.
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
MICROBIOLOGÍA
2020 – 03 / Enfermería
Informe de Laboratorio
Integrantes que elaboraron el informe. Rol desempeñado Nombre de la Practica
(Apellidos y nombres) (marque con una X)
Operativo Curador
Karen Stefany Barco Baquero X Sistema de siembra para hongos y
Erika Viviana Rojas Castaño X bacterias y medios de cultivos .
Andrés Felipe Hernández X Grupo de Clase Calificación
Jairo Hernando Caballero X
Kelly Xiomara Cardona Ramírez X 204
Sandra Patarroyo Urriago X
INTRODUCCIÓN (Valoración 0.5/5.0)
Para el estudio de bacterias y otros microorganismos como los hongos cultivables es necesario
conocer su morfología micro y macroscópica a partir de su crecimiento en cualquier cultivo,
al realizar esta actividad se le denomina siembra, esta actividad la podemos realizar a partir de
muestras bilógicas de análisis de control de calidad, o de un cultivo microbiano a otro se le
denomina subcultivo o requipe; Para realizar este tipo de técnicas deben ser de manera
adecuada utilizando material y equipos adecuados para la siembra de los cuales pueden ser:
Mecheros , asas bacteriológicas y de micológica cámaras de flujo laminar espacios adecuados y
asépticos es importante la temperatura de 37 grados para que los microorganismos eviten ser
estresados con cambios de temperatura brusca o por otros factores. (Trivino, 2011)
Técnicas de siembra
La técnica más usada es la de trasferencia de microorganismos de un lugar a otro para
cultivarlos, es importe obtener un cultivo puro (una población de células las cuales proceden de
la misma célula ) existen gran variedad de técnicas en las cuales las diferentes especies de la
muestra natural pueden ser aisladas en cultivo puro, existen siembras en cajas preti con técnica
de agotamiento, aislamiento o de estría cruzada fig 1. Otra técnica es de cuadrantes como se
muestra en la fig 2. Técnica de siembra masiva fig [Link] de punción fig4.
1
.
En los medios de cultivos todos los microorganismos requieren de nutrientes basicos y factores
fisicos para el matenimiento de su vida estas nesecidades varian y es importante conocerlas
para cada cultivo, las nesecidades nutricionales mediante el uso de medios artificiales como lo
son;fuentes de carbono ,de nitrogeno, elementos no metalicos ,metalicos (Ca,Zn,Na,K,Mn, entre
otros )o llamados micronutrientes, vitaminas ,agua y energia. Las nesecidades fisicas como la
temperatura, PH,gases los cuales se debe identificar para un manejo optimo de cada
microorganismo poruqe su variacion puede disminuor o acelerar el crecimiento.
El profesional que desarrolla actividades de microorganismos debe satisfacer las nesecidaes
nutricionales del mismo para favorecer su crecimiento adecuado estos medios pueden ser
artificiales o medios quimicamente definidos para estos se debe conocer las cantidades exactas de
lso compuestos ya sean organicas o inorganicas para los artifiales estan si d eben usar un
numero de sustancias limitadas, de acuardo a lo anteriormente dicho los microorganismos
pueden tomar los requerimientos nutricionales de los medios de cultivo natyrales o artificiales
para su crecimiento . (Trivino, 2011 pag 33)
Fig 1. Mezcla de bacterias en caja preti Fig 2. colonias de microbios en placa preti sobre el fondo bacteriano
2
.
