Transcripción

¿Cómo LEEN las células el genoma?

DNA a Proteína

El DNA no dirige la síntesis de proteínas en

sí misma, sino que usa RNA como
intermediario

Cuando la célula necesita una proteína

particular, la secuencia de nucleótidos
apropiada de la molécula de DNA
inmensamente larga en un cromosoma se
copia primero en RNA

Estas copias de RNA se usan directamente

como plantillas para dirigir la síntesis de la
proteína
 Dogma central de la Biología Molecular

Síntesis de RNA a partir de un molde de DNA

Universalidad del dogma central de la biología molecular, tiene variaciones:

Forma en que la información fluye desde el DNA hasta la proteína

En eucariotas:

Transcritos de RNA  procesamiento en el núcleo, incluido el empalme de

RNA cambio crítico en el "significado" de una molécula de RNA
Universalidad del dogma central de la biología molecular, tiene variaciones:

Para muchos genes, el RNA es el producto final.

 Algunos de estos RNAs se pliegan en estructuras tridimensionales precisas que tienen roles
estructurales y catalíticos en la célula.

 Otros RNAs actúan como reguladores de la expresión génica.

 Aún no se conocen las funciones de muchos RNA no codificantes.

 Los genomas de la mayoría de los organismos
multicelulares son sorprendentemente desordenados

 Secuencias génicas son una larga cadena de exones cortos alternos a intrones largos

 Pequeñas secuencias de DNA que codifican proteínas se entremezclan con grandes bloques de DNA
aparentemente sin sentido

 Algunas secciones del genoma contienen muchos genes y otros carecen de genes por completo

 Proteínas que trabajan estrechamente entre sí en la célula a menudo tienen sus genes ubicados en
cromosomas diferentes, y los genes adyacentes codifican proteínas que tienen poco que ver en la célula.
 Es difícil ubicar el comienzo y el final
de los genes, y mucho menos descifrar
cuándo y dónde se expresa cada gen
 De DNA a RNA

Los genes se pueden transcribir y traducir con diferentes eficiencias, lo que permite que la célula
produzca grandes cantidades de algunas proteínas y pequeñas cantidades de otras

Una célula puede regular la expresión de cada uno de sus genes de acuerdo con su
necesidades mediante el control de la producción de su RNA
Estructura química del RNA

 Moléculas de RNA son de cadena sencilla

 Polímero lineal compuesto por cuatro tipos

diferentes de subunidades de nucleótidos unidas
mediante enlaces fosfodiéster
 Estructura química del RNA

 Difiere químicamente del DNA en dos

aspectos:

(1)los nucleótidos en el RNA son

ribonucleótidos
(2)contiene el uracilo de base (U) en lugar
de timina (T)
Estructura química del RNA
 Una cadena de RNA puede plegarse en una
forma particular, del mismo modo que una
cadena polipeptídica se pliega para formar
la forma final de una proteína.

 La capacidad de plegarse en formas

tridimensionales complejas permite que
algunas moléculas de RNA tengan
funciones estructurales y catalíticas
precisas.
 Estructura química del RNA
Estructura primaria Estructura secundaria Estructura de orden superior

RNAr
RNAm RNAt
 Transcripción
Proceso encargado de la síntesis de una molécula de RNA a partir de la información
genética contenida en la región codificante de un DNA

Comienza con la apertura y desenrollamiento de una pequeña porción de la doble hélice

de DNA para exponer las bases.

Una de las dos cadenas de la doble hélice de DNA actúa entonces como una plantilla
para la síntesis de una molécula de RNA
 Diferencias con la replicación

La cadena de RNA no permanece unida por puentes de hidrógeno a la cadena molde de

DNA.
 Detrás de la región donde se están agregando los ribonucleótidos, la cadena de RNA se
desplaza y la hélice de DNA se re-forma.

Debido a que se copian solo de una región limitada del DNA, las moléculas de RNA son más
cortas que las moléculas de DNA.

