DETERMINACIÓN DEL PERFIL
LIPÍDICO
Sol Gabriell Ramírez Becerra, Valeria Maria Fuentes Cantillo, Andrea Carolina
Barón Naranjo, Luis Miguel Bautista Angarita
Departamento de Ingeniería,
Universidad El Bosque Bogotá,
Colombia
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I. RESUMEN
II. RESULTADOS
Durante esta práctica de laboratorio se cuantificó por
espectrofotometría visible el perfil lipídico en una
Muestra Absorbancia Absorbancia
muestra de suero bovino, y se determinó el colesterol
(nm) (nm
total así como los triglicéridos por medio de un
Colesterol Triglicéridos
método enzimático con ayuda de kits comerciales.
Total
Hay que tener en cuenta que los cálculos de
concentración se realizaron indirectamente por la Blanco 0.0 0.0
cuantificación de producto enzimático. En esta
práctica se logra entender la intensidad del color en Patrón 0.088 0.205
cada muestra como un signo representativo de que la
reacción enzimática fue exitosa. Por lo anterior, el Problema 1 0.072 0.098
color característico confirma la formación del
producto. Problema 2 0.075 -
En este informe se identificaron diferentes enzimas
que actuaban en la reacción tanto para la de colesterol
como la de triglicéridos. identificando su Tabla 1. Resultados de la espectrofotometría
clasificación, estructura y demás características.
Lo anterior con el fin de evaluar el diagnóstico y En la tabla 1. se muestran los resultados obtenidos de la
seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias
o secundarias teniendo en cuenta los altos niveles de absorbancia obtenida en la muestra patrón y la muestra
colesterol que se asocian a riesgo de padecer del suero que son usadas para calcular el colesterol g/L.
enfermedades cardiovasculares.
o triglicéridos en mg/L de la siguiente manera:
PALABRAS CLAVE: triglicéridos, colesterol,
enzima, sustrato, producto, espectrofotometría, Para la determinación de colesterol:
absorbancia.
C olesterol(g/L) = Ap * f
f = 2.00 g/L / Am consumido alcohol y la administración de fármacos que
Donde: alteren los niveles lipídicos debe ser suspendida.
Ap = Absorbancia del patrón Aunque se pueden hacer mediciones de lipoproteínas y
Am = Absorbancia de la muestra de lípidos en sangre, es recomendable extraer el suero
de ésta por medio de un proceso de centrifugación. [2]
Para la determinacion de trigliceridos: Para la determinación de colesterol total y triglicéridos
se utiliza un método enzimático que posteriormente
T riglicéridos(mg/L) = Am/Ap * 200 = mg/dL permite una valoración colorimétrica (procedimiento de
T riglicéridos(mmol/L) = Am/Ap * 2, 26 = mmol/L análisis químico basado en la intensidad de color de las
disoluciones)[3].
Cálculos del resultado:
A continuación se muestra en la figura 1 los
Para la determinación de colesterol:
componentes utilizados en el laboratorio y su función
para poder realizar la práctica de la determinación del
2,00 g/L
f= 0,072 = 27, 777
perfil lipídico.
0, 088 × 27, 777 = 2444 mg/dL
2,00 g/L Componente Función
f= 0,075 = 26.666
0, 088 × 26.666 = 2346 mg/dL Clorofenol El clorofenol es un
compuesto importante al
momento de la
Para la determinacion de trigliceridos: formación de una
quinoamina roja de 505
nm, ayudando a que se
0,098
0,205 × 200 = 95, 61 mg/dL de la coloración.
0,098
0,205 × 2, 26 = 1, 06 mmol/L Lipoprotein lipasa (LPL) Es la enzima encargada
de hidrolizar los
triglicéridos de las
lipoproteínas LDL y
III. ANÁLISIS DE RESULTADOS permite la captación de
los ácidos grasos libres.
