1. Dibuje sus resultados de la extracción de ADN.
PROCEDIMIENTO DE LA EXTRACCION DEL ADN
Para la extracción de ADN de las hojas de tomate, tomate entero, saliva,
seguiremos los siguientes pasos.
1. Triturar o licuar el tejido.
2. Agregar 10 ml de la solución de homogenización por cada gramo de
tejido.
3. Incubar la mezcla en un Baño María a 60°C por 15-20 minutos.
4. Filtrar el homogenizado empleando la gasa estéril.
5. Enfriar rápidamente la preparación filtrada en una cubeta con hielo,
por 10 minutos
HOJAS DE TOMATE Saliva
TOMATE
El resultado obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado
con él, hay fragmentos de ARN. Una vez que estas membranas se han roto, el
ADN es liberado de la célula. El alcohol además de permitirnos ver el ADN,
este separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en
la solución acuosa y así el ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución
donde puede ser vista.
Las membranas celulares son rotas por el detergente debido a que los
detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las proteínas e
interrumpiendo la interacción lípido – lípido, lípido – proteína y proteína–
proteína. Los detergentes, al igual que los lípidos, se asocian entre ellos
y se unen a superficies hidrofílica y una cola no polar hidrofóbica.
La sal ayuda para que el filamento de células se una, es decir evita la
unión de las proteínas del ADN.
Es indispensable el alcohol etílico ya que el alcohol debe ser de una
concentración establecida sino podría romper moléculas de las células y
entonces no se podría observar el ADN. El alcohol precipita el ADN
fuera de la solución y separa así los componentes celulares de las
células. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra con el
alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el
agua.
2. Se presenta la fotografía de un gel de agarosa con muestras de
ADN. En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una
muestra distinta (M, 1 y 2). Los pocillos son hechos en el gel para
introducir ahí la muestra de ADN.
a. ¿Qué hay en el primer carril?
Un carril es un corredor por donde pasa el ADN al salir del pozo. En esta
muestra tenemos 5 carriles, 4 para las muestras de ADN (del 1 al 4) y 1 para
los marcadores de peso molecular (carril 5). Las bandas (en color negrito)
son un grupo de fragmentos de ADN del mismo tamaño, estos se visualizan
al agregarle al gel un pigmento que se une al ADN. El carril 5, que tiene los
marcadores del peso molecular, nos permitirá tener una idea del tamaño
aproximado en Kb de los fragmentos de ADN. En el primer carril
encontramos 3 bandas, lo cual indica que hay 3 grupos de fragmentos de
ADN del mismo tamaño. Todas las moléculas de ADN tienen la misma carga
por masa; es por ello, que estas se juntan formando bandas.
Todos los fragmentos de ADN se separan por tamaño, ya que pertenecen al
mismo tipo de molécula. Por lo tanto, la electroforesis de ADN nos permite
distinguir los diferentes fragmentos de ADN que se encuentran en una
muestra, basándose en su tamaño.
Electroforesis en gel [Internet]. Khan Academy. 2016 [citado 06 de
noviembre 2020]. Disponible en:
https://es.khanacademy.org/science/biology/biotechdnatechnology/da-
sequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-electrophoresis
b. En la muestra 1, ¿qué tamaño aproximado tienen las bandas de
ADN?
La banda más grande de la muestra 1, ubicada más cerca al ARN
tiene una medida aproximada de 23.1 Kpb, mientras que las otras
dos un aproximado de entre 11 a 14 Kpb.
c. ¿Por qué aparece RNA en algunas muestras y por qué aparece
tan abajo, comparado al ADN?
sadasdas
d. ¿Qué significado tiene que algunas bandas sean más gruesas
que otras?
En 1995 se desarrolló un sistema de electroforesis de campos
pulsados miniaturizado, que usaban muestras de más de 0.1 cm de
grosor, lo que provocaba la aparición de bandas gruesas que
necesitan más tiempo y más longitud del gel para separarse, además
de no mejorar en calidad el patrón electroforético, ni revelar mayor
cantidad de bandas.
Las bandas gruesas obtenidas tras la electroforesis del producto de
una reacción en cadena de la polimerasa corresponden a las
secuencias de ADN que han sido copiadas por la Taq polimerasa y
su tamaño es conocido porque en cada electroforesis en uno de los
pocillos se añade una mezcla con fragmentos de ADN de tamaños
conocidos, así, según la altura a la que caiga la banda conoceremos
su tamaño
Yenis Santamaría Casola. Sistemas miniaturizados de electroforesis
de campos pulsantes. [Internet]. Revista CENIC. Ciencias Biológicas,
vol. 46, núm. 3, septiembre-diciembre, 2015, pp. 285 -304 [citado 06
de noviembre 2020]. Disponible en:
https://www.redalyc.org/pdf/1812/181241373007.pdf
Sistema de bibliotecas y Biblioteca Central-UNMSM. Técnicas De
Biología Molecular En El Diagnóstico En Dermatología. [Internet]. Vol.
9, Suplemento 1; Diciembre - 1999 [citado 06 de noviembre 2020].
Disponible en:
https://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v09_sup1/tecnic
as.htm
CONCLUSION:
Los nuevos sistemas de electroforesis superan las deficiencias de los
antiguos usando muestras de entre 0,05 cm y 0,1 cm de grosor,
evitando en gran medida la aparición de bandas gruesas, también
permiten aplicar campos eléctricos más intensos utilizando fuentes
de poca potencia, lo cual les proporciona a los geles una resolución
adecuada entre las bandas del patrón electroforético.
