UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA MESA
FACULTAD DE CIENCIAS
N° 4
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N° 4
TITULACIÓN POTENCIOMÉTRICA DEL
ÁCIDO FOSFÓRICO Y DEL AMINOÁCIDO
GLICINA
Integrantes:
Blaz Villafuerte, Fiorella Romina 20141013
Caurino Salazar, Liz Dayana 20130969
Fuentes Guevara, Dennisse Yeriot 20161438
Mendizábal Huaman, Camila 20161448
20161449
Morales Robladillo, Sammy Anthony
Grupo: Lunes 2:00 – 4:00 PM (F*)
Fecha de la práctica: 25/09/17
Fecha de entrega del informe: 02/10/17
2017-I
I. INTRODUCCIÓN
TITULACÍON POTENCIOMÉTRICA DE UN AMINOÁCIDO
Las proteínas son macromoléculas compuestas por unidades más pequeñas conocidas como
aminoácidos. En las proteínas se encuentra básicamente veinte aminoácidos diferentes, los cuales
contienen un grupo carboxilo y un grupo amino unidos al mismo átomo de carbono (carbono α)
estos aminoácidos difieren unos de otros solo por la naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos
“R” que varían tanto en estructura, como en tamaño y carga eléctrica e influyen en la solubilidad en
agua.
Los grupos carboxilo y amino de los aminoácidos funcionan como ácidos y bases débiles,
respectivamente, y como tales, se ionizan cuando están en solución. Los aminoácidos tienen al
menos dos pK, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres a cuatro
formas iónicas diferentes. Cuando la forma iónica tiene una carga neta de cero se dice que se
encuentra en su PUNTO ISOELÉCTRICO o pI. Al variar de pH, cambia la proporción de las
formas iónicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminoácidos.
TITULACIÓN POTENCIOMÉTRICA DE UN ÁCIDO POLIPRÓTICO
Los ácidos polipróticos o ácidos protónicos son ácidos que tienen más de un hidrógeno ionizable.
Estos ácidos disocian en más de una etapa, y cada etapa tiene su propia constante de equilibrio. Los
ácidos poliprotónicos no ceden de una vez y con la misma facilidad todos los protones, sino que lo
hacen de forma escalonada y cada vez con mayor dificultad. Las correspondientes constantes de
acidez disminuyen mucho, generalmente por un factor de orden 10−4.
El ácido fosfórico tiene tres protones ionizables que son liberados gradualmente en relación inversa
a su afinidad.
II. RESULTADOS
Cuadro N°1: Valores de pH de la titulación del aminoácido Glicina
mL NaOH pH
0 1.60
1 1.64
2 1.68
3 1.72
4 1.76
5 1.81
6 1.84
7 1.89
8 1.98
9 2.05
10 2.12
11 2.20
12 2.29
13 2.38
14 2.52
15 2.66
16 2.85
17 3.11
18 3.87
19 8.20
20 9.08
21 9.49
22 9.75
23 10.06
24 10.43
25 10.80
26 11.55
27 11.90
28 12.05
(Fuente: Manual de Prácticas de Bioquímica)
Cuadro N°2: Valores de pH de la titulación del Ácido Fosfórico
mL NaOH pH mL NaOH pH
0 1.20 28 6.17
1 1.23 29 6.27
2 1.27 30 6.36
3 1.32 31 6.46
4 1.37 32 6.54
5 1.42 33 6.63
6 1.50 34 6.71
7 1.57 35 6.80
8 1.65 36 6.88
9 1.72 37 6.98
10 1.80 38 7.07
11 1.88 39 7.18
12 1.96 40 7.29
13 2.05 41 7.42
14 2.14 42 7.58
15 2.24 43 7.80
16 2.35 44 8.16
17 2.47 45 9.10
18 2.61 46 9.84
19 2.77 47 10.20
20 2.99 48 10.42
21 3.34 49 10.59
22 4.44 50 10.71
23 5.23 51 10.83
24 5.53 52 10.92
25 5.77 53 10.97
26 5.92 54 11.07
27 6.06 55 11.14
(Fuente: Manual de Prácticas de Bioquímica)
III. DISCUSIONES
TITULACIÓN DEL AMINOÁCIDO GLICINA
Para las titulaciones de aminoácidos, una curva de titulación consiste en graficar el pH (o el pOH)
contra los mililitros de titulante. Estas curvas son muy útiles para juzgar la factibilidad de una
titulación y para seleccionar el indicador adecuado (Day & Underwood, 1989). La curva de
titulación descrita por la Glicina, se trata de una curva sigmoidal (Voet & Voet, 2006).
