UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
Creada del 29 de Octubre de 1943
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA BÁSICA Y APLICADA
MÉTODO POR COMPARACIÓN CON UN
ESTÁNDAR
CURSO:
Química Analítica Instrumental
INTEGRANTES:
Ayala Centeno, Merly Liliana
Cadillo Barrueto, Kellet Shaked
Daza Galecio, Erick
Jugo Torres, Angie Roxana
Rodas Huamán, Milagros Angélica
Yupanqui Gallegos, Briggitte
PRÁCTICA: Miércoles 10 – 2pm
DOCENTE:
Dra. Norma Carlos Casas
2017
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
I. OBJETIVO:
Cuantificar una muestra por el método de comparación con un estándar.
II. MARCO TEÓRICO
El análisis cuantitativo utilizando la espectrofotometría UV-visible se puede
realizar a través de una solución patrón de concentración conocida seguido del
análisis del compuesto desconocido. La concentración de la muestra
desconocida se calculará mediante la expresión siguiente 1:
C= ( ApAs ) Cs
Dónde:
C = concentración del problema
Cs = concentración del patrón
Ap = absorbancia que presenta la muestra
As = absorbancia que presenta la muestra patrón
En este caso el cálculo de la concentración del problema depende del hecho de
que problema y patrón se vean sometidos a un tratamiento experimental
idéntico.
Además ha de asumirse que existe proporcionalidad lineal entre la absorbancia
y la concentración, en el intervalo de concentraciones objeto de estudio; es
decir, que si la solución problema posee una concentración doble que la
solución patrón, deberá por tanto, mostrar doble valor de absorbancia que el
patrón2.
Es frecuente utilización de dicha ecuación en química clínica, como ejemplo
tenemos la determinación de ácido úrico por el método propuesto.
Método de cuantificación por comparación con un estándar
El método de cuantificación por comparación con un estándar tiene la ventaja
de que el estándar y la muestra son tratados de manera simultánea, siendo
sometidos a las mismas condiciones de trabajo, por lo tanto, cualquier factor de
error, afectará en igual magnitud al estándar y al problema.
El análisis cuantitativo por absorción, se basa en la absorción selectiva de
radiación en la zona visible del espectro electromagnético que se produce
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 2
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
cuando dicha radiación, atraviesa una solución coloreada que contiene al
analito de interés y que se coloca en una celda, dando lugar a que el rayo
emergente difiera del incidente3.
Método de adición estándar
Este método consiste en añadir cantidades conocidas de analito al problema,
cuyo contenido en analito se quiere determinar. La adición de patrón es
apropiada cuando la composición de la muestra es desconocida o compleja
logrando afectar la señal analítica.
El efecto matriz definido como el cambio que experimenta una señal analítica
por todo lo que hay en la muestra excepto el analito. Es así como a partir del
aumento de la señal se deduce cuanto analito había en la muestra, pero se
requiere una respuesta lineal frente al analito.4
Tomando en cuenta que la matriz de la muestra es casi idéntica después de
cada adición, y la única diferencia es la concentración del analito, o bien, la
concentración de dicho reactivo en los casos en que se añade un exceso de un
reactivo analítico. Todos los otros constituyentes de la mezcla de reacción
deben ser idénticos porque los patrones están preparados en alícuotas de la
muestra.5, 6
Grafica S en función de Vs es una recta de la forma
S :respuestaneta del instrumento
Vs=volumen variable de una solucion patròn
Fig. 1: Gráfica de calibración para el método de la adición estándar. La concentración de
la disolución incógnita se podría calcular a partir de la pendiente m y de la ordenada b, o
bien, se podría calcular mediante extrapolación como se explica en el texto.
III. PARTE EXPERIMENTAL
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 3
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
MATERIALES:
Pipetas de 5 y 10ml
Fiolas de 10, 25, 100ml.
Beacker
Piceta
Celda de cuarzo
Espectrofotómetro UV-Vis GENESYS TM 10S --- Marca: Thermo Scientific
REACTIVOS:
HCl 0,1N
Agua destilada
Tetraciclina (Cápsulas)
METODOLOGÍA
Para la cuantificación de una forma farmacéutica (cápsulas de tetraciclina),
preparamos una solución estándar y luego la muestra para leerlo en el
espectrofotómetro y así de acuerdo a la absorbancia que presente, determinar
su concentración.
