Técnicas Cromatograficas
Mom. Cien. 2017. 9
TECNICAS CROMATOGRAFICAS
Ángela María
Cuellar Felantana, María Alejandra Plazas
Resumen:
La cromatografía es un método de separación actualmente muy utilizado dado su gran eficiencia. Este
Laboratorio de orgánica I término se le otorga a varios procesos, en otras palabras, se encuentran diferentes técnicas de trabajo
cuyo producto difieren unos de otros. Pero, poseen un principio el cual cumplen, tratándose de la
distribución de un compuesto entre dos fases, una móvil y otra estacionaria. En el laboratorio se llevaron
a cabo dos diferentes técnicas Cromatograficas (cromatografía en capa fina y cromatografía en columna)
Palabras clave: eluyente, polaridad, fase estacionaria, fase móvil.
Recibido 13 de octubre de 2017. Abstract:
Aceptado 13 de octubre de 2017. Chromatography is a separation method currently widely used because of its high efficiency. This
term is given to several processes, in other words, different work techniques whose product differ
from each other. But, they have a principle which they fulfill, in the case of the distribution of a
compound between two phases, a mobile and a stationary one.
In the laboratory, two different chromatographic techniques (thin layer chromatography and column
chromatography)
Keywords: eluent, polarity, stationary phase, mobile phase.
Introducción: gran medida en componentes de gran tamaño, el
principio de su funcionamiento es el mismo.
La cromatografía es uno de los métodos más modernos y sofisticados que
existen para separar mezclas de productos tanto orgánicos como El proceso de cromatografía en columna puede ser
organometálicos, su principio se basa en la distribución de un compuesto variado (en especial la velocidad de elución) por
entre dos fases, una estacionaria y otra móvil con el objetivo de algunos factores como lo son el eluyente (en su
identificar y determinar las cantidades de componentes presentes en una mayoría es debido a su polaridad) que es la fase Imagen 1
muestra. estacionaria, el tamaño de la columna, la presión y
el empaquetamiento (están presente todos las partes
Entre los tipos de cromatografía se encuentra la empleada en la práctica del proceso). Además de encontrarse afectada,
conocida como cromatografía de capa fina. Al igual que otras según se dice en la teoría clásica, por la constante
cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el de equilibrio (imagen 2).
principio es el mismo (Bolaños et al); esta técnica es muy aplicada para
separar moléculas relativamente pequeñas y permite además de
determinar el grado de pureza de un compuesto, comparar muestras
utilizando el Rf (rate factor) que consiste en una división entre la
distancia recorrida por el compuesto y la distancia recorrida por el
disolvente, esta distancia se debe a que las moléculas de soluto se
encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que se produce
la elución van siendo desplazadas por la fase móvil (Galagovsky et al).
Este factor dependerá de la polaridad del disolvente utilizado ya que Imagen 2
cuanto más polar sea el compuesto más retenido estará en el absorbente y En este experimento
por tanto irá más lento y el Rf será también menor. se utilizó como
muestra una mezcla de violeta cristal (C24H28N3Cl) y naranja de metilo
Uno de las técnicas cromatografías frecuentemente utilizadas en el (C14H14N3NaO3S). Ambas soluciones se utilizan generalmente como
laboratorio de química orgánica es la cromatografía en columna (CC), el indicadores en reacciones.
proceso es capaz de separar tanto grandes cantidades como pequeñas de
líquidos (imagen 1).El gel de sílice es fase estacionaria que usualmente es
implementada, provocando un orden de elución en donde las muestras
polares sean retenidas en la columna por un mayor tiempo de elución que
los componentes menos polares, realizando la separación de esto líquidos
(partición).Esta técnica posee similitudes con la cromatografía en paca
fina (TLC)aunque su factor de elución sea contrario y la CC utilice en
Técnicas Cromatograficas
marguen superior como la inferior, donde se colocó en una de ellas
pequeñas muestras de las compuestos de orto-toluidina (T), acetofenona
(A) y una mezcla de ambos (M), con la ayuda de un capital; después de
que los mismos se secaran se introdujo la placa dentro de la cámara en
paralelo para que esta forma se sostuviera. Se esperó a que los solventes
se desplazaran por la placa hasta llegar a la marca realizada en la parte
superior, a continuación se sacó la fase estacionaria, después se
formaron marcas en las zonas que formaron concentraciones de los
compuestos y se registró el recorrido realizado por los mismos, para
posteriormente hallar su Rf (tabla 1). La segundo, la cromatografía en
columna, en principio se colocó un pequeño pedazo de algodón, con el
objetivo de evitar que la fase estacionaria también fluya junto con la fase
móvil, se añadió un poco del ultimo para verificar la movilidad en la
columna
Rf
Diluyentes Proporciones
A M T
Acetato de
1 0.5 0.7 0.6
etilo
Hexano 1 0.68 0.64 0.52
Hexano + 8:2
Acetato de
etilo 2:8 0.86 0.84 0.82
Cristal violeta Naranja de Metilo
cromatografíca, para la primera se utilizó misma fase estacionaria (gel
de sílice) del método anterior pero esta vez en grano, la cual fue diluida
El objetivo de la práctica es aplicar las diferentes técnicas Cromatografícas.
en etanol (5 g en 50 mL) sin llegar a disolverse, se introdujo en la
columna esta cantidad, junto a varios lavados para evitar restos en el
En cromatografía de capa fina el objetivo es calcular el factor de recipiente, después de que se asentó se añadió 1 mL de una solución
retención (RF) de las soluciones y compararlos además de preparada de violeta cristal y naranja de metilo respectivamente, con el
determinar el papel de la polaridad en la determinación de RF. que se desplazó el segundo completamente y el primero realizo lo
En cromatografía en columna el objetivo es separar los compuestos mismo al añadir un mezcla de etanol/trietilamina en proporción 9:1.
colorantes de una mezcla con componentes visibles por diferencia
de polaridad. Resultados y discusión:
El Rf como se mencionó en un comienzo depende de la polaridad: los
compuestos más polares son los que menos avanzan y los menos polares
Materiales y métodos: son los que más avanzan. El grado de elución de las sustancias
dependerá tanto de su propia polaridad como de la polaridad del
eluyente utilizado, así también La polaridad del disolvente influye así
Se realizaron dos tipos de cromatografías. La primera fue por sus siglas
mismo en la velocidad de ascensión del soluto a lo largo de la capa de
en ingles CCD o cromatografía de capa delgada, se utilizó una cámara
adsorbente, a mayor polaridad del disolvente, mayor grado de ascensión
cromatografía para esta técnica, donde se añadieron 20 mL de solventes
del soluto por la placa.
de Hexano y Acetato de etilo en una proporción 2:8, a continuación se
cerró el instrumento, al mismo tiempo, se cortó de una placa de gel de
sílice (7*5 cm), donde se realizaron marcas a un centímetro de tanto la Tabla 1. Resultados Rf de la cromatografía en capa fina.
La cromatografía en columna presenta algunos factores muy importantes seguido por el compuesto con el fin de polaridad creciente que fue el
para su eficiencia por ejemplo, la elección correcta de los solventes de cristal violeta, en la práctica solo se recogió la muestra de naranja de
elución es vital para el proceso separativo, en este caso se utilizó el metilo y una parte del cristal violeta porque el cristal violeta por su gran
etanol al 96% ya que es una sustancia polar y esta permitirá desplazar las polaridad no descendía rápido además de que fue necesario aplicar
moléculas incluyendo las más polares rápidamente a través de la presión para agilizar el proceso dado que este tipo de cromatografía es
columna, además es importante tener en cuenta que si el disolvente es muy lenta.
muy polar la elución será muy rápida y generalmente habrá poca
separación de los componentes de la mezcla y si es muy apolar, no
eludirán los compuestos de la columna. Otro factor importante es ser
muy cuidadosos al momento de llevar a cabo el empaquetamiento de la
columna, pues esta debe ser empacada lo más uniformemente posible
para evitar posibles grietas, burbujas de aire e incluso canales, que
podrían ser las causas de una separación pobre y para evitarlo es
recomendable golpear suavemente la columna con una goma mientras se BIBLIOGRAFIA
está empacando.
En el proceso de separación, al agregar el disolvente (etanol 96%) se 1. Galagovsky, L.; Químicaorgánica, fundamentos teóricos-prácticos
pudo observar que la muestra compuesta por naranja de metilo y cristal para el laboratorio. Editorial universitaria de Buenos Aires. Argentina. 5ta
violeta empezó a separarse en dos diversas bandas coloridas, una naranja Edición.
y la otra violeta; se pudo observar que el naranja de metilo descendió 2. Gómez, S.; Sierra, M.; Pérez, D. 2009. Análisis instrumental,
primero a través de la columna y esto se debe a que es menos polar, Volumen 1. Editorial Netbiblo, S.L. España. 256 pag.
Técnicas Cromatograficas
3.
ANEXOS
Procesamiento de datos de la cromatografía en capa fina:
Distancia recorrida por el compuesto
Rf =
Distancia recorrida por el disolvente
Acetato de etilo
2.5 cm
RfA= =0.5
5 cm
3.5 cm
RfM= =0.7
5 cm
3.0 cm
RfT = =0.6
5 cm
Hexano
3.4 cm
RfA= =0.68
5 cm
3.2 cm
RfM= =0.64
5 cm
2.6 cm
RfT = =0.52
5 cm
Hexano + Acetato de etilo
2:8
4.3 cm
RfA= =0.86
5 cm
4.2 cm
RfM= =0.84
5 cm
4.1 cm
RfT = =0.82
5 cm
Técnicas Cromatograficas
Hexano + Acetato de etilo
8:2