En un cromosoma humano:

Una molécula de DNA puede tener hasta 250 millones de pares de nucleótidos de largo
Mayoría de los RNA no tienen más de mil nucleótidos de largo
Transcripción

 La secuencia que se obtiene es

complementaria y antiparalela

La secuencia de bases en la molécula de RNA

producida es la misma que la secuencia de
bases en la cadena de DNA no molde,
excepto que una U reemplaza a cada T
 Transcripción
• Es un proceso enzimático catalizado por la RNA polimerasa
Transcriptasa: Polimerasa de RNA dependiente de DNA

• La RNA polimerasa se mueve paso a paso a lo largo del DNA, desenrollando la hélice de DNA
justo por delante del sitio activo para la polimerización para exponer una nueva región de la
cadena molde para complementar
 Diferencias con la DNA polimerasa

La RNA polimerasa cataliza el enlace de los ribonucleótidos, no de los

desoxirribonucleótidos.

Las RNA polimerasas pueden iniciar una cadena de RNA sin un cebador.

Las RNA polimerasas producen aproximadamente un error por cada 104

nucleótidos copiados (en comparación con una tasa de error por DNa polimerasa
de aproximadamente uno en 107 nucleótidos)
 Diferencias con la DNA polimerasa

La misma RNA polimerasa que inicia una molécula de RNA debe terminarla sin
disociarse de la plantilla de DNA.

Las RNA polimerasas tienen un modesto mecanismo de corrección. Si se agrega

un ribonucleótido incorrecto a la cadena de RNA en crecimiento, la polimerasa
puede retroceder, y el sitio activo de la enzima puede realizar una reacción de
escisión
Dirección de síntesis del RNA
ORIENTACIÓN DE LA SECUENCIA

Burbuja de
transcripción
 Tipos de RNA

Las células producen diferentes moléculas de RNA

 La mayoría de los genes transportados en el DNA especifican la secuencia de aminoácidos de las
proteínas  RNA mensajero (RNAm).

 Producto final de otros genes  molécula de RNA (RNAs no codificantes)

 Componentes enzimáticos, estructurales y reguladores para una amplia variedad de procesos
en la célula.
 Tipos de RNA

mRNA (Mensajero) rRNA (Ribosomal) tRNA (Transferencia)

 Tipos de RNA

RNA nuclear (snRNA): dirige el empalme del pre-RNAm para

formar RNAm

RNA ribosómico (RNAr): forman el núcleo de los ribosomas

RNA de transferencia (RNAt): forman los adaptadores que

seleccionan aminoácidos para su incorporación en la proteína

microRNA (miARN) y RNA de interferencia (RNAi): sirven como

reguladores clave de la expresión de genes eucarióticos
 Concepto de Gen
 Definición clásica, no molecular:
Es la unidad elemental de la herencia, la unidad física y funcional que controla una
característica hereditaria concreta

 Definición molecular:
Aquella región del genoma que contiene la información necesaria para sintetizar una
molécula de polipéptido

Los genes (de eucariotas) en su estructura poseen dos tipos de secuencias con
funciones diferentes:

Estructural o realmente codificadora. Tiene presencia de secuencias codificantes

(Exones) y secuencias no codificantes (Intrones)

Reguladora de la expresión. En la región estructural adicionalmente hay

 Concepto de Gen
 Definición clásica, no molecular:
Es la unidad elemental de la herencia, la unidad física y funcional que controla una
característica hereditaria concreta

 Definición molecular:
Aquella región del genoma que contiene la información necesaria para sintetizar una
molécula de polipéptido
 Concepto de Gen

Los genes (de eucariotas) en su estructura poseen dos tipos de secuencias con funciones
diferentes:

Estructural o realmente codificadora. Tiene presencia de secuencias codificantes (Exones)

y secuencias no codificantes (Intrones)

Reguladora de la expresión.
 Concepto de Gen

ESQUEMA SIMPLIFICADO DE UN GEN EUCARIOTA TÍPICO

Región Reguladora Región Estructural

Intrones

3` DNA 5`

Secuencia Exones
reguladora

Secuencia
promotora Sitio de inicio de la Sitio terminador de la
transcripción transcripción
 Concepto de Gen

ESQUEMA SIMPLIFICADO DE UN GEN PROCARIOTA TÍPICO

Región Reguladora Región Estructural

3` DNA 5`

Secuencia
Promotora Secuencia
reguladora

Sitio de inicio de la Sitio terminador de la

transcripción transcripción
Concepto de Gen
 Definiciones importantes

Promotor:

