TINCIÓN
Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos
que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes
colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de
tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares
(por ejemplo clasificando diferentes células sanguíneas) o incluso para resaltar organelas
dentro de células individuales.
TINCIÓN COMPUESTA (O DIFERENCIAL)
Aunque existen múltiples tipos de tinciones, aquí vamos a referirnos a los dos métodos
decoloración compuesta más comúnmente empleados en la práctica corriente del laboratorio
demicrobiología: la tinción de Gram y la de Ziehl-Neelsen. Estas coloraciones permiten diferenciar
las bacterias incluso cuando tienen igual forma y tamaño, por esta razón es una“tinción diferencial”.
TINCIÓN DE GRAM
Elaborada por Hans Christian Gram en 1884, es la más empleada en bacteriología. Las etapas a seguir se detallan en
la Tabla 1.Aunque no totalmente aclarada, la propiedad de la gram positividad depende de la naturaleza y
composición química de la pared o parte de ella. Se han propuesto varias teorías para su
explicación, pero la más aceptada es la que sostiene que las bacterias gram negativas son más
permeables al alcohol debido a su alto contenido en lípidos. Cuando la bacteria se tiñe con el complejo
colorante básico-mordiente, éste queda atrapado en las bacterias gram positivas y no puede ser
arrastrado por el decolorante a causa de la naturaleza físico-química de su pared. Por el contrario, en
las gram negativas es arrastrado debido a su alto contenido lipídic.
TINCIÓN SIMPLE
Se entiende por tinción (o coloración) simple al teñido de los microorganismos aplicando sólo una solución
colorante. Este tipo de tinciones pueden ser positivas o negativas.
La coloración positiva es la tinción de los microorganismos, efectuada con colorantes básico,
poseen afinidad por los constituyentes celulares y se combinan químicamente con el citoplasma
microbiano. Técnica: La coloración consiste en cubrir el frotis, después de fijado, con la solución
colorante y se deja actuar el tiempo preciso. Luego se lava con agua y se deja secar.
•Con fucsina básica: se diluye 1/10 la solución de uso (fucsina fenicada de Ziehl) y sedeja actuar 30
a 60 segundos.
•Con violeta de genciana: se diluye al 1/10 la solución de uso y se deja actuar 30 a 60segundos.
•Con azul de metileno: se cubre el preparado con la solución de uso (azul de metileno alcalino de
Loeffler) sin diluir y se deja actuar 3 a 5 minutos. El azul de metileno es el colorante más débil de
los tres, razón por la cual se usa más concentrado y se deja actuar durante más tiempo. También a la
solución de azul de metileno de uso se le agrega un álcali (KOH) como intensificante, que actúa
haciendo más rápida e intensa la reacción de coloración. Generalmente como intensificante se usa
un álcali para un colorante básico y un ácido para un colorante ácido. Debido a que el protoplasma
bacteriano tiene una débil carga negativa que aumenta al aumentar el pH, se explica que en medios alcalinos las
coloraciones de bacterias se hagan más intensas.
AZUL BRILLANTE DE COOMASSIE
Coomassie blue (también conocido como azul brillante) es un colorante que tiñe en forma no
específica a todas las proteínas con un fuerte color azul. Se utiliza frecuentemente para teñir las
corridas de proteínas en las electroforesis en gel.
Azul de metileno
Azul de metileno se utiliza para teñir células animales, para hacer más visibles sus núcleos. Es
también utilizado para teñir los extendidos de sangre para ser utilizados en citología y como
colorante vital en el recuento de reticulocitos.
AZUL NILO
El Nile blue (o Nile blue A), es decir azul Nilo, tiñe a los núcleos de color azul. También puede ser
utilizado para teñir células vivas.
BISMARCK BROWN
Bismarck brown, Marrón Bismarck, (también conocido como Bismarck Brown Y o Manchester
Brown) le imparte un color amarillo a las mucinas ácidas. Se puede utilizar con células vivas.
BROMURO DE ETIDIO
El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja fluorescente. A
pesar de que no es capaz de teñir células vivas ya que no atraviesa las membranas intactas, puede
ser utilizado para identificar células que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis, ya que
tales células poseen unas membranas mucho más permeables. Por el mismo motivo, el bromuro de
etidio es utilizado como un marcador de apoptosis en poblaciones celulares y para localizar las
bandas de ADN en una corrida en electroforesis en gel. Este colorante puede ser utilizado en
combinación con naranja de acridina (NA) en el conteo de células viables. Esta tinción combinada
BE/NA le otorga a las células vivas un color verde fluorescente mientras que las células apoptóticas
aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja.
CARMÍN
El carmín es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para
teñir glicógeno, mientras que las sales de alumbre-carmín son colorantes que se adhieren al núcleo.
Las tinciones con carmín requieren del uso de un mordiente, que usualmente es aluminio o alumbre.
CRISTAL VIOLETA
El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tiñe las paredes celulares de color
púrpura. El cristal violeta es un componente importante en la coloración de Gram.
DAPI
El DAPI es un colorante nuclear (tiñe el núcleo) fluorescente, se excita con luz ultravioleta para
producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN. El DAPI se une a las
regiones de alta repetición A=T en los cromosomas. Además no es visible cuando se utiliza con un
microscopio de transmisión corriente. Puede ser utilizado en células vivas o fijadas. La técnica de
tinción con DAPI es especialmente adecuada para el recuento celular. [6]
EOSINA
La eosina se utiliza más frecuentemente como contra coloración de la hematoxilina, impartiendo un
color que va del rosado al rojo al material citoplasmático, membrana celular, y algunas estructuras
extracelulares. Además imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada
también en algunas variantes de la coloración de Gram, y en muchos otros protocolos de tinción. De
hecho existen dos compuestos muy estrechamente relacionados (aunque no iguales) conocidos
como eosina. El más frecuentemente utilizado es la eosina Y (también conocida como eosina
amarillenta) ya que posee una tonalidad amarillenta muy suave. El otro compuesto conocido como
eosina es la eosina B, también conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual posee una
suave tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables, y el la utilización de uno u otro es
más una cuestión de preferencia y tradición.
