MEDIOS DE CULTIVO: COMPONENTES, CLASIFICACIÓN
Para permitir el crecimiento de microorganismos en el laboratorio, es necesario aportarles un medio con nutrientes y
condiciones fisicoquímicas adecuadas para su desarrollo. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores
de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.
Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. La diversidad metabólica de los
microorganismos es muy amplia; por ello, la variedad de medios de cultivo es también muy grande, no existiendo un
medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.
La gran diversidad metabólica que tiene este conjunto de organismos explica la amplia gama de medios de cultivo
que existen en el mercado
Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento, la reproducción y la identificación de los microorganismos.
CONDICIONES GENERALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Disponibilidad de nutrientes adecuados Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha
de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que
tengan lugar. Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los microorganismos (tales como
aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes, vitaminas, minerales).
pH La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La
mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o
menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.
Tener un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo general las bacterias patógenos necesitan un pH neutro o
ligeramente alcalino (7.0 – 7.4), en cambio las levaduras y hongos requieren un pH ácido (5.0).
Esterilidad del medio Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición
de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de
los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave.
Estar protegidos de la contaminación ambiental por tapones de algodón cardé, tapones de goma, tapas
metálicas o roscas.
Temperatura Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43 oC. Otros
como los psicrófilos crecen a 0 oC y los temófilos a 80 oC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En
líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de
37 oC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.
Luz ambiental La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz
solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.
Ajuste en la tensión de oxígeno: es importante en la selección de aerobios y anaerobios.
COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los componentes de un medio de cultivo dependen del microorganismo que se pretende cultivar y de la finalidad del
cultivo.
AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar bacteriológico el
componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas. Un gel de agar al 1-2% se licua
alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza. Con la excepción de
algunos microorganismos marinos, el agar no es empleado como nutriente por las bacterias. El agar-agar es un
polisacarido de galactosa y galactomanano que se obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria).. Otra
ventaja que ha hecho del agar el gelificante más adecuado en el cultivo de microorganismos es el escaso número de
organismos que tienen capacidad para degradarlo. El aspecto de barra transparente con el que se comercializa
el agar-agar, es el resultado de su liofilización y deshidratación
EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hígado,
cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o
polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más
utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta. Se utilizan de forma deshidratada. Existen preparados
comerciales (infusiones o extractos) obtenidos a partir de tejidos animales como cerebro, corazón o hígado. Todos
estos productos contienen los componentes básicos necesarios para el crecimiento de microorganismos. Los
extractos más habituales son:
-Extracto de Carne: contiene bases orgánicas solubles, vitaminas y minerales
-Extracto de Levadura: es fuente de aminoácidos y de vitaminas del complejo B.
PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por
digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy
ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales.
FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de algunos patógenos sustancias
como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer
aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en
condiciones asépticas directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo después del proceso con el
autoclave. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que también aportan sustancias que
neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa presente en las
células sanguíneas destruye el peróxido de hidrógeno que algunas bacterias que no poseen este enzima acumulan
como producto del metabolismo del oxígeno.
SISTEMAS AMORTIGUADORES. Son incorporados al medio de cultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo
de crecimiento, a veces, es necesario añadir algunos componentes al medio de cultivo. Por ejemplo, suelen usarse
como tampones los fosfatos disódicos (Na2HPO4) o monosódicos (NaH2PO4).
INDICADORES DE PH. Son compuestos que presentan una coloración diferente según la acidezbasicidad del medio
Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros procesos. Se añaden a
menudo a los medios de cultivo para detectar variaciones de pH. Los indicadores de pH se añaden con frecuencia a
los medios de cultivo para poner de manifiesto ciertas propiedades bioquímicas.
Como consecuencia de la fermentación de un azúcar (lactosa, glucosa, xilosa, etc.) disminuye el pH del medio y se
produce un viraje del indicador.
En otros medios de cultivo pretendemos comprobar si el microorganismos es capaz de utilizar ciertas sustancias
como la urea y algunos aminoácidos. Si lo hace aumenta el pH del medio y se produce un viraje del indicador.
AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de
los gérmenes microaerofilos ò anaerobios se añaden estos agentes reductores siendo, los mas empleados la cisteina
y el tioglicolato entre otros.
AGENTES SELECTIVOS. Permiten el crecimiento de determinados microorganismos e impiden el crecimiento de
otros. La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo. Así, por ejemplo,
la adición de cristal violeta, sales biliares, azida sodica, telurito potasico, antibióticos, etc., a la concentración
adecuada hará que actúen como agentes selectivos frene a determinados microorganismos.
SUSTANCIAS ORGÁNICAS: Se pueden utilizar sustancias puras o mezclas de sustancias orgánicas Como sustancias
puras más comunes se encuentran los azúcares: Frecuentemente son utilizados como fuente de carbono y energía
por los microorganismos. Entre ellos, es común el empleo de monosacáridos como la glucosa, disacáridos como la
lactosa y polisacáridos como el almidón. Ciertas bacterias no pueden utilizar los carbohidratos como nutrientes y se
emplean otras sustancias puras (aminoácidos, ácidos grasos) o mezclas de sustancias orgánicas. Normalmente son
azúcares sencillos como, por ejemplo, glucosa, lactosa, etc.
