ORGANISMOS TRANSGENICOS
Unidad 2. Fase 2. Estudio del caso
PRESENTADO POR:
WILFREDO FERNANDO RODRÍGUEZ
YURANI VANESSA TORO
JUAN JOSE LAGOS
JOSE WILLIAM CAJIGAS
JOHANA XIMENA CASTRO
GRUPO:
203022_6
PRESENTADO A:
JULIANA RIVERA
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS, AGRÍCOLA PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE
SEPTIEMBRE 2020
INTRODUCCION.
El ADN recombinante (rADN) es una tecnología que utiliza enzimas para cortar y unir
secuencias de ADN de interés. Las secuencias de ADN recombinado se pueden colocar
en unos vehículos llamados vectores que transportan el ADN hacia el lugar adecuado de
la célula huésped donde puede ser copiado o expresado (Human Genome Research
Institute. s.f).
La tecnología del ADN recombinante comprende una serie de métodos para identificar
un gen (o segmentos concretos de ADN) en un organismo, aislarlo, analizarlo, si es
preciso, modificarlo y reinsertarlo dentro de otro organismo consiguiendo que se
exprese con normalidad. Estas técnicas han permitido un avance considerable de la
biología y genética molecular, la medicina, la agricultura y la ecología (Garrido, A.,
Villaverde, C., Blanco, M., Teijón, J., Mendoza, C., Ramírez, J. 2.006).
La presente actividad tiene como objetivo principal la identificación y la comprensión
de los fundamentos relacionados con la tecnología del ADN recombinante a partir de
conceptos teóricos, el estudio de investigaciones de impacto y el análisis de artículos
científicos a traves de dos (2) estudios de casos.
Caso 1.
I. El director del curso Organismos Transgénicos puso a consideración de sus
estudiantes el tema siguiente: “La manipulación genética de organismos hizo posible la
obtención de resultados benéficos para la agricultura y para otras áreas del
conocimiento”.
Varias afirmaciones fueron hechas por cada uno de los estudiantes:
1. Para llevar a cabo esta manipulación, son utilizadas pequeñas porciones
circulares de DNA, dispersas en el citoplasma bacteriano que tienen replicación
independiente del cromosoma.
Verdadero
Para transferir ADN a una planta se utilizan diversos vectores, que sirven de vehículo
transmisor, burlando los mecanismos celulares que normalmente impedirían la
incorporación de una información genética extraña. Los vectores más utilizados son
plásmidos bacterianos. Agroecología, s.f).
Esas pequeñas porciones circulares de ADN se conocen como plásmidos. Los plásmidos
son moléculas circulares de ADN de doble cadena que se encuentran de forma natural
en algunas especies de bacterias; son extracromosomales y se replican de forma
independiente del cromosoma bacteriano y codifican para una gran variedad de enzimas
que confieren resistencia a antibióticos y metales pesados, degradan complejos
orgánicos y en algunos casos producen toxinas [ CITATION Pue05 \l 9226 ]
Los plásmidos son elementos genéticos que son capaces de transferir información
genética horizontalmente entre bacterias en el proceso conocido como conjugación
[CITATION San19 \l 9226 ].
Los plásmidos como vectores de clonación pueden llevar genes de interés hacia una
célula huésped; Los plásmidos son los vectores más usados por su forma circular y
porque están presente en muchas bacterias, además de ser capaces de replicar
independientemente el cromosoma bacteriano [ CITATION Ber16 \l 9226 ]
2. Para llevar a cabo esta manipulación, son obtenidos segmentos de DNA, con
genes de interés, a través de cortes con exonucleasas, como la transcriptasa
reversa.
Falso
Los cortes en el ADN son realizados con enzimas de restricción, también conocidas
como endonucleasas. Estas enzimas se especializan en hidrolizar o cortar uniones
fosfodiéster que mantienen unidos a los nucleótidos en los ácidos nucleicos; estas
enzimas reconocen secuencias específicas de corte, razón por la cual tienen especial
aplicación en ingeniería genética. (Curtis, Barnes, Schnek, & Massarini, 2008)
La transcriptasa inversa es una enzima que se ha detectado en todo tipo de células; la
cual permite sintetizar ADN, tomando como molde ARN (Romeo, 1995)
La transcriptasa inversa, también conocida como transcriptasa reversa, está presente en
algunas especies de retrovirus, los cuales tienen un ARN de simple hebra; la
transcriptasa cataliza el ciclo de replicación del virus al convertir el ARN genómico en
ADN de doble hebra denominado provirus. (Lautaro Perez, 2000)
3. Para llevar a cabo esta manipulación, se promueve el corte de moléculas de DNA
con el uso de enzimas que reconocen secuencias nucleotídicas específicas en el
DNA.