Tomamos los siguientes valores:
Concentración óptima: 8 μg/ml
λ óptima: 270 nm
1. Preparamos la solución estándar (clorhidrato de tetraciclina) a una
concentración óptima de 8 μg/ml.
ESTÁNDAR
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 4
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
Preparación de la solución “A” (500ug/ml):
Paso 1
Pesamos 25mg de Llevamos a una fiola Obtendremos 50ml de
clorhidrato de de 50ml y enrazamos clorhidrato de
tetraciclina con HCl 0,1N hasta el tetraciclina
Equivalente a aforo.
Equivalente a
25000ug 500ug/ml
Preparación de la solución “B” (50ug/ml):
Paso 2
Llevamos a una fiola de Obtendremos 50ml de
Medimos de la 50ml y enrazamos con clorhidrato de
solución A 5ml HCl 0,1N hasta el aforo. tetraciclina
Equivalente a Equivalente a
2500ug 50ug/ml
Preparación de la solución “C” (8ug/ml):
Paso 3
Llevamos a una fiola de Obtendremos 25ml de
Medimos de la
25ml y enrazamos con clorhidrato de
solución A 4ml
HCl 0,1N hasta el aforo. tetraciclina
Equivalente a Equivalente a
200ug 8ug/ml
Concentración
óptima
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 5
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
2. Una vez hecho el estándar, procedemos a preparar la muestra.
Dentro del rango de concentraciones óptimas en la curva de calibración,
podemos escoger cualquiera, pero en este caso prepararemos una solución de 8
μg/ml.
MUESTRA
Preparación de la solución A (534ug/ml):
Paso 1
Pesamos 26.7mg de Llevamos a una fiola Obtendremos 50ml
clorhidrato de de 50ml y enrazamos de clorhidrato de
tetraciclina con HCl 0,1N hasta el tetraciclina
aforo.
Equivalente a Equivalente a
26700ug 534ug/ml
Preparación de la solución B (53.4ug/ml):
Paso 2
Llevamos a una fiola
de 50ml y enrazamos Obtendremos 50ml
Medimos 5ml de la
con HCl 0,1N hasta el de clorhidrato de
solución A.
aforo. tetraciclina
Equivalente a Equivalente a
2670ug 53.4ug/ml
Preparación de la solución C
(8.544ug/ml):
Paso 3
Llevamos a una fiola
Obtendremos 25ml
Medimos de la de 25ml y enrazamos
de clorhidrato de
solución A 4ml con HCl 0,1N hasta el
tetraciclina
aforo.
Equivalente a Equivalente a
213.6ug 8.544ug/ml
Concentración
óptima
3. Terminada ya la preparación de las soluciones, hacemos la lectura
correspondiente de las concentraciones en el espectrofotómetro.
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 6
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
1 2
En el
espectrofotómetro,
cambiamos el modo de
análisis a Absorbancia.
Vaciamos la solución Colocamos las celdas:
estándar (8 μg/ml) y el • HCl 0,1N: B (blanco)
HCl 0,1N en celdas y • Estándar: “1”
secamos la superficie Luego, cerramos.
con papel tisú.
3
Hacemos la lectura del
Obtendremos
estándar (8mg/ml) en el A 0.286
espectrofotómetro, con 270
nm como longitud óptima. 270nm
4
Hacemos lo mismo con la
muestra (8,544 μg/ml) Obtendremos A 0.233
teniendo como blanco al HCl
0,1N 270nm
IV. RESULTADOS
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 7
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DATOS:
Absorbancia de la solución 0.286
estándar
Absorbancia de la muestra 0.233
problema
[ estándar ] (ug/ml) 8
Factor de dilución (ml/g) 117041.1985
Peso promedio (g) 0.6330
Para la cuantificación de la concentración de tetraciclina (cápsula) se aplicó la
siguiente fórmula:
[ tetraciclina ] A . MP .
= ∗[ stn. ]∗FD∗ppcápsula
capsula A . stn .