¿Por qué existen diferentes formatos de medios de cultivo?
En los medios de cultivo sólidos, los microorganismos crecen sobre la superficie; esto permite la formación de
colonias aisladas, un paso fundamental para la identificación microbiana. Al mismo tiempo, este tipo de medios
permite un fácil acceso al microorganismo para una posterior manipulación. Si el objetivo del cultivo es
simplemente la multiplicación del microorganismo, se suelen utilizar cultivos líquidos. A continuación se citan
algunos ejemplos sobre qué formato es el más adecuado en cada caso: • Para aislar colonias: medio sólido en
placa. • Para conservar un cultivo durante un periodo de tiempo largo: agar inclinado (sólido en tubo). En este
formato los microorganismos tienen mayor disponibilidad de nutrientes. • Para detección del crecimiento
microbiano: medios líquidos
SEGÚN SU ESTADO FÍSICO
1. Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de células estresadas. En
determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios sólidos, por ejemplo en la síntesis de exotoxinas,
pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud, etc.
2. Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de colonias sobre la superficie del
medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se
diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar
Cerebro Corazón, Agar Saboureaud, etc.
3. Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor porcentaje de agar,
por lo que no solidifican totalmente a la temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS GENERALES. Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos. MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u determinado
tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás. MEDIOS SELECTIVOS. Son
aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los
demás. MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un determinado
tipo de microorganismos posee.
Medios de cultivo no selectivos enriquecidos
Estos medios estan diseñados para permitir el crecimiento de la mayoria de los gérmenes que no necesitan unas
condiciones exigentes. Los siguientes medios son algunos de los mas empleados:
Agar sangre. Los laboratorios clinicos utilizan muchos tipos de medios de cultivo agar sangre. Los medios contienen
dos componentes fundamentales: un medio basal (p. ej., soja tripticasa, infusion de cerebrocorazon, base de
Brucella) y sangre (de oveja, caballo, conejo). Se pueden afiadir varios suplementos mas para ampliar el numero de
germenes que se pueden cultivar en estos medias de cultivo.
Agar chocolate. Se trata de un agar modificado. Cuando se anade sangre o hemoglobina al medio de base calentado
se vuelve marron (de ahi su nombre). Este medio permite el crecimiento de la mayoria de las bacterias, incluidas
algunas que no crecen en el agar sangre (es decir, Haemophilus, algunas cepas de Neisseria patogenas).
Agar MuellerHinton. Se trata de un medio recomendado para estudios convencionales de sensibilidad bacteriana a
antibioticos, Su composicion esta bien definida e incluye extractos de ternera y caseina, sales, cationes divalentes y
almidon soluble necesario para que los resultados sean reproducibles.
Caldo tioglicolato. Se trata de uno de los medias de cultivo de enriquecimiento empleados para recuperar cantidades
pequerias de bacterias aerobias y anaerobias. Se emplean diversos compuestos, pero la mayoria incluyen caseina,
glucosa, extracto de levadura, cisteina y tioglicolato s6dico. El suplemento de hemina y vitamina K mejora la
recuperacion de las bacterias anaerobias.
Medios de cultivo selectivos y diferenciales
Los medios de cultivo selectivos se disenan para poder recuperar gerrnenes especificos que pueden estar presentes
en una mezcla de otros gerrnenes (p. ej., un patogeno enterico en las heces). Los medios se enriquecen con
inhibidores que suprimen el erecimiento de los gerrnenes no deseados. Estos medios se hacen diferenciales
anadiendo ingredientes especificos que permiten la identificaci6n de! germen en una mezcla (p. ej., ariadiendo
lactosa y un indicador de pH para identificar los gerrnenes que fermentan la lactosa). Los siguientes son ejemplos de
medios de cultivo selectivos y diferenciales:
Agar MacConkey. Se trata de un agar selective para las bacterias gramnegativas y diferencial para distinguir las
bacterias que fermentan la lactosa y las que no. Este medio incluye peptonas digeridas, sales biliares, lactosa, rojo
neutro y cristal violeta. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben las bacterias grampositivas. Las bacterias que
fermentan la lactosa producen acidos, que precipitan las sales biliares y provocan un color rojo del indicador rojo
neutro.
Agar sal manitol. Se trata de un medio de cultivo selective empleado para el aislamiento de estafilococos. El medio
incluye extractos de caseina y tejidos animales digeridos, extracto de ternera, manitol, sales y rojo fenol. Los
estafilococos pueden crecer en presencia de una elevada concentraci6n de sal y S. aureus puede fermentar el
manitol, lo que produce colonias de color amarillo en este agar.
Medios especializados
Se han creado muchos medias de cultivo especializados distintos para detectar gerrnenes especificos, que pueden
ser exigentes o que se presentan mezclados con muchos otros. Los mas ernpleados se describen en los capitulos
relativos a cada germen concreto de esta obra.
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