Verdadero
Las enzimas de restricción son enzimas que reconocen y cortan las moléculas de DNA
por secuencias nucleotídicas específicas (Klug y col., 2006). Aunque estas enzimas
desempeñan una función propia en las células procariotas en las que se descubrieron,
son particularmente importantes por su empleo experimental en varias áreas de la
biología molecular, de interés tanto básico como aplicado al diagnóstico clínico; en
especial, se utilizan en el proceso de clonación molecular del DNA. Además, tienen
aplicación en otras técnicas como la secuenciación del genoma y el estudio de los
polimorfismos (Luque y Herráez, 2002).
Las enzimas de restricción cortan con elevada precisión el ADN en lugares específicos
denominados sitios de acción o secuencias específicas de ADN. Son aisladas de
organismos como las bacterias, y producen la ruptura del enlace fosfodiéster entre dos
nucleótidos consecutivos (Bernal, 2016).
4. La tecnología del DNA recombinante (o Ingeniería Genética) se fundamenta en
la unión de "tramos" de DNA de diferentes organismos para la construcción de
DNA mixto.
Verdadero
El ADN recombinante consiste en la formación de moléculas que contienen secuencias
de ADN derivadas de más de una fuente. El principal proceso de la tecnología es la
clonación de ADN. Un segmento de ADN específico se liga a una molécula de ADN
transportador y después se replica millones de veces. (Bernal, 2016)
El ADN recombinante es una tecnología con la cual se secciona una región determinada
del ADN; se puede obtener un número ilimitado de copias y determinar su secuencia de
nucleótidos; también se pueden alterar genes aislados y transferirlos a células cultivadas
o a una línea germinal de una animal o planta, de manera que el gen alterado se herede
como parte del genoma de ese organismo. (Townsend, Beauchamp, Evers, & Mattox,
2007)
La tecnología del ADN Recombinante permite manipular genes y obtener grandes
cantidades de ADN; las enzimas bacterianas o enzimas de restricción, rompen el ADN
en sitios específicos produciendo fragmentos de restricción. Cada enzima reconoce una
secuencia única de nucleótidos y corta la cadena en forma simétrica o asimétrica.
(Pardo, 1996)
5. Fragmentos de DNA exógeno son insertados en el genoma de células hospederas
por medio de plásmidos.
Verdadero
Los fragmentos de ADN son insertados en cadenas circulares de ADN denominadas
plásmidos, los cuales son vectores de clonación de estos fragmentos.
El ADN exógeno o extraño inicialmente se inserta en el plásmido para formar la cadena
de ADN recombinante. Estos plásmidos contienen un origen de replicación y uno o más
genes que hacen que la célula receptora sea resistente a uno o más antibióticos, esto
permite a los investigadores seleccionar aquellas células que contienen el plásmido
recombinante. (Iwasa & Marshall, 2019)
ADN exógeno con técnicas de ADN recombinante se introduce en una célula anfitriona
bacteriana, habitualmente E. coli, luego se seleccionan las bacterias que contienen el
plásmido por su resistencia por ejemplo a los antibióticos, luego se puede realizar un
cribado para identificar un clon de E. coli que posea el fragmento de ADN deseado
(Murray, Rosenthal, & Pfaller, 2006)
Los plásmidos pueden considerarse parásitos moleculares, pero pueden beneficiar a su
huésped al proporcionarle determinadas funciones que ese carece, como por ejemplo
resistencia a los antibióticos. Los plásmidos deben tener un origen de replicación para
permitir su propagación autónoma en el huésped bacteriano o levadura. (Voet & Voet,
2006)
6. El genoma exógeno es insertado en el núcleo hospedero por medio de vectores
proteicos conocidos como plásmidos.
