PRACTICAS DE BIOQUIMICA
E.P NUTRICION HUMANA
UNAP
APELLIDOS Y NOMBRES: FAUSTINO HUALLPA MAYLIN IVONNE
Practica N° 04
ESPECTROFOTOMETRIA
Es un método basado en una propiedad muy importante de toda molécula o compuesto químico, la de
absorber y emitir energía radiante.
La energía radiante o espectro electromagnético es un tipo de energía que se transmite por el espacio a enormes
velocidades; adopta muchas formas, siendo las más fácilmente reconocibles la luz y el calor radiante.
Manifestaciones menos evidentes son los rayos X, luz ultravioleta (UV), microondas y las ondas de radio.
La espectrofotometría es un método que nos permite medir la luz que absorbe y transmite diversas
soluciones.
Siendo:
La luz que queda en la sustancia coloreada o sea la luz absorbida, matemáticamente se representa como
ABSORBANCIA. La luz que pasa por la sustancia es la TRANSMITANCIA.
La absorbancia de luz visible, detectada por el ojo humano se aprecia por el color de las sustancias. Cuando
las radiaciones que constituye la luz, pasan por una sustancia, parte puede ser absorbida y el resto es transmitida.
OBJETIVO
* Tener habilidad y destreza en el manejo del espectrofotómetro.
MATERIALES Y MUESTRAS
* Beakers
* Tubos de ensayo
* Pipetas
* Espectrofotómetro
* Balanza analítica
* Gradillas
* Azul de Metileno
* Agua destilada
PROCEDIMIENTO
* Medir 1 ml de solución de Azul de Metileno
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* Disolver en un beaker, los 1 ml de Azul de Metileno con 20 ml de agua.
* Preparar la siguiente batería de tubos:
Soluciones Tubos de ensayo (ml)
01 02 03 04 05 06
Agua destilada 19.0 19.2 19.4 19.6 19.8 19.9
Sol. de azul de metileno 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.1
* Mezclar el contenido de cada tubo.
* Leer la absorbancia de cada tubo en el espectrofotómetro y anotar en el cuadro de resultados.
* Hallar la concentración para cada una de las diluciones.
* Realizar el gráfico respectivo.
* La fórmula para hallar la concentración es:
Abs. M
C = ----------------- x N
Abs. P
Donde:
C = Concentración
Abs. M = Absorbancia de la muestra.
Abs. P = Absorbancia patrón (Absorbancia de la dilución del tubo de ensayo N° 1)
N = Constante (Concentración de la dilución del tubo de ensayo N° 1)
RESULTADOS
Tubos De ensayo Absorbancia Concentración
01 0.987 5%
02 0.769 3.89%
03 0.593 3%
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04 0.395 2%
05 0.191 0.97%
06 0.098 0.50%
CHART
1.2 TITLE
5%
0.987
3.98% 0.769
3% 0.593
0.6
2% 0.395
0.4
0.97%
0.191 0.098
0,50%
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué al seguir diluyendo la solución de azul de metileno también disminuye la
absorbancia respectiva?
Porque a dicha solución mientras más se le echa azul e metileno tiende a volverse más oscura y más concentrada y
la absorbancia capta mucha luz pero no puede traspasarla toda.
2. ¿Será un método preciso la espectrofotometría?
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de
moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos
de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
3. ¿Con la utilización del espectrofotómetro, puede ayudar a determinar pruebas
bioquímicas?
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un
compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea
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un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
4. ¿Cómo es el espectro de luz?
Se denomina espectro visible a la región del espectro electromagnético que el ojo humano es capaz de
percibir. A la radiación electromagnética en este rango de longitudes de onda se le llama luz visible o
simplemente luz. No hay límites exactos en el espectro visible; un típico ojo humano responderá a
longitudes de onda desde 400 a 700 nm aunque algunas personas pueden ser capaces de percibir
longitudes de onda desde 380 a 780 nm.
BIBLIOGRAFÍA
1.
2. [Link] › pdfs › 08_ESPECTROFOTOMETRIA
3. [Link] › redcostera1 › invemar › docs
4. [Link] › Espectro_de_la_luz