La titulación de la Glicina se llevó a cabo tomando conceptos previos sobre el aminoácido. Dicho
aminoácido presenta doble disociación, al añadir Hidróxido de Sodio.
Al principio, a pH ácido, la Glicina se encuentra como un ácido diprótico, ya que tanto el grupo
amino como el carboxilo se encuentran protonados, es decir, a pH = 1, el 100% de las moléculas de
aminoácido se encuentran en forma de catión (González, 2011).
La Glicina a pH se puede observar al momento que titulamos, con un crecimiento por cada mililitro
de Hidróxido de Sodio que es añadido, entre un rango no mayor a (+0.8), lo que claramente se
puede apreciar hasta llegar al tope de 13 ml de Hidróxido de Sodio.
La diferencia para variar de pH (+0.14) al añadir el mililitro número 14 de Hidróxido de Sodio,
indica dos cosas: La primera, que teóricamente, el pKa1=2.4, se encuentra al añadir dentro del
rango [13-14 ml] de Hidróxido de Sodio; así como el momento transitorio (formación de la meseta
en la curva), lo cual no hace muy empinada por ese sector.
Cuando pH = pK1, la glicina se encuentra como 50% cation + 50% zwitterion. Por lo tanto, el par
-COOH/-COO- puede servir como un tampón amortiguador en la región de pH cerca del valor pK1
(González, 2011).
Al seguir añadiendo mililitros de Hidróxido de Sodio, ha denotar una sección donde por cada
mililitro que es añadido, el pH varia drásticamente, haciendo la curva más empinada. Este cambio
repentino de pH ha de indicar otra fase en el proceso de titulación: Aproximación al Punto
Isoeléctrico.
En el pI, prácticamente el 100% del aminoácido se encuentra como ion dipolar o zwitterion, de
forma tal que el aminoácido presenta una carga neta nula (el aminoácido es eléctricamente neutro)
(Voet & Voet, 2006).
De ser así, el punto Isoeléctrico de la Glicina se encontraría al momento de añadir un rango entre
[18-19 ml] de Hidróxido de Sodio. También debemos considerar, factores externos, como el estado
de la Glicina del Laboratorio, que se encontraba muy gastado. Razón por la cual también pudo
haber influido en el cambio brusco de pH.
La glicina a pH básico, si se siguen añadiendo equivalentes de base, el grupo amino (-NH3+) se
disocia también, obteniéndose la forma totalmente desprotonada de la glicina; este equilibrio está
definido por el pK2. Cuando pH = pK2 la glicina se encuentra como 50% zwitterion + 50% anión.
Por lo tanto, el par -NH3 +/-NH2 puede actuar como un sistema tampón o disolución amortiguadora
en la región de pH cerca del pK2 (González, 2011).
El pKa Teórico que hallamos es 9.8, razón por la cual ha de determinar que se encuentra en el rango
de Hidróxido de Sodio entre [22-23] ml.
Y finalmente, a un pH mayor al pKa2, el 100% de las moléculas de aminoácido se encuentran en
forma de ion negativo o anión (González, 2011).