Falso
En una célula bacteriana se pueden distinguir varias partes de su estructura: la pared
celular, membrana citoplasmática, citoplasma y formación nuclear, imprescindibles para
la vida y otras estructuras externas como la cápsula, pili, flagelos y esporas, no
imprescindibles. El ADN o cromosoma bacteriano se encuentra en el nucleoide en
forma de una larga cadena circular de doble banda. En algunas bacterias un escaso
porcentaje de ADN permanece extra cromosómico formando pequeñas moléculas
circulares llamadas plásmidos. (García, Fernández, & Paredes, 1996)
Los plásmidos son cadenas circulares extracromosómicas que pueden ser de 2000 a
5000 bases de longitud, los cuales se replican independientemente del cromosoma
bacteriano. Los plásmidos recombinantes se introducen en la célula huésped mediante el
fenómeno de la transformación y pueden albergar hasta 10000 bases de ADN exógeno.
(Fuentes, 1997)
El ADN extra cromosómico de los plásmidos puede ser un equivalente de hasta el 10%
del tamaño del cromosoma de E. coli, se replican de forma autónoma y heredan la
progenie de las bacterias y pueden contener información genética de diversas
estructuras o funciones relacionadas con la virulencia bacteriana como los genes de
resistencia antimicrobiana, producción de toxinas y resistencia a iones de metales
pesados. (Koneman & Allen, 2008)
Caso 2.
II. Dos estudiantes del curso Organismos Transgénicos discutían sobre un artículo
publicado donde se exponían los resultados acerca de la clonación en bacterias del gen
responsable de la producción de la tela de araña, obteniendo así un material más
resistente que el Kevlar (poliparafenileno tereftalamid), utilizado en la confección de
chalecos a prueba de bala.
Uno de los estudiantes formuló las siguientes afirmaciones:
1. El gen de interés es cortado del cromosoma por una enzima de restricción e
introducido a un plásmido vector, generando un DNA recombinante.
Verdadero
La tecnología de ADN recombinante busca la expresión de genes en organismos que no
los poseen.
Las enzimas de restricción son obtenidas de bacterias que las usan como mecanismos de
protección contra la invasión de ADN foráneo. El primero en obtener y purificar estas
enzimas fue Hamilton Smith a principios de los años 70. Estas enzimas reconocen
secuencias específicas de ADN de 4 a 8 nucleótidos en donde realizan el corte. El
proceso de ADN recombinante comienza con el aislamiento de una fragmento de ADN
de interés mediante estas enzimas de restricción; al mismo tiempo se aísla y se abre el
ADN circular de un plásmido con la mima enzima de restricción; inmediatamente se
juntan ambos materiales permitiendo que los fragmentos se peguen usando el ADN
ligasa y se tenga un nuevo circulo de material plasmídico; las bacterias se dividirán
rápidamente con el consiguiente aumento del gen insertado y la producción de la
proteína de interés dentro de la bacteria. (Aldecoa Bedoya & Battilana Guanilo, 2006)
Los vectores plasmídicos de ADN tienen las siguientes características: 1) un origen de
replicación que les permite replicarse en forma independiente del cromosoma del
hospedador 2) Algún tipo de marcador seleccionable que le permite identificar con
facilidad las células que contienen el vector 3) sitios independientes para la unión de
una enzima de restricción o de varias de ellas; esto permite la inserción de fragmentos
de ADN en un punto específico dentro de un vector íntegro. (Watson, 2006)
En la obtención de ADN recombinante muchas endonucleasas o enzimas de restricción,
reconocen determinada secuencia nucleotídica. Algunas cortan el ADN en forma
escalonada lo que se conoce como extremo pegajoso o cohesivo; mientas que otras
cortan las dos hebras del ADN en forma simétrica y producen extremos romos. El corte
escalonado da como resultado una molécula de ADN con extremos de cadena simple.
Cuando se mezclan fragmentos de ADN diferentes generados por la misma
endonucleasa de restricción, sus extremos de cadena simple se pueden aparear.
Posteriormente al entrar en acción la ADN ligasa, los dos fragmentos se conectan
covalentemente, para formar una molécula de ADN recombinante. Los cortes con
extremos romos también se pueden ligar, pero de manera mucho menos eficiente.
