Prácticas de Bioquímica Mgr.
Soledad Bornás Acosta
PRÁCTICA 7
CATABOLISMO DE
CARBOHIDRATOS
(FERMENTACIÓN)
1. INTRODUCCIÓN
La fermentación alcohólica es una bioreacción que permite degradar azúcares en
alcohol y dióxido de carbono.
La conversión se representa mediante la ecuación:
C 6 H 12 O6 → 2C 2 H 5 OH +2 CO 2
Las principales responsables de esta transformación son las levaduras.
La Saccharomyces cerevisiae, es la especie de levadura usada con más frecuencia.
Por supuesto que existen estudios para producir alcohol con otros hongos y
bacterias, como la Zymomonas mobilis, pero la explotación a nivel industrial es
mínima.
A pesar de parecer, a nivel estequiométrico, una transformación simple, la
secuencia de transformaciones para degradar la glucosa hasta dos moléculas de
alcohol y dos moléculas de bióxido de carbono es un proceso muy complejo, pues
al mismo tiempo la levadura utiliza la glucosa y nutrientes adicionales para
reproducirse. Para evaluar esta transformación, se usa el rendimiento
biomasa/producto y el rendimiento producto/ substrato.
– Rendimiento biomasa/substrato (Yx/s): es la cantidad de levadura producida por
cantidad de substrato consumido.
– Rendimiento substrato/producto (Yp/s): es la cantidad de producto sintetizado por
cantidad de substrato consumido.
El rendimiento teórico estequiométrico para la transformación de glucosa en etanol
es de 0.511 g de etanol y 0.489 g de CO 2 por 1 g de glucosa. Este valor fue
cuantificado por Gay Lussac. En la realidad es difícil lograr este rendimiento, porque
como se señaló anteriormente, la levadura utiliza la glucosa para la producción de
otros metabolitos. El rendimiento experimental varía entre 90% y 95% del teórico,
es decir, de 0.469 a 0.485 g/g. Los rendimientos en la industria varían entre 87 y
93% del rendimiento teórico (Boudarel, 1984). Otro parámetro importante es la
productividad (g/h/l), la cual se define como la cantidad de etanol producido por
unidad de tiempo y de volumen.
Los parámetros aquí mencionados se definen con relación a la fase y al modo de
funcionamiento del bioreactor o fermentador. Por lo general, un bioreactor es un
recipiente cilíndrico de doble pared, de vidrio o de acero inoxidable (para el control
de la temperatura y esterilización en línea), cubierto de una platina de acero
inoxidable. La platina está dotada de entradas y salidas que permiten agregar
substratos, nutrientes y substancias como ácidos o bases, extraer productos, o
bien, hacer mediciones en línea. La platina permite acoplar un sistema de agitación
para mantener la homogeneidad y facilitar, en su caso, la transferencia de oxígeno
y nutrientes.
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2. OBJETIVOS
Observar experimentalmente los fenómenos de respiración celular anaeróbica
(fermentación) en levaduras.
Comprobar el efecto de inhibidores de la glucólisis y de la respiración celular.
Aplicar los conceptos de sustrato, inhibidores, oxido-reducción en la interpretación
de sus resultados.
3. MATERIAL Y METODOS
3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales biológicos
Suspensión de levaduras al 7%
3.1.2. Materiales de vidrio
Tubos de ensayo
Pipetas
Frascos de penicilina
Vasos de precipitación
3.1.3. Reactivos
Glucosa 0,1 M
NaF 0,1 N
Rojo Neutro 0,02 M
H2O destilada
3.1.4. Equipos y otros
Cocina
Regla
Guantes
3.2. METODOS
Mediante la observación y exploración se aplicará el método de fermentación que nos
demuestra la cantidad de CO2 generado.
4. PROCEDIMIENTO
4.1. Fermentación alcohólica en levaduras (Sccharomyces cerevisiae).
En 4 tubos de ensayo medir lo siguiente:
1 2 3 4
Suspensión de levaduras al 7% 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Solución de glucosa 0,1 M 1mL 1 mL
Solución NaF 0,1 M 1 mL
H2O destilada (43 °C) 2 mL 1 mL
Solución de rojo neutro 0,02 M 1 mL
Agitar por inversión para homogenizar el contenido de cada tubo.
Tapar cada tubo con un frasco de penicilina invertido, presionando y girando
rápidamente, de manera que el tubo quede invertido dentro del frasco.
Marcar el nivel de la burbuja en la parte superior del tubo.