Secuencia específica de bases con alta afinidad por la RNA polimerasa, por lo
que proporciona el sitio de unión al DNA molde. Éstas secuencias se
encuentran "río arriba" respecto del punto de inicio de la transcripción

Ejm:
 En eucariotas: caja TATA o caja Hogness-Goldberg, caja CAAT y GC
 En procariotas: caja TATAAT o caja Pribnow y TTGACA
 Definiciones importantes
Factor de transcripción:

 Proteínas que se une a secuencias específicas de DNA, controlando la

transcripción de la información genética

 Ayudan a posicionar la RNA polimerasa eucariota correctamente en el promotor

 Ayudan a separar las dos cadenas de DNA para permitir el inicio de la transcripción

 Liberaran la RNA polimerasa del promotor para comenzar la elongación

 Enzimología de la Transcripción
RNA polimerasas
 Célula Procariota y organulos subcelulares: Una sola
RNA polimerasa que sintetiza los tres tipos de RNA

 Célula Eucariota:
RNA pol I: RNAr
RNA pol II: pre-RNAm y RNAsn
RNA pol III: RNAt
Factor de transcripción:

•Las proteínas son "generales" porque se necesitan en casi

todos los promotores utilizados por la RNA polimerasa II.

Son un conjunto de proteínas interactuantes

•TFIIA, TFIIB, TFIIC, TFIID, etc.

TFII significa "factor de transcripción para la polimerasa II”

 Etapas en el proceso

Al igual que en la replicación, la transcripción es un proceso que ocurre en

tres fases clásicas:

 INICIACIÓN

 ELONGACIÓN

 TERMINACIÓN

Hay marcadas diferencias en el proceso entre células eucariotas y células

procariotas
 INICIACIÓN

Etapa compleja, requiere mayor regulación

La iniciación puede subdividirse en tres sub-etapas:

Formación del complejo de iniciación

Desnaturalización del promotor

Formación de los primeros enlaces fosfodiéster

 INICIACIÓN
Formación del complejo de iniciación

Supone la unión de varios factores de transcripción a las regiones promotoras del DNA y
la incorporación de la RNA polimerasa
 INICIACIÓN

Desnaturalización del promotor

Se produce en la región de inicio de la transcripción el desenrollamiento y separación

de las dos cadenas de DNA (desnaturalización local).

Los factores de transcripción TFIIF y TFIIH tienen función DNA-helicasa, por lo tanto,
son los encargados de romper los puentes de hidrogeno en la burbuja de transcripción

El factor de transcripción TFIIE estabiliza la región desnaturalizada

 INICIACIÓN

Formación de los primeros enlaces fosfodiéster

La RNA polimerasa inicia la síntesis del RNA a través de la unión del primer nucleotido
(generalmente A)
 ELONGACIÓN

 Etapa durante la cual la RNA polimerasa

continua alargando la cadena de RNA mientras
avanza por el DNA. Se da el desplazamiento de
la burbuja de transcripción

 Se forma el complejo de elongación el cual

esta compuesto por la molécula de DNA que se
esta transcribiendo (molde), la RNA pol y la
molécula de RNA naciente (Transcrito
primario)
 TERMINACIÓN

 Hay respuesta a secuencias especificas (secuencias de nucleótidos en

la cadena molde de DNA) que indican al complejo de transcripción el
fin de la polimerización

 El mecanismo de terminación es diferente en procariotas y eucariotas

Terminación en Procariotas:

Dependiente de ρ (rho): RNA contiene un sitio de unión para la

proteína rho (actividad es la de DNA-RNA helicasa).

El factor rho se une a esta secuencia y comienza a

"desplazarse" por el transcrito hacia la RNA polimerasa.

Cuando alcanza a la polimerasa en la burbuja de transcripción,

rho separa el transcrito de RNA del molde de DNA y libera la
molécula de RNA, de tal forma que termina la transcripción.
Terminación en Procariotas:
Independiente de ρ (rho): depende de secuencias específicas en
la hebra molde del DNA.

Conforme la RNA polimerasa se acerca al final del gen que se está

transcribiendo, llega a una región rica en nucleótidos C y G.

El RNA transcrito de esta región se dobla sobre sí mismo y los

nucleótidos G y C complementarios se unen entre sí.