METODOLOGÍA (Valoración 1.0/5.0)
Inicio No Siembra por No No Siembra por No
punción en punción en
Zigzag tubo recto
No Siembra No
en medio
Líquido
Limpiar área de trabajo
Prender el mechero Si Si Si
Flamear la boca del Flamear la boca del tubo Flamear la boca del tubo
tubo y el asa redonda
Marcar cajas de Petri y tubos de
ensayo
Flamear asa recta delgada Flamear asa recta delgada
Tomar una muestra de
la bacteria
No
Método Usar asa recta delgada para tomar Usar asa recta delgada para tomar
estrías por una muestra de bacteria una muestra de bacteria
agotamiento Introducir el asa con la bacteria
en el caldo y revolver
Introducir el asa en el tubo con Introducir el asa en el centro del
Si
agar inclinado medio de cultivo
Flamear y tapar el tubo para
Realizar
retirar una línea de
residuos zigzag
bacteria
Destapar cajas de Petri atravesando las líneas antes
cerca del mechero realizadas Sacar el asa y realizar movimiento Sacar suavemente evitando dañar
de Zigzag el agar
Flamear el asa redonda Flamear y tapar el tubo para retirar Flamear y tapar el tubo para retirar
residuos de bacteria residuos de bacteria
Tomar muestra de la bacteria No
Siembra de Siembra de
No No
hongo por Hongos por
punción central punción
en tubo inclinado central
Esparcir suavemente la bacteria en el
asa sobre el medio de cultivo en una
sola dirección Si Si
Flamear asa recta gruesa Flamear asa recta gruesa
Realizar un nuevo grupo de líneas paralelas
Enfriar el asa en el borde de Enfriar el asa en el borde de
la caja de Petri la caja de Petri
Tomar un trozo 3x3 mm de Tomar un trozo 3x3 mm de la
la muestra de hongo muestra de hongo
Colocar el trozo de hongo en el centro Colocar el trozo de hongo en el centro
de la parte plana del tubo inclinado del medio de cultivo de la caja de Petri
Tapar las cajas de Petri y los
tubos, escribir los datos, voltear y
proceder a incubar por 72 hr.
Tapar el tubo Cerrar la caja de Petri
Flamear el asa para retirar residuos Flamear el asa para retirar residuos
de bacteria de bacteria
3
.
Fin
4
.
RESULTADOS (Valoración 1.5/5.0)
BACTERIAS
(todas las imágenes son tomadas de la práctica de laboratorio en la universidad areandina por Shecil
TECNICA DE SIEMBRA ¿PRESENTA ¿SE EVIDENCIA SOLO ¿CONSIDERA QUE LA
CRECIMIENTO? UN TIPO DE COLONIA? CALIDAD DE TECNICA
PUREZA FUE LA ADECUADA?
Si
Caja (estrías por
agotamiento)
La técnica fue adecuada,
pero se esperaba
disminución de la bacteria
Si presenta
Si técnica fue buena ya que se
Tubo con caldo (siembra logra apreciar a vista el
medio de líquido) crecimiento
Si presenta
Tubo inclinado (punción y
zig—zag)
Si Se evidencia poco
crecimiento
Si presenta
Tubo recto (punción Existe crecimiento en poca
central) proporción
5
.
HONGO LEVADURA
TECNICA DE SIEMBRA ¿PRESENTA ¿SE EVIDENCIA SOLO ¿CONSIDERA QUE LA
CRECIMIENTO? UN TIPO DE COLONIA? CALIDAD DE TECNICA
PUREZA FUE LA ADECUADA?
Caja (estrías por Si La técnica fue buena y se
agotamiento) evidencia que existe
disminución de la bacteria
Si presenta
Tubo inclinado (punción y Si La técnica es buena, aunque
zig—zag) se evidencia unión de las
estrías
Si presenta
HONGO MICELIAL
TECNICA DE SIEMBRA ¿PRESENTA ¿SE EVIDENCIA SOLO ¿CONSIDERA QUE LA
CRECIMIENTO? UN TIPO DE COLONIA? CALIDAD DE TECNICA
PUREZA FUE LA ADECUADA?
Caja (punción central)
Es buena la técnica y
Si podemos observar que el
crecimiento se desarrolla en
el centro
Si presenta
Tubo recto (punción Si La técnica fue buena y se
central) logra observar a simple
vista
Si presenta
BACTERIA S. AUREUS
6
.