TITULACIÓN DEL ÁCIDO FOSFÓRICO
El ácido fosfórico puede seguir tres ionizaciones, por lo tanto tiene tres valores de pKa. El ácido
fosfórico como grupo fosfato tiene gran importancia biológica debido a su papel en DNA/RNA, en
moléculas energéticas como el ATP, en la fosforilación de proteínas, etc. A la forma química del
H3PO4, una vez que el primer H+ se ha liberado totalmente, se tiene H2PO4-. Pero como en esta
reacción también se libera Na+ (al combinarse el OH- y el H+ para producir agua), podemos poner
que los iones en la disolución están como Na+H2PO4-, o simplemente NaH2PO4 (dihidrógeno
fosfato de sodio). Así, esta primera ionización se escribe como sigue:
NaOH + H3PO4 → H2O + NaH2PO4
La curva se puede resumir en:
Etapa inicial: la solución contiene un ácido débil, el pH depende del pKa del ácido.
Segunda etapa: La base añadida reacciona con igual número de moles de ácido, solo
reacciona un protón por molécula de ácido. El pH queda determinado a partir de la solución
amortiguadora que se forma.
Tercera etapa: Se alcanza el punto de equivalencia, la concentración de protones queda
determinada por la raíz cuadrada del producto de Ka1.Ka2
Cuarta etapa: Luego del primer punto de equivalencia se forma un buffer y el pH depende
de él.
Quinta etapa: Segundo punto de equivalencia, la solución contiene la sal formada, la cual
contiene el anión del ácido débil, este anión reacción con el agua para producir OH-, el pH
depende de Kb.
Sexta etapa: La base titulante estará en exceso y se determina [OH-] en la solución.
En la curva se puede apreciar aproximadamente los puntos de equivalencia, esta curva es casi
idéntica a los modelos teóricos.
Se observó una variación creciente de pH, debido a la adición de NaOH 1M. Esto se debe a que a
medida que ingresan los iones OH- y entran en contacto con el H3PO4 los iones H+ del mismo
reaccionan estabilizando la concentración por lo cual el número de H+ disminuye y el pH aumenta.
El primer compuesto obtenido se define como fosfato primario, cuando se cambia otro H+ por otro
Na se llama secundario y por último del mismo modo el terciario. Así, NaH2PO4, con un átomo de
hidrógeno sustituido, se denomina fosfato primario de sodio, y Na3PO4, con tres átomos de
hidrógeno sustituidos, fosfato terciario de sodio.
Según Lehninger (1978), la segunda zona de amortiguación se encuentra en el intervalo de 6.36 a
7.36 de pH, el cual corrobora el dato obtenido de la titulación del buffer fosfato; también menciona
que los pares ácido-base conjugados son tampones efectivos entre aproximadamente 25% y 75% de
neutralización de la especie dadora de protones.
IV. CONCLUSIONES
El aminoácido glicina, al ser un diprótico, cuenta con los otros dos radicales, que se encargan de
la disociación al momento de ser titulado, siendo estos, efectivamente dos disociaciones, por
ende dos momentos transitorios (pKa1 y pKa2), así como 3 momentos (100% acido, 100%
neutro, 100% básico)
Cuando se alcanza un equilibrio (pH=pK1 o pKa2), se adopta una capacidad amortiguadora
muy eficaz.
En la zona de estabilidad donde el pH de ácido fosfórico es igual al pKa la variación de pH es
lenta debido a que el sistema buffer entra en acción.
Dependiendo la necesidad del operador se puede dar uso a cada buffer obtenido a partir de una
misma sustancia.
V. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
Brown, T.L.; Le Way, H.E. & Bursten, B.E. (1992). Química: La ciencia central. México:
Editorial Prentice - Hall Hispanoamericana S.A.
Gonzales, V. (2012). pH y equilibrios acido-base. Universidad de Salamanca:
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular.
González, V. (2011). pH y equilibrios acido-base. Universidad de Salamanca:
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular.
Voet, D. & Voet, J. (2006). Bioquímica. Editorial Panamericana, S.A.
Day, Jr.R.A. & Underwood, A.L. (1989). Química Analítica Cuantitativa. México:
Editorial Prentice –Hall Hispanoamericana, S.A.