(Devlin, 2004)
2. Los plásmidos vectores de clonación son extraídos de células humanas o
construidos sintéticamente en el laboratorio.
Falso
Los plásmidos no son extraídos de células humanas; forman parte del genoma de las
bacterias. Son ADN extra cromosómico circular de menor tamaño del cromosoma de la
bacteria. Contienen información que no es esencial para la vida de la célula, pero su
información puede codificar proteínas que provean resistencia a un antibiótico, o
proteínas que forman un puente para conjugación con otra bacteria. (Gagneten, y otros,
2015)
Los plásmidos se desarrollan en forma natural en las bacterias y en algunos eucariontes
unicelulares. Como características deseables, sirven como vectores, se propagan
independientemente en el hospedador, son portadores de un tipo de marcador
seleccionable, transportan genes con resistencia a antibióticos, están presente en la
célula en forma de numerosas copias y también tienen sitios de restricción exclusivos.
(Watson, 2006)
La manipulación en laboratorio principalmente permite la creación de ADN
recombinante y la clonación de ADN mediante los vectores a partir de los plásmidos
que se han extraído de bacterias (Bernal, 2016)
3. El DNA recombinante que contiene el gen de interés es insertado en una bacteria
que lo incorpora a su propio DNA.
Verdadero
Los genes de interés se insertan en las bacterias a través de los vectores, también
llamados transportadores; una vez insertados inician su replicación. Los vectores
obedecen a ciertas características: 1) poseer un origen de replicación que permita al
ADN replicarse en la célula hospedadora 2) ser de tamaño pequeño para facilitar su
aislamiento 3) contar con sitios únicos de clonado que permitan que una enzima de
restricción actúe cortando en un solo lugar específico. De esta forma cuando se inserta
un fragmento de ADN, se vuelve a armar el vector, ahora con la nueva secuencia
insertada 4) tener marcadores de selección que permitan verificar su presencia en las
células donde se haya introducido. (Curtis, Barnes, Schnek, & Massarini, 2008)
Al vector que transporta el gen de interés se le conoce como plásmido recombinante, y
es introducido en las bacterias, para que éstas por medio de su maquinaria genética,
expresen el gen y den lugar a una proteína. En condiciones favorables las bacterias se
multiplican y de este modo se obtienen múltiples células que poseen el fragmento de
ADN clonado. (López, 2016)
El gen de interés o fragmento de ADN puede ser obtenido de cualquier organismo y
puede permanecer como ADN genómico (ADNg), ADN complementario (ADNc),
producto de la retro transpiración del ARN, un producto de PCR o un ARN obtenido
por transpiración in vitro. (Salazar, Sandoval, & Armendáriz, 2013)
4. En la clonación, la bacteria receptora multiplica el DNA recombinante que
contiene el gen de interés, pero no su propio DNA.
Falso
La bacteria replica tanto el ADN recombinante, el cual ha sido insertado con un vector,
así como su cromosoma.
En las técnicas de ADN recombinante el segmento de ADN que se desea clonar es
introducido a una célula o una bacteria por medio de un vector que normalmente es un
plásmido. El plásmido infecta un cultivo de células bacterianas produciendo grandes
cantidades del extraño ADN. El ADN extraño dentro de la bacteria se replica junto con
el ADN bacteriano y se reparte en las células hijas. Por lo tanto, el número de moléculas
de ADN recombinante aumenta en proporción al número de células bacterianas que se
forma. (Iwasa & Marshall, 2019)
Al igual que el ADN cromosómico bacteriano el ADN recombinante contenido en un
plásmido se replica de forma autónoma. Como se ha mencionado anteriormente,
confieren un alto nivel de resistencia a los antibióticos, codifican la producción de
bacteriocinas, toxinas determinantes de virulencia y contener otros genes que otorgan
ventaja respecto a la metabolización de ciertos sustratos en comparación con otros
microorganismos. (Murray, Rosenthal, & Pfaller, 2006)
Debido a la naturaleza extra cromosómica de vectores como los plásmidos y su
capacidad de replicarse independientemente del cromosoma, son empleados como
vehículos de clonación de moléculas de ADN foráneo, que permiten el transporte y
manipulación de este. (Puerta & Ureña, 2005)
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