Tarea 3. Espectroscopia de masas.

1. (25) A partir del espectro de Masas obtenido por impacto electrónico,

determine la posible estructura de un compuesto de fórmula C5H10O2. Para tal
fin, genere una tabla donde condense las masas (m/z), el valor M-masa, y el
posible fragmento al que corresponde (el lógico).

.
PM 102
102-87=15
87-74=13
74-71=3
71-59=12
59-43= 16
éster, masa 102, (pico M a 102), con fórmula CH3CH2CH2COOCH3, con
rompimientos que conducen a fragmentos:

87: CH2CH2COOCH3 (característico de ésteres metilícos)

74: CH2COOHCH3, con reordenamiento de H (característico de ésteres metilícos)

43: CH3CH2CH2. Para cetonas el pico a m/z 43 es muy importante

59: COOCH3 proveniente del metil-esteres

71: proveniente de las cetonas.

Ácido butanoico, éster metílico

Fórmula: C5H10O2
Peso molecular real: 102.1317

2. (25) A partir del espectro de Masas (obtenido por impacto electrónico) y de

RMN-1H, determine la posible estructura de un compuesto de fórmula C6H4Cl2O.
Para tal fin, genere una tabla donde condense las masas (m/z), el valor M-masa, y
el posible fragmento al que corresponde (el lógico).
PM 162
162-128=34
128-126=2
126-98=28
98-73=25
73-63=10