Es clave en el control del
El conjunto de pruebas que se realizan para determinar
flujo de los
concentraciones de triglicéridos y colesterol en un triacilgliceroles
circulantes.
animal se llama perfil lipídico o panel de lípidos, estas
pruebas permiten indicar o evaluar el riesgo de que un Buffer Good (pH 6,8) Es una solución a base
de agua que contiene una
individuo desarrolle enfermedades cardiacas o mezcla de un ácido y una
relacionadas como la arteriosclerosis o Hiperlipidemia. base. Ayuda a dar
estabilidad a las enzimas,
[1] ya que es lo
Existen diferentes métodos analíticos para hacer la suficientemente estable
químicamente como para
determinación de colesterol y/o triglicéridos en un resistir la degradación
individuo. Las muestras de sangre deben obtenerse tras que podrían causar las
enzimas.
un periodo de ayuno de aproximadamente 12 horas,
durante en el periodo anterior de 2 o 3 días no se haya
Figura 1. compuestos usados en la práctica para las Del mismo modo que en el caso de la determinación de
reacción propuestas colesterol, se utilizó un kit comercial que contenía los
Para el colesterol: sustratos, reactivos y enzimas específicos para la
cuantificación colorimétrica de la cantidad de
Se usó un kit comercial que incluye las enzimas y los triglicéridos en la muestra problema correspondiente.
sustratos necesarios para las reacciones que permite la
valoración colorimétrica del contenido de colesterol. La
prueba se basó en la acción de 3 enzimas (Colesterol
esterasa, colesterol oxidasa y peroxidasa) que
formaron un producto coloreado, con absorbancia
máxima a 505 nm.[3]
En la Tabla 2. se puede observar:
1. Una colesterol ester hidrolasa hidroliza los
ésteres de colesterol a colesterol y ácidos Tabla 3. Acción enzimática en los triglicéridos
grasos libres.
2. Una colesterol oxidasa oxida todo el colesterol Tal como se muestra en la Tabla 3:
a colestenona y peróxido de hidrógeno.
3. El peróxido de hidrógeno es sustrato de una 1. Una lipasa hidroliza los triglicéridos, dando
peroxidasa que junto con 4-aminofenazona da como resultado glicerol y ácidos grasos libres.
lugar a la formación de una quinona roja. 2. El glicerol formado es el sustrato de una
glicerol quinasa que en presencia de ATP lo
fosforila a glicerol-3-fosfato.
3. El glicerol-3-P es oxidado a
dihidroxiacetona-3-P por una glicerol 3-fosfato
oxidasa, generando también peróxido de
hidrógeno.
4. El peróxido de hidrógeno es el sustrato de una
peroxidasa, que en presencia de p clorofenol y
4-aminofenazona forman una QUINONA roja
cuantificable a 505 nm. Esta quinona formada
es proporcional a la concentración de
Tabla 2. Acción enzimática en el colesterol
triglicéridos presentes en la muestra. [3]
Para triglicéridos:
Las valoraciones colorimétricas que se mencionan
anteriormente hacen referencia a la espectrofotometría,
que se basa en la capacidad que tienen las diferentes Los resultados calculados en nuestro grupo mostraron
moléculas para absorber radiaciones. Las longitudes de que el perfil lipídico realizado al suero bovino para
onda de las radiaciones que una molécula puede triglicéridos es equivalente a 1,06 mmol/L (Tabla 2).
absorber y la eficiencia con la que lo hace dependen de Así mismo se observó que otro grupo encargado
la estructura atómica y de otras condiciones como pH, también de la cuantificación de los triglicéridos, obtuvo
temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica etc, un resultado de 0,832 mmol/L A partir de esto,
por lo que esta técnica es una herramienta valiosa para podemos decir que los resultados están muy cercanos,
la determinación y caracterización de biomoléculas. [4] en comparación al caso de los del colesterol que
muestran los siguientes resultados:
Fue importante conocer que para determinar la cantