SALAS HERRERA, Nicolas; CAMACHO TOBAR, Sebastián
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
UNIVERSIDAD ICESI SANTIAGO DE CALI, OCTUBRE 20 DE 2019
OBJETIVO
Evidenciar el proceso de bombeo de iones H+ hacia el medio extracelular en las células de la
levadura mediante las mediciones de su pH al agregar glucosa, dinitrofenol (DNP) y azida de
sodio.
Identificar el efecto de la glucosa en la etapa de glicólisis de la levadura.
RESULTADOS
Tabla 4. Cambios de pH
ANALISIS
Las levaduras son hongos unicelulares no filamentosos, con una morfología característica esférica u
ovalada. Estos organismos son heterótrofos, que tienen la capacidad de crecer como organismos
anaerobios o aerobios; en su mitocondria se produce el ATP que utilizan para realizar sus funciones
metabólicas (Vélez, s.f). Para poder identificar la existencia del bombeo de Iones H+ hacia el medio
extracelular en la muestra, a través del pH, se realizaron 3 pruebas con mezclas de levadura, glucosa,
DNP y azida de sodio, con sus respectivos volúmenes para cada vaso.
En los vasos 2 y 3 se vieron resultados parecidos, sin embargo, diferentes en cuanto las proporciones de
disminución de pH. Teniendo en cuenta que el DNP es un desacoplante que permite el paso de iones H+
del espacio intermembranal hacia la matriz, disminuyendo así el gradiente de electrones y alterando el
potencial electroquímico de la matriz (pH básico y carga negativa), con lo que la fuerza protón motriz
que impulsa el retorno de H+ desde el espacio intermembranal hacia la matriz a través de la ATP sintasa
es menor, disminuyendo así la síntesis de ATP (Tello y Zamudio, 2012), se puede explicar el pH
intracelular ácido por el aumento de iones H+ en el tubo 2, el cual contenía 2,4 – dinitrofenol (DNP)
agregado a la solución de levadura y glucosa.
Por otro lado, el vaso 3 contenía azida de sodio el cual, al ser inhibidor, impide el bombeo de protones al
espacio intermembranal actuando en sitios específicos de ensamblaje de transporte de electrones. La
azida ataca al complejo IV “de la cadena de transporte de electrones, uniéndose a la forma oxidada del
hemo A3 de la enzima, lo que impide la función oxido-reductora de la misma, y por ello no se permite
que se cree el gradiente de protones para la posterior síntesis de ATP” (Tello, 2012). Así, el impedimento
del gradiente provoca una acumulación protones en la matriz por los productos de los complejos I II y III
por lo que el pH disminuye considerablemente.
Los agentes desacopladores son un grupo de sustancias que incluye a los fenoles sustituidos
(pentaclorofenol y dinitrofenol), hormonas tiroideas a dosis tóxicas, fenilhidrazonas de cianuro de
carbonilo, dicumarol, ácidos grasos de cadena larga y algunos antibióticos (como valinomincina y
gramicidina), que tienen la propiedad de hacer permeable la membrana mitocondrial a los protones
disipando el potencial electroquímico de protones y el gradiente eléctrico consecuente; de esta manera,
en las mitocondrias desacopladas la energía liberada por el transporte de electrones se disipa en forma
de calor (Desacopladores de la fosforilacion, s.f).
Además de los desacoplantes existen diversas moléculas que actúan como inhibidores de la cadena de
transporte electrónico. Entre ellos se encuentran el Amital y la Rotenona, los cuales son un producto
vegetal obtenido de las plantas que se usa como insecticida y pesticida, bloquean la cadena de
transporte electronico entre la NADH deshidrogenasa (Complejo I) y la CoQ e impiden que el NADH sea
un donante de electrones a la cadena respiratória. Por otro lado, el Antimycin A es un antibiótico que ha
sido usado como veneno para controlar alguna especies de peces. Este interfiere con el flujo de
electrones desde el citocromo bH en el Complex III (Q-cytochrome c oxidoreductasa); en presencia de
esta sustancia, el citocromo bH puede ser reducido pero no oxidado, y consecuentemente, el citocromo
c permanece oxidado, al igual que los citocromos ay a3 del Complejo IV (Inhibidores de la Cadena de
Transporte de Electrones, 2008).
El monoxido de carbono (CO) es responsable a nivel mundial por mas del 50 % de las muertes por
envenenamiento. Es incoloro e inodoro; puede formarse en grandes cantidades como resultado de la
combustion incompleta de combustibles: los tubos de escape de maquinarias , hornos, estufas, son
fuentes importantes. En fumadores, el cigarro aumenta los niveles de carboxihemoglobina ya que el CO
se une a la forma reducida del hierro (Fe ++) de los grupos Hem de la Citocromo Oxidasa. Finalmente, el
cianuro se puede inhalar por incendios industriales y/o residenciales. El cianuro afecta a prácticamente
todas las metaloenzimas, pero sus principales efectos tóxicos derivan de su unión al Fe+++ en los grupos
Hem de la citocromo oxidasa, inhibiendo el funcionamiento de la Cadena de Transporte de Electrones
(Inhibidores de la Cadena de Transporte de Electrones, 2008).
CONCLUSIONES
A través de las medidas de pH en las muestras, se puede explicar que su disminución se debe a
que los desacoplantes químicos como el DNP debilitan la la relación entre la cadena de
transporte de electrones y la fosforilación oxidativa, haciendo que la concentración de protones
aumente.
La bomba de protones no crea energía, sino que a partir del efecto de la glucosa, forma un
gradiente que almacena energía para su uso posterior.
REFERENCIAS
Vélez, B. N. (s.f). BOMBEO DE PROTONES EN LEVADURAS . Obtenido de
[Link]
Desacopladores de la fosforilacion. (s.f). Obtenido de
[Link]
Tello, D. (2012). BOMBEO DE PROTONES EN LEVADURAS Y SUS PROCESOS INHIBITORIOS. Obtenido de
[Link]
Inhibidores de la Cadena de Transporte de Electrones. (2008). Obtenido de
[Link]
electrones/