Fenol, 2,6-dicloro-
Fórmula: C6H4Cl2O
Peso molecular real: 163.001

3. (50%) Analice el artículo “Empleo de la EM como herramienta para la

determinación de tóxicos en alimentos” y prepare un ensayo de no menos
de 5 páginas en donde discuta y resuma los objetivos, analitos, tipos de
muestras, métodos, instrumentos y resultados que los autores emplean
La Espectrometría de Masas es una técnica micro analítica usada para identificar
compuestos desconocidos, cuantificar compuestos conocidos, y para elucidar la
estructura y propiedades químicas de las moléculas. Requiere cantidades
pequeñas de muestra y obtiene información característica como el peso y algunas
veces la estructura del analito.
En la Espectrometría de masas la muestra es ionizada (y por tanto destruida)
usando diversos procedimientos para ello. De todos ellos el más usual y/o utilizado
es la técnica denominada de Impacto Electrónico consistente en el bombardeo de
la muestra (previamente vaporizada mediante el uso de alto vacío y una fuente de
calor) con una corriente de electrones a alta velocidad.
Mediante este proceso, la sustancia pierde algunos electrones y se fragmenta
dando diferentes iones, radicales y moléculas neutras. Los iones (moléculas o
fragmentos cargados) son entonces conducidos mediante un acelerador de iones
a un tubo analizador curvado sobre el que existe un fuerte campo magnético y
conducidos a un colector/analizador sobre el que se recogen los impactos de
dichos iones en función de la relación carga/masa de estos.
Cada compuesto es único, y cada uno de los compuestos se ionizará y
fragmentará de una determinada manera, y en este principio se basa la
espectrometría de masas para identificar cada analito.
Con la espectrometría de masas somos capaces de proporcionar información
acerca de la:
• Composición elemental de las muestras: de esta se encarga la
espectrometría de masas atómico.
• Composición de las moléculas inorgánicas, orgánicas y biológicas.
• Composición cualitativa y cuantitativa de mezclas complejas.
• Estructura y composición de superficies sólidas.
• Relaciones isotópicas de átomos en las muestras.
Entre las técnicas analíticas ampliamente utilizadas en la espectrometría de
masas cabe destacar los métodos cromatográficos como la cromatografía de
gases y cromatografía líquida acopladas a espectrómetros de masas y la
espectrometría de masas de relaciones isotópicas, para el análisis de isótopos
estables (C, N, H, O y S).
Dentro de las técnicas existentes hoy en día destacan el empleo de biosensores,
Enzima Linked Inmunoabsorvent Assay o cromatográficas; estas últimas suelen
cumplir con estos requisitos, ya que por un lado permiten el análisis multirresiduo,
siendo ideales para la determinación de varios compuestos en un solo análisis, y a
continuación, en función del tipo de detector empleado, ofrecer una elevada
sensibilidad. En este sentido, pueden emplearse numerosos detectores como los
espectrofotométricos hasta los basados en resonancia magnética nuclear,
pasando por detectores de captura electrónica o de espectrometría de masas. Sin
embargo, la Decisión de la Comisión, 2002/657/CE10, relativa al funcionamiento
de los métodos analíticos para la determinación de contaminantes en alimentos y
la interpretación de los resultados, indica que los métodos basados sólo en
análisis cromatográficos sin el empleo de la espectrometría de masas para la
detección no son apropiados para la confirmación de los mismos. En este
contexto, los laboratorios de análisis alimentario se ven obligados al empleo de la
espectrometría de masas para la determinación de contaminantes en alimentos,
con objeto de asegurar la fiabilidad de los resultados obtenidos, siendo por tanto
una herramienta de obligado uso en los mismos. De hecho, la UE señala este tipo
de detección como el idóneo para la correcta identificación de compuestos,
empleando para ello un sistema de identificación por puntos, indicando que para
compuestos legislados se necesitan al menos 3 puntos de identificación, mientras
que para los no autorizados o sustancias anabolizantes se necesitarían al menos
4 puntos.
FUNDAMENTO DE LOS DETECTORES DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS
El análisis mediante espectrometría de masa implica las siguientes etapas:
a) Introducción de la muestra en fase gaseosa (átomos o moléculas).
b) Conversión de una fracción significativa de los átomos o moléculas en iones
(carga positiva o negativa) mediante una fuente de ionización.
c) Separación de los iones formados según su relación de m/z mediante un
analizador de masas.
d) Recuento de los iones de cada tipo o medida de la corriente iónica producida
cuando los iones inciden en un detector adecuado.
e) Procesamiento de los datos para obtener un espectro de masas del compuesto
estudiado.
Así, un espectrómetro de masas es un instrumento que separa los distintos iones
gaseosos formados por un compuesto según su relación m/z. Dichos iones deben
poder moverse rápidamente a través del sistema, para ello es necesario conseguir
un alto vacío (10-8– 10-4 torr) mediante bombas de alto rendimiento.
El espectro de masas de un compuesto se obtiene mediante la representación
mediante un gráfico de barras de los distintos iones en que se fragmenta dicho
compuesto en función de su m/z y en el que la altura de las mismas corresponde a
la intensidad relativa de los iones detectados (Fig. 2). Así, se denomina pico base
al ión que da la señal más intensa (100%), siendo el ion molecular (M+) aquel que
resulta de la pérdida de un electrón por parte de la molécula.
El espectro de masas se puede utilizar con fines identificativos. Además, eligiendo
los iones adecuados de un compuesto determinado, se puede llegar a su
cuantificación.
Aunque la espectrometría de masas es una poderosa herramienta para la
identificación de compuestos puros, es insuficiente para el análisis de mezclas, ya
que la interpretación de los espectros de masas obtenidos sería muy complejo o
incluso imposible debido al elevado número de iones formados. Así, se han
desarrollado métodos en los que el MS se acopla a un sistema de separación
eficaz, dando lugar a los denominados métodos acoplados.

Las agencias de salud pública en muchos países se basan en la detección por

espectrometría de masas para la identificación inequívoca de los residuos de
agentes antimicrobianos en los productos alimenticios de origen animal destinados
al consumo humano. La introducción de esta técnica es relativamente de fácil
acceso y robusta. Al respecto el sistema LC-MS ha dado un fuerte impulso al
desarrollo de nuevos y mejores métodos para determinar y confirmar la presencia
de residuos de medicamentos en matrices alimentarias.

Tres aspectos han incidido en el desarrollo de las interfaces de LC-MS:

1. La volatilización del efluente de la columna, la eliminación de los

constituyentes de la fase móvil, la volatilización del analito y posterior
ionización.
2. La ionización directa del efluente, como, por ejemplo, la ionización por
bombardeo del flujo del analito en la interfaz.
3. La volatilización del efluente de la columna a presión atmosférica o a una
presión reducida, de solvatación de las gotas, seguida de la ionización
química en fase gaseosa o iónica, por ejemplo, evaporación, electro
nebulización (ESI) y la interface caliente del nebulizador APCI. En la
práctica, la interfaz elegida impone limitaciones tanto para la metodología
aplicable LC (velocidad del flujo y la composición del disolvente) y la técnica
de ionización aplicable en la MS.

