Nitrógeno
Gasoil 1 v/v % Fuente de carbono
pH 7
7.6 Fuente de Carbono: Para esta biorremediación se utilizó el gasoil al 1% v/v.
8.DISCUSION
El método cuantitativo utilizado fue el correcto, ya que, a partir de la investigación
realizada por un Consorcio Microbiano Autóctono para el Tratamiento de Aguas
Contaminadas se pudo obtener el tipo de microorganismo (Chlorella spp, bacteria) que
se utilizó para el tratamiento de aguas contaminadas con 1% v/v de gasoil, el tipo de
reactor que se utilizó y la cantidad, características e impacto que tiene el contaminante.
En este artículo se realizaron dos tratamientos uno de Bioestimulación y el otro de
Bioaumentación durante 70 días, en los cuales se monitorearon: Temperatura, pH,
demanda química de oxigeno (DQO), densidad bacteriana, etc.
Basándose en estos datos se realizó la curva de crecimiento, se calculó la tasa de
crecimiento, tiempo de duplicación, porcentaje de remoción (DQO) y su máxima
densidad poblacional (biomasa). Se puede analizar mediante los resultados obtenidos que
la población bacteriana no tiene una fase de latencia en su curva de crecimiento, esto
debido a que se realizaron aplicaciones de biomasa y nutrientes como una estrategia de
incremento en el metabolismo microbiano. También se observaron que existo un
porcentaje alto de remoción de hidrocarburos mediante la Bioaumentación, por lo que se
recomienda que se continúe con la investigación sobre este tipo de tecnología de
tratamiento.
9. CONCLUSIONES
9.1 A partir del análisis bibliográfico y de la figura 6, se determinó que existe un mayor
porcentaje de remoción de materia orgánica, representado por DBO e hidrocarburos,
cuando se realizó un tratamiento bioaumentado, en comparación con el tratamiento
bioestimulado. Esto debido al uso de un consorcio microbiano autóctono en el caso de la
bioaumentación y al control de las condiciones ambientales.
9.2 Se determinó que el mecanismo biológico para la biorremediación de las aguas
contaminadas consiste en una descomposición de los componentes del petróleo llevada a
cabo por un consorcio bacteriano, lo cual permitió la degradación de los diferentes
hidrocarburos, todo esto aprovechando la actividad metabólica de las cepas bacterianas,
como las Pseudomonas presentes en el estudio.
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9.3 Basado en la investigación realizada, se podría realizar un proceso de biorremediación
efectivo, ya que los parámetros que necesita dicho proceso, son muy admisibles para
lograr un buen crecimiento microbiano, además de que se tiene en cuenta todos los
nutrientes que se tiene y también la fuente de carbono ocupada para lograr todo esto.
9.4 Se determina que es de importancia las publicaciones científicas sobre
biorremediación, permitiendo conocer los requerimientos mínimos (medio minimal), que
necesitan los microrganismos para su crecimiento en la matriz, eligiendo el método más
apropiado y óptimo para nuestro tema de interés, siendo el problema a tratar, tenía los
requerimientos necesarios para los requerimientos del consorcio microbiano en esta
biorremediación.
9.5 Mediante los resultados que se obtuvieron del análisis de la publicación científica se
puede concluir que en este caso la mejor opción para obtener el mayor porcentaje de
remoción de contaminantes es recomendado utilizar el método de Bioaumentación, pues
muestra valores de porcentajes más altos para la remoción de hidrocarburos que se
encuentran en el agua mejorando de esta manera su composición y memorando los efectos
negativos que tiene un agua contaminada con gasoil.
9.BIBLIOGRAFIA
9.1 L. C. Díaz Borrego, J. C. Marín Leal, D. A. Alburque Díaz, S. J. Carrasquero Ferrer,
E. D. Morales Avendaño, “Consorcio microbiano autóctono para el tratamiento de aguas
contaminadas con gasoil del puerto de Isla de Toas (Venezuela),” Ciencia e Ingeniería
Neogranadina, vol. 28, no. 2, pp. 5-28. DOI: https://doi. org/10.18359/rcin.2792