Esto da como resultado una horquilla estable que causa que la

polimerasa se detenga.
Terminación en Eucariotas:

Depende el tipo de gen que esté implicado.

Terminación para los genes que codifican para proteínas:

 La terminación comienza cuando aparece una señal de poliadenilación en el transcrito de RNA.

 La señal de poliadenilación es reconocida por una enzima que corta el transcrito de RNA y lo
libera de la RNA polimerasa.
Modificaciones al RNA eucariota

 En bacterias, los transcritos de RNA

pueden actuar como RNA mensajeros
(RNAm) inmediatamente.

 En eucariotas, el transcrito de un gen

codificante se llama pre-RNAm y debe
experimentar un procesamiento
adicional antes de que pueda dirigir la
traducción.
 Procesamiento postranscripcional
Transcrito primario:

Se llama transcrito primario o precursor del RNA a la molecular de RNA que

resulta directamente del proceso de transcripción

5`---ATG GTG CAC CTG ACT CCT GAG GAG---3` Cadena antimolde
DNA

3`---TAC CAC GTG GAC TGA GGA CTC CTC---3` Cadena molde

Transcripción
Transcrito primario ó
5`---AUG GUG CAC CUG ACU CCU GAG GAG---3` Pre-RNA
Procesamiento postranscripcional
Diferencias entre Eucariotas y Procariotas

PROCARIOTAS EUCARIOTAS

•Los precursores de los tres

•No hay transcrito primario tipos de RNA formados en el
(no hay maduración núcleo eucariótico no pueden
postranscripcional) desempeñar directamente su
función
•Procesos de transcripción se
realiza secuencial al de Transcripto primario de RNA
traducción

mRNA (maduro)
Procesamiento postranscripcional
Diferencias entre Eucariotas y Procariotas

PROCARIOTAS EUCARIOTAS
•En un gen proteico procariótico •En un gen proteico Eucariotico
todo el DNA es codificante, por no todo el DNA es codificante,
lo cual no se requiere de por lo cual se requiere de
procesamiento procesamiento
 Procesamiento postranscripcional

 Proceso por medio del cual el transcrito primario es modificado y

adquiere su característica funcional

 Este proceso tienen lugar en el núcleo

 Solo cuando se ha completado el proceso las moléculas de RNA

maduro son transportadas al citoplasma donde ejercen su función
 Procesamiento postranscripcional

El procesamiento postranscripcional comprende las siguientes reacciones:

 Corte y empalme de nucleótidos: Splicing del RNA

(Eliminación de intrones y empalme de
exones)

 Modificación de nucleotidos

Modificación
extremos 5´ y 3´
 Adición de nucleótidos a los
extremos
Eliminación de intrones y empalme de exones
Procesamiento postranscripcional
 Procesamiento postranscripcional

Empalme
alternativo

Puede hacerse más de un RNAm del mismo gen.

Los eucariotas pueden obtener a partir de un transcrito de pre-RNAm distintas isoformas de
RNAm y proteínas, las cuales pueden tener funciones diferentes y a menudo opuestas.
 Procesamiento postranscripcional

Modificación de extremo 5` : Adición de caperuza

El extremo 5` del RNA es modificado por medio de la ayuda de tres enzimas:

•Fosfatasa
•Guanililtransferasa
•Metilasa

Esta modificación corresponde a la incorporación de un nucleótido protector sobre el NTP

en la posición 5`

Esta modificación se llama: Caperuza del RNA o casquete 5`

Procesamiento postranscripcional

Modificación de extremo 5` : Mecanismo de Reacción

 Procesamiento postranscripcional

Modificación de extremo 3` : Poliadenilación

Sobre el extremo 3` actúa una RNA pol especial que pega múltiples nucleótidos ATP (es una
Poli(A)-polimerasa).

Se adicionan al RNA muchos residuos AMP (2-250nt)

 Procesamiento postranscripcional
Modificación de extremo 3` : Poliadenilación

Secuencias consenso de nucleótidos

codificadas por el genoma dirigen el
corte y la poliadenilación para formar
el extremo 3´ final de un RNAm
eucariota.

La cola le brinda al transcrito mayor estabilidad y lo ayuda a ser exportado del núcleo hacia el citosol.