Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Práctica No. 11. “Reacciones enzimáticas de oxido-reducción.
Succinato deshidrogenasa (SDH)"
Granados Rivas Brenda, Pérez Cabrera Ana Karen
3FM1 Laboratorio de Bioquímica
c
Introducción Discusión de resultados
La enzima succinato deshidrogenasa es una enzima La reacción que se lleva a cabo es la oxidación del
tipo oxido-reductasa que se localiza en la membrana succinato a fumarato concomitante con la reducción
interna mitocondrial de la célula. Participa en el ciclo de FAD a FADH2, el cual es el cofactor de esta
de Krebs oxidando el succinato a fumarato. reacción, mediante la enzima succinato
deshidrogenasa, la cual puede ser inhibida por el
malonato. Al oxidarse el succinato pierde electrones
que son recibidos por el cofactor FAD. El azul de
metileno al inicio de la reacción se encuentra oxidado
por lo que presenta un color azul al ser reducido
presenta una coloración blanca (leucobase), al
L llevarse a cabo la reacción de oxido reducción los
tubos presentaron decoloración ya que es el aceptor
El malonato es un inhibidor competitivo de la reacción final de los electrones por lo que se redujo, el aceite
de la succinato deshidrogenasa y bloquea la vegetal se emplea como sellador ya que impide que el
transformación del succinato a fumarato. Tiene oxigeno entre al tubo evitando así la reoxidación del
estructura semejante al succinato. azul de metileno.
Objetivos En el tubo 1 presento decoloración debido a que
perdió el color azul tornándose de color rojo rosado al
❖ Poner de manifiesto la actividad de la enzima cabo de varios minutos, esto se debe a que el tubo
succinato deshidrogenasa (SDH), así como su contenido todo lo necesario para que se efectuara la
Se anexan
grupograficas de los
prostético integrantes
FAD. reacción, ya que tenía succinato el cual sirvió de
❖ Poner de manifiesto que la actividad de la SDH se sustrato que mediante la enzima SDH se oxido a
puede inhibir. fumarato, el FAD se redujo a FAD2 motivo por el cual
❖ Utilizar el Malonato como inhibidor y determinar el azul de metileno se redujo el cual se pone de
qué tipo de inhibidor es. manifiesto perdiendo su coloración azul característico,
el color rojo rosado que se presento al final se debe a
Resultados que es el color del extracto que se empleó el cual
contiene la enzima y el cofactor FAD.
Tabla de resultados El tubo 2 en cambio no presento ningún cambio de
coloración debido a que a este tubo no se le agrego el
Tubo Contenido Color Decoloración extracto que contiene a la enzima SDH por lo que el
inicial azul de metileno no tendrá los electrones que le
1 Tiene todo Azul +++++ permitan oxidarse por lo que se mantendrá oxidado
2 No tiene SDH Azul No reacción conservando su coloración azul, con este tubo nos
3 No tiene Azul + podemos dar cuenta de la actividad de la enzima y del
succinato cofactor FAD ya que sin ellos la reacción no se lleva a
4 Tiene 1 mL de Azul No reacción cabo.
Malonato En el tubo 3 no contenía succinato el cual es el
5 Tiene 0.5 mL Azul ++ sustrato de la reacción por lo que se esperaba que no
de Malonato hubiera reacción debido a que la enzima SDH no
6 Tiene 0.25 mL Azul +++ tendría succinato que oxidar, sin embargo, mostro
de Malonato muy poca decoloración en el tubo debido a que se
7 Tiene 0.25 mL Azul ++++ empleo un extracto crudo que contiene a la enzima y
de Malonato al cofactor FAD, este extracto al ser crudo también
+ 1 mL de contenía succinato endógeno por lo que ese succinato
succinato. fue el que se oxido poniéndose de manifiesto en la
poca decoloración en el tubo.
l ❖ El cofactor FAD es un grupo prostético ya que
En el 4 no se presentó decoloración ya que no se
efectuó la reacción debido a que se le agrego un 1 mL se une covalente a la enzima y se obtiene del
de malonato, el cual funge con inhibidor de la enzima mismo extracto que la enzima
SDH, al adicionarse el malonato competirá con el
succinato por unirse a la enzima ya que ambos tienen Bibliografía
estructuras similares, al haber mas cantidad de
inhibidor que de sustrato la reacción de oxido-
❖ Voet D, Voet J. 2006. Fundamentos de
reducción no se efectúa, por ello el azul de metileno
conserva su coloración azul de oxidación. Bioquímica. 2ª edición. Editorial Médica
El tubo 5 contiene el mismo contenido de inhibidor Panamericana. Madrid, España. 1176p.