MEDIO DE CULTIVO DESCRIPCION DE ¿PRESTA CRECIMIENTO SI HAY CRECIMIENTO
MEDIO SIN SEMBRAR DE LA BACTERIA? DESCRIBA COMO SE
VISUALIZAN LAS
COLONIAS Y EL MEDIO
DE CULTIVO
Se evidencia disminución
Agar nutritivo (AN) de la bacteria en las estrías
y su color no genera
cambios
La caja es de color Si muestra crecimiento
transparente
Agar cloranfenicol, glucosa
y extracto de levadura
(YGC)
La caja es de color No se evidencia
transparente crecimiento
Agar Baird Parker (BP) Se evidencia crecimiento en
las estrías generando
sombra y separación de la
bacteria las cuales se
observan de color azul
La caja es de color crema Si muestra crecimiento
Agar E. M. B Presenta un leve
crecimiento en las estrías y
el color no cambia
Si muestra crecimiento
La caja es de color vino
tinto
Agar manitol salado (MS) Se evidencia disminución
de la bacteria en las estrías,
aparecen puntos de
separación y el color
cambio (amarillo)
La caja es de color rosa Si muestra crecimiento
Agar MacConkey (McK)
La caja es de color
morado claro No se evidencia
crecimiento
7
.
ANALISIS DE RESULTADOS (Valoración 1.5/5.0)
ANALISIS TECNICAS DE CULTIVO
En esta práctica de laboratorio pudimos analizar las técnicas de siembra para el aislamiento y
mantenimiento de bacterias y hongos
COLONIA– CULTIVO PURO
Es un cultivo que contiene un solo tipo de microorganismo, cuando su finalidad es caracterizar un
determinado tipo de microorganismo y obtenerlo mediante técnicas de aislamiento. En general, la
apariencia de las bacterias es cremosa como los hongos levaduras, mientras que los hongos miceliales
tienen un aspecto algodonoso o granuloso.
SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Es el proceso mediante el cual se toma una porción de una población de microorganismos, y se lleva
a un medio de cultivo para que prolifere. Los medios de cultivo sólidos y líquidos son los más
utilizados en los diferentes tipos de siembra (siembra por aislamiento, siembra masiva, siembra en
fondo, siembra en superficie).
Pudimos determinar en algunas técnicas en donde no solo se logran mantener a los microorganismos
sino también llegan a tener colonias aisladas para posteriormente lograr un cultivo puro.
SIEMBRA DE BACTERIAS.
SIEMBRA DE ESTRÍAS POR AGOTAMIENTO
Este es un procedimiento para aislar bacterias ya que su propósito es el de obtener, a partir de un
elevado número de bacterias, una cantidad reducida de estas, separadas sobre la superficie del medio
de cultivo.
Bacteria Staphylococcus (se realiza técnica de siembra de estrías por agotamiento)
Resultado: Se evidencia que disminuye la densidad de la bacteria, pero no lo esperado.
SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO (CALDO)
Este es un procedimiento fácil de realizar, pero al no permitir visualizar colonias no se puede saber si
esta puro a simple vista por lo que requeriría cerciorarse haciendo una tinción para visualizarla al
microscopio.
Bacteria Staphylococcus (se realiza técnica en medio liquido)
Resultado: No se aprecia la formación de colonias, pero se evidencia la existencia de enturbiamiento
por lo cual determinamos que hay crecimiento de la bacteria.
SIEMBRA POR PUNCIÓN Y ZIGZAG EN TUBO INCLINADO
Este es un procedimiento apropiado para mantener cepas de microorganismos al ocupar poco
espacio. Este tipo de siembra permite el cultivo de microorganismos aerobios o anaerobios
facultativos y además se utiliza para almacenar cultivos durante cortos períodos de tiempo a
8
.
temperaturas de 4ºC, o para la amplificación de un inóculo pequeño.
Bacteria Staphylococcus (se realiza técnica de siembra por puncion y zigzag en tubo inclinado)
Resultado: Se evidencia poco crecimiento de la bacteria, la forma de visualizar que hay
microorganismos es con el enturbiamiento del líquido y en este caso hay poco enturbiamiento por lo
cual hay pocos microorganismos.
SIEMBRA DE HONGOS LEVADURIFORMES (LEVADURAS).
Debido a que este microorganismo en forma y apariencia de las colonias es similar a las bacterias, se
debe sembrar por la técnica de estrías por agotamiento y por punción y zigzag en tubo inclinado, en
los medios para hongos suministrados.