Dónde:
[ tetraciclina ]
: concentración de tetraciclina por cápsula
capsula
A . stn. : absorbancia de la solución estándar
A . MP. : absorbancia de la muestra problema
[ stn . ] : concentración de la solución estándar
FD : factor de dilución
ppcápsula : peso promedio de cápsula
Reemplazando en la fórmula:
[ tetraciclina ] 0.233 . 8ug
capsula
= ∗
0.286 [ ]
∗117041,1985 ml /g∗0.6330 g =482861.2399ug/ml
ml
Como el resultado está en microgramos lo pasaremos a miligramos:
[ tetraciclina ]
=482.8612 mg
capsula
Cálculos según lo declarado por el fabricante:
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 8
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
500mg --------------100%
482.8612mg --------- x
x=96.57224 %
DISCUSION DE RESULTADO:
Según la Farmacopea de los Estados Unidos (USP 37), para analizar la absorción
de la tetraciclina se usa una longitud de onda de 276 nm, mientras que en la
práctica realizada usamos una longitud de onda de 270 nm; según el libro
‘Fundamentos de la espectroscopia UV-visible moderna’, la exactitud de la
longitud de onda es importante, debido a que a una longitud de onda distinta se
generan pequeños errores en la lectura de la absorbancia7.
Al calcular la concentración de tetraciclina por capsula a partir de una solución
estándar de concentración 8 μg/ml se halló que la capsula de tetraciclina de 500
mg posee una concentración de 482.8612mg de tetraciclina por capsula, lo cual
representaría un porcentaje de 96.57224% del peso total de la capsula. Según la
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, la tolerancia para la variación de
masa de tabletas con o sin recubrimiento, en caso de una masa mayor a 324 mg
puede haber una diferencia porcentual hasta del 5 %; por lo cual, la
concentración de tetraciclina que hallamos seria correcta8.
CONCLUSIONES:
Concluimos que debe verificarse que no existan interferencias que
comprometan la exactitud del resultado analítico, para ello se minimizan
utilizando el método del estándar interno, la compatibilización de matrices o el
método de adición de estándar. Se concluyó que el rango de porcentaje de
aceptación de un fármaco (USP) no es el mismo para otro fármaco, así tenga el
mismo principio activo, es decir, el rango de aceptación cambia con respecto
a todos los componentes del fármaco (principio activo y excipientes). El método
del patrón externo nos permite realizar análisis con mayor exactitud ya que solo
se trabaja con 2 muestras y el error instrumental se omite ya que ambas se
pueden analizar bajo las mismas circunstancias.
El método de patrón externo ayuda analizar con precisión la
concentración de dos muestras.
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 9
[Método por comparación con un estándar] Dr. Norma Carlos Casas
Se realizó la cuantificación de tetraciclina clorhidrato por el método
espectrofotométrico en una muestra de cápsula de tetraciclina
clorhidrato dando un 96.57224 % de [ ] de m. p que hay en la muestra.
Con el método espectrofotométrico se determinó que la concentración y
absorbancia de la muestra estándar debe ser proporcional a la
concentración y absorbancia de la muestra problema.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Campillo Seva N. Introducción al análisis químico. Análisis
[Link] de Murich. 2012. pág. 8.
2. D. C. Harris, “Análisis químico cuantitativo”, 6ta Edición, Reverte, España.
2007
3. Harris. Análisis Químico Cuantitativo. 3ra ed. Ed. Barcelona: Reverté;
2007. Pag.88
4. Hernández L, González C .Introducción al análisis instrumental .1ra
[Link]:Ariel;[Link].23-4
5. Sánchez Palacios, M. Métodos de Calibrado. Departamento de Química.
Mérida, Venezuela. 2012; 13-18 pág.
6. Skoog D, Holler F, Nieman T. Principios de Análisis Instrumental 5ª ed.
Madrid: Editorial Mc Graw-Hill, 2001. P. 11-3
7. Farmacopea de los Estados Unidos de America Formulario Nacional. 32°
Edicion, 2014. Vol. II
8. Tony O. Fundamentos de la espectroscopia UV-visible moderna. 1°
Edición. Alemania, Berlin: Agilent Technologies: 2000.
PRÁCTICA N° 4 |LABORATORIO DÍA MIÉRCOLES DE 10 – 2 PM 10