(malonato) que de sustrato por lo cual se presento ❖ Herráez A. 2019. Complejo II en el transporte
muy poca decoloración esto se debe a que al igual que electrónico mitocondrial. Disponible en línea en:
en el tubo 4 el inhibidor compite con el succinato por http://biomodel.uah.es/metab/mitoc/mitoE_cII.html
unirse a la enzima por lo que el succinato que logro (Consultado el 26 de diciembre de 2020).
unirse a la enzima permitió que se llevara a cabo la ❖ McKee T, McKee JR. 2003. Bioquímica. La base
reacción de oxido-reducción poniéndose de manifiesto molecular de la vida. 3ª edición. Editorial
con la poca de coloración presentada en el tubo por la McGrawHill/Interamericana de España. Madrid,
reducción del azul de metileno. España. 794 p.
En el tubo 6 se presento mayor decoloración que en le
tubo 5 debido a que contiene 0.25 mL de malonato por Anexo
ello menos moléculas de malonato compitieron con el
succinato por unirse a la enzima, por ello hubo menos Se anexa imágenes de los tubos al cabo de 2 min y 30
inhibición de la enzima efectuándose en mayores min.
cantidades la reacción de oxido-reducción lo que
provocaron que más moléculas de azul de metileno se 2 min
redujeran perdiendo mas decoloración que el tubo 5.
El tubo 7 contiene la misma cantidad de malonato que
el tubo 5 pero a su vez contiene 1.0 ml de sustrato por
ello presento decoloración similar al tubo 1 que no
contenía inhibidor, esto se debe a que, aunque exista
inhibidor, en el medio habrá muchas más moléculas
de succinato que la enzima SDH oxida mediante la
reacción de oxido reducción, por ello el azul de
metileno se redujo en mayores cantidades
presentando mayor decoloración en el tubo pero no
mayor al tubo 1, con este tubo nos percatamos que al
aumentar al doble la cantidad de sustrato se revierte
el efecto del inhibidor (malonato).
Conclusiones
30 min
❖ La enzima succinato deshidrogenasa (SDH)
permite que se lleve a cabo la reacción de oxido-
reducción, ya que oxida el succinato a fumarato y
reduce al FAD a FADH2.
❖ El malonato es un inhibidor reversible tipo
competitivo de la enzima succinato
deshidrogenasa, debido a que tiene una estructura
similar al succinato.
❖ Se pudo visualizar la actividad enzimática gracias
a la presencia del identificador azul de metileno,el
cual pone de manifiesto la reacción de oxido-
reducción ya que si esta se efectúa, pierde su
coloración azul tornándose de color blanco.
❖ Al aumentar al doble la cantidad de sustrato se
revierte el efecto del inhibidor (malonato).
.
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Práctica No. 11 “Reacciones enzimáticas de oxido-reducción.
l Citocromo oxidasa"
Granados Rivas Brenda, Pérez Cabrera Ana Karen
3FM1 Laboratorio de Bioquímica
c
polimerizo provocando la coloración café final que
Introducción
presenta el tubo.
La citocromo oxidasa pertenece a la cadena de En tubo 2 no presenta cambio de color ya que se
transporte de electrones respiratoria de las mantiene incoloro al cabo de la reacción, esto se debe
mitocondrias situado en la membrana mitocondrial. a que no contiene al extracto crudo que contiene a la
La p-fenilendiamina sirve como donador de electrones citocromo oxidasa por lo que no hubo reacción
al citocromo oxidasa (sustrato artificial), por ello se conservándose el mismo color, este tubo no presenta
oxida a p-fenilendiimina y se polimeriza con moléculas la coloración durazno que el tubo 1 debido a que como
de la misma especie dando una coloración obscura. Si se menciono con anterioridad no se agrega el extracto
la p-fenilendiima se le agrega 𝛼-naftol se condensan crudo con la enzima, el cual es el responsable de
presentando una coloración morada. otorgarle ese color durazno característico.
El Cianuro (CN-) inhibe de manera irreversible el El tubo 3 presenta un ligero cambio de color ya se
metabolismo aeróbico al unirse al hemo binuclear del torna mas opaco, esto se debe a que el tubo además
citocromo oxidasa c (CcO). El cianuro, sulfuro, azida, de contener a la enzima y al sustrato artificial contiene
y el monóxido de carbono se unen todos al citocromo KCN el cual se un inhibidor de tipo irreversible por lo
c oxidasa, por lo tanto, inhibiendo la proteína de que no permite que se lleve a cabo la reacción por ello
funcionamiento, lo que resulta en asfixia química de se justifica el poco cambio de color.
las células. El metanol en alcohol metílico se convierte En el tubo 4 no se muestra cambio de color ya que al
en ácido fórmico, que también inhibe el mismo sistema cabo del tiempo de reacción se conservo el mismo
oxidasa. color durazno esto se debe a que no se agregó el
sustrato artificial, por ello la enzima citocromo oxidasa
Objetivos no tendrá p-fenilén diamina que oxidar y no se
presentará ningún cambio de coloración.