Poner a incubar los tubos en un baño María a 43°C por 30 minutos.
Medir el volumen de gas producido con una regla.
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5. RESULTADOS
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CO2 CO2
Anotar y discutir sus resultados.
Tubo 1: Es un tubo control el cual no lleva glucosa, por lo tanto no produce
CO2.
Tubo 2: Se llegó a producir 2.5mm, este contiene levadura, glucosa y agua
destilada, resultando así la fermentación. Vemos el CO2, este es un
proceso de
descarboxilación.
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Tubo 3: En este tubo al igual que el primero, no hay fermentación porque
no hay nutriente, es decir, no contiene glucosa.
Tubo 4: Se produjo 2.4mm, se le agregó este tubo contiene levadura,
glucosa y rojo neutro como colorante pero también como indicador de pH,
este es un colorante supra vital, influye en la levadura, esta última capta el
rojo neutro y lo torna de color rojo, indicando su viabilidad
Finalmente se obtiene el CO2.
CO 2+ H 2 O→ H 2 CO 3
Para que genere CO2 debe añadirse la glucosa, ya que esta es necesaria
para que se lleve a cabo la glucólisis y la fermentación, la glucosa es la
fuente de energía esta le dará el componente metabólico que es necesario
para estas reacciones.
6. CONCLUSIONES
- Se observó que las células extraen energía de la glucosa en ausencia de
oxígeno, en la levadura estas reacciones aeróbicas producen alcohol.
-
-
7. CUESTIONARIO
7.1. ¿Qué función cumple NaF en la fermentación alcohólica en levaduras?
La fermentación no se llevara a cabo por la presencia del NaF el cual frena el
proceso de reacciones de la glucolisis, en su etapa 9 al inhibir la
enzima enolasa, cuya función es la deshidratacion del 2PG a fosfoenolpiruvato
(PEP) formando un complejo activo por la presencia del catión Mg y como
consecuencia final no se obtuvo el piruvato en la etapa 10, que en fermentación
alcohólica las levaduras lo transforman en alcohol etílico.
7.2. ¿Qué importancia tiene el uso de rojo neutro en el experimento?
Es uno de los colorantes más usados en experimentos de citotoxicidad puesto
que sólo las células vivas lo incorporan, pero no aquellas que están muertas o
muriendo. Por último, se utiliza como indicador de pH puesto que cambia de
rojo a amarillo a pH entre 6.8 y 8.
7.3. ¿Cómo evidenciamos la fermentación alcohólica en levaduras? Explique.
La fermentación alcohólica es un proceso anaeróbico realizado por
las levaduras y algunas clases de bacterias. Estos microorganismos
transforman el azúcar en alcohol etílico y dióxido de carbono. La
fermentación alcohólica, comienza después de que la glucosa entra
en la celda. La glucosa se degrada en un ácido pyruvic. Este ácido
pyruvic se convierte luego en CO2 y etanol .
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7.4. ¿Cómo se aprovecha la fermentación alcohólica en la industria?
Industrialmente, el etanol resultante de la fermentación alcohólica se emplea
en la elaboración de algunas bebidas alcohólicas como el vino, la cerveza, la
sidra, el cava, etc.
La fermentación alcohólica tiene como finalidad biológica proporcionar
energía anaeróbica a los microorganismos unicelulares (levaduras) en
ausencia de oxígeno.
8. BIBLIOGRAFIA
- Boudarel M.J.(1984). Contribution á l'étude de la Fermentation Alcoolique
á partir de jus de Betteraves avec. Saccharomyces cerevisiae. Thèse de
Doctorat. Université de Dijon, Francia.
- http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-
77432007000400004
REFERENCIAS DEL CUESTIONARIO
- http://bioquimica-easy.blogspot.com/2018/02/naf-es-un-potente-inhibidor-de-
la.html#:~:text=la%20fermentaci%C3%B3n%20no%20se%20llevara,y%20como
%20consecuencia%20final%20no
- https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/protocolos/s-colorante-rojo-
neutro.php#:~:text=Es%20uno%20de%20los%20colorantes,pH%20entre
%206.8%20y%208
- https://www.argentina.gob.ar/sites/default/files/cinetica_de_la_fermentacion_alcoholi
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- http://www.garciacarrion.es/es/vinos-garcia-carrion/pregunta-al-enologo/que-es-la-
fermentacion-alcoholica#:~:text=El%20etanol%20resultante%20de%20la,levaduras)
%20en%20ausencia%20de%20ox%C3%ADgeno.