Cromatografía Líquida acoplado a espectrometría de masas (LC-MS) es una

técnica robusta, sensible y selectiva, y se ha convertido en una técnica muy
difundida para el análisis cuantitativo y cualitativo (Yoshida et al. 2009). También
se emplea en la detección de residuos de medicamentos veterinarios en huevos,
leche, pescados y carne. Dado que la técnica de GC-MS requiere de
pretratamiento de la muestra y derivatización del analito, la LC-MS es una
alternativa que requiere menos complejidad para la determinación de
sulfonamidas; la mayoría de los métodos LC-MS publicados para el análisis de
este tipo de fármacos se basan en la HPLC/APSI-MS y HPLC/ESI-MS

Los primeros trabajos que utilizaron métodos LC-MS para analizar promotores de
crecimiento emplearon fuentes de ionización por termo pulverización (TSP).
Posteriormente y siguiendo la evolución de las técnicas de ionización en
espectrometría de masas acoplada a la cromatografía líquida, la TSP fue
desplazada por las técnicas de ionización a presión atmosférica (API), que
incluyen la electro nebulización o electrospray (ESI) y la ionización química a
presión atmosférica (APCI); sin embargo, ESI sigue siendo la fuente de iones más
utilizada para el análisis de antibióticos en los alimentos, debido a la alta polaridad
que presentan estas sustancias.
La espectrometría de masas ya sea en modo simple MS o en tándem (MS/MS), es
la técnica de detección más extendida. La espectrometría de masas, sin duda
alguna, la técnica analítica instrumental más completa que existe actualmente.
Entre las cualidades que justifican esta afirmación, podemos citar, su capacidad
de identificación, análisis de muestras complejas, alta sensibilidad, caracterización
estructural e isotópica de moléculas, por lo cual es considerada, universal,
específica y relativamente rápida. El acoplamiento cromatografía líquida-
espectrometría de masas (LC-MS/MS) es especialmente adecuado para el análisis
en química ambiental debido a su gran sensibilidad y selectividad; también se ha
utilizado en el análisis de residuos de medicamentos veterinarios.

Además, se conoce que la sensibilidad y la especificidad son dos características

importantes para el análisis de trazas y la detección de un analito. Al respecto, el
acoplamiento MS/MS presenta grandes ventajas prácticas respecto a MS simple,
debido a que mejora la calidad y la cantidad de la información en términos de
selectividad y elucidación estructural. Este tipo de acoplamiento junto con
cromatografía de gases o la cromatografía líquida, ofrece una poderosa
combinación, siendo ampliamente considerada como la técnica más definitiva para
aspectos de tipo normativo. Por ello, entre sus aplicaciones actuales más
reconocidas se puede mencionar los ensayos de farmacocinético, detección de
interferencia de fondo, separación de componentes de mezclas con diferentes
pesos moleculares, la fragmentación controlada y reproducible, y el monitoreo de
reacciones, entre otras.

En conclusión, aunque la espectrometría de masas es una poderosa herramienta

para la identificación de compuestos puros, la complejidad de los espectros de
masas dificulta enormemente el análisis de mezclas, incluso simples. Por ello para
el análisis de muestras complejas se emplean acoplamientos de esta técnica con
técnicas potentes de separación, como es la cromatografía.

Así, el acoplamiento Cromatografía de gases-Espectrometría de masas (GC-MS)

es una de las herramientas más poderosas al alcance de los químicos para el
análisis de muestras complejas. En este caso se efectúan los espectros de masas
de los compuestos que salen de la columna cromatográfica. Es necesaria una
interfase entre ambos instrumentos que tiene como misión fundamental pasar de
la alta presión a la que sale el efluente cromatográfico al vacío necesario en el
espectrómetro de masas. El acoplamiento también es posible con la cromatografía
líquida, solo cambia el tipo de interfase necesario entre los instrumentos. En
general hay que eliminar el eluyente (fase móvil) antes de la introducción de los
analitos en el espectrómetro.

Estos acoplamientos permiten reunir las ventajas de una técnica poderosa de

separación con una herramienta poderosa de identificación. Pueden registrarse
espectros de masas a lo largo de toda la separación cromatográfica. Así pueden
identificarse inequívocamente los picos y comprobar incluso su pureza, es decir si
la separación ha sido completa o se ha producido en algún momento la co-elución
de dos compuestos.
Estas técnicas resultan extremadamente útiles en el análisis de ultratrazas (ng/Kg)
de compuestos orgánicos. El análisis de tan bajos niveles de concentración (ultra
trazas) puede resultar necesario cuando se trata de especies de muy alta toxicidad
y que se acumulan en los organismos vivos.