❖ Poner de manifiesto la actividad de la citocromo El análisis de estos primero cuatro tubos nos permitió
oxidasa manifestar la actividad de la enzima citocromo oxidasa
❖ Observar el efecto que tiene el KCN sobre la
y del inhibidor KCN ya que si comparamos los cuatro
citocromo oxidasa. tubos en el primero se efectuó la reacción, debido a la
❖ Esta reacción se lleva entre 2-3 minutos. presencia de la enzima y la ausencia de inhibidor, en
Resultados el segundo no hay reacción debido a la ausencia de la
enzima, en el tercero casi no hay reacción ya que se
Tabla de Resultados agrega el inhibidor y en el cuarto tampoco haya
Tubo Contenido Color inicial Color final reacción ya que la enzima no tiene sustrato que
1 Tiene todo Durazno Café oxidar.
2 No SDH-CIT Incoloro Incoloro
3 KCN Durazno Melón A los tubos 5,6,7, y 8 se les agrego el indicador 𝛼-
4 No p-fenilén Durazno Durazno naftol el cual junto con la p-fenilendiimina forman un
diamina complejo llamado azul de indofenol, el cual se pone de
manifiesto ya que se presenta una coloración morada.
5 * Durazno Morado El tubo 5 presenta una coloración final morada debido
6 No SDH-CIT* Incoloro Incoloro a que la enzima citocromo oxidasa oxida a la p-fenilén
7 KCN* Durazno Durazno diamina produciendo p-fenilendiimina y como se
8 KCN/No SDH- Incoloro Incoloro menciona con anterioridad este producto junto con 𝛼-
CIT* naftol se condesa presentando una coloración morada
*Tubos que contiene 0.1 mL de 𝛼-naftol 0.15% por ello se justifica la coloración final del tubo.
El tubo 6 no contiene a la enzima citocromo oxidasa
Discusión de Resultados
por ello no se efectuó la reacción y no se formó la p-
El tubo 1 que contiene a la enzima citocromo oxidasa fenilendiimina que se uniera al α-naftol para adquirir el
(CIT) y al sustrato artificial p- fenilén diamina paso de color morado, el tubo es incoloro debido a que no se
un color inicial durazno a un color café, esto se debe a agregó extracto por lo que no presento el color
que la enzima citocromo oxidasa oxido a la p-fenilén durazno inicial de algunos tubos ya que solo se
diamina a p-fenilendiimina la cual posteriormente se manifiesta la coloración del sustrato p-fenilén diamina
pol
el cual puede ser incoloro o lila. Anexo
En el tubo 7 al igual que en el tubo 6 no se presento
cambio de coloración debido a que se le agrego al Se anexan imágenes de los colores iniciales y de los
tubo el inhibidor KCN el cual no permite que se lleve a colores finales presentes en cada tubo.
cabo la reacción ya que es un inhibidor irreversible que
se une a la enzima bloqueando al sitio activo evitando Colores iniciales
así la oxidación de la p-fenilén diamina, por tal motivo
se justifica que se siguió conservando el color durazno
adquirido por el extracto crudo que contiene a la
enzima.
El tubo 8 al cabo del tiempo de reacción no se mostró
ningún cambio en la coloración del tubo esto se debe
a que además de contener al inhibidor KCN que no
permitirá que se lleve a cabo la reacción, no contiene
al extracto que tiene la enzima por ello no hubo
Colores finales
reacción y se siguió conservando la misma coloración
inicial la cual es la del sustrato p-fenilén diamina.
Los tubos 5, 6 ,7 y 8 nos permitieron además de poner
de manifiesto la actividad de la enzima citocromo
oxidasa y del inhibidor KCN, la actividad del indicador
𝛼-naftol ya que sin la presencia de este la p-
fenilendiimina no podría formar el azul de indofenol
que se manifiesta de color morado.
Conclusiones
❖ La enzima citocromo oxidasa oxida al sustrato
artificial p-feniléndiamina formando p-
fenilendiimina.
❖ La p-fenilendiimina se puede polimerizar
tornándose de color café o condensarse
presentando un color gris.
❖ La p-fenilendiimina condensada se pone de
manifiesto agregando 𝛼-natol ya que forma el azul
de indofenol, mostrando un color morado.
❖ El KCN es un inhibidor irreversible de la citocromo
oxidasa y se debe tener cuidado con su manejo en
el laboratorio.
Bibliografía
Mathesws CK, et al. 2002. Bioquímica. 3ª edición.
Editorial Pearson Educación. Madrid, España.
Deylin TM. 2004. Bioquímica. 4ª edición. Editorial
Reverté. Barcelona, España.