Hongo levadura (se realiza técnica de siembra de estrías por agotamiento)
Resultado: El resultado fue positivo ya que se logró evidenciar el aislamiento de las colonias de
hongos.
Hongo levadura (se realiza técnica de siembra por puncion y zigzag en tubo inclinado)
Resultado: Se logra evidenciar el crecimiento de la colonia, aunque se generó una unión de las
estrías.
SIEMBRA DE HONGOS MICELIALES
Siembra por punción central.
Este es un procedimiento para aislar fácilmente hongos miceliales. Al seleccionar un hongo con las
características de tipo micelial, se evita escoger una colonia que este sobrelapada con otra para así
lograr un cultivo puro.
Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio
semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la
retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias u hongos.
Resultado en caja: Se logra evidenciar un crecimiento del hongo desde el centro hacia los extremos.
Resultado en tubo: Se logra evidenciar el crecimiento del hongo, se observa que toma una tonalidad
de color gris oscuro.
AGAR NUTRITIVO: El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas.
Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor
las colonias pequeñas.
9
.
Staphylococcus aureus:
Resultado: No se evidencia cambio en el color y se visualiza disminución de la bacteria en las
estrías.
AGAR CLORANFENICOL, GLUCOSA Y EXTRACTO DE LEVADURA (YGC): Detección y
recuento de Levaduras y Mohos en productos lácteos.
Staphylococcus aureus
Resultado: No se evidencia crecimiento de la bacteria ni se visualiza ningún cambio.
AGAR BAIRD PARKER (BP): Es uno de los medios estándar para el aislamiento y recuento de
Staphylococcus aureus, además de su diferenciación de otros Staphylococcus, es posible que en este
medio crezcan organismos diferentes de los Staphylococcus.
Resultado: Se observa que las bacterias toman un color azul y se evidencia un crecimiento en las
estrías generando sombra y separación de las bacterias.
AGAR EMB: es un medio de cultivo solido selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de
bacilos Gram negativos, principalmente de la familiar enterobacteriaceae y otros bacilos Gram
negativos no exigentes.
Staphylococcus aureus
Resultado: No se evidencia un cambio en el color, pero se logra observar un leve crecimiento en las
estrías.
AGAR MANITOL SALADO: Es un medio de cultivo que utiliza la microbiología permite el
crecimiento de bacterias Gram positivas mientras inhibe el crecimiento de Gram negativas.
Staphylococcus aureus
Resultado: Se logra visualizar principalmente un cambio en el color además de lograr percibir que
aparecen puntos de separación y disminución de la bacteria.
AGAR MACCONKEY: Es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y
diferenciación de bacilos Gram negativo fermentadores y no fermentadores de lactosa, se utiliza con
frecuencia para el aislamiento de coliformes.
Staphylococcus aureus
Resultados: No se evidencia crecimiento de la bacteria ni se visualiza ningún cambio.
BIBLIOGRAFIA y/o CIBERGRAFIA (Valoración 0.5/5.0)
10
.
Bibliografía
MICROBIOLOGÍA GENERAL. ( 2020 ). SIEMBRA, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS .
Obtenido de
[Link]
%20BIOQ%20Y%[Link]
microbiologia paso a paso . (s.f.). Metodos de siembra. Obtenido de
[Link]
microkit . (s.f.). medios de cultivo . Obtenido de [Link]
agar-y-g-c/
mirian G, F. U. (2007 ). Obtenido de [Link]
Ruera, S. C. (5 de 04 de 2006). MÉTODOS DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGI-CO. Obtenido de
[Link]
salazar, d. a. (24 de 08 de 2014). Agar nutritivo. Obtenido de
[Link]
selene R, Q. G. (02 de 10 de 2014). Microbiologia . Obtenido de
[Link]
m=1
TRABAJO PRÁCTICO Nº 2. (s.f.). Cultivo de microorganismos. Obtenido de
[Link]
Trivino, A. R. (2011). conceptos y practica de microbiologia general. palmira: universidad nacional de
colombia .
11
.
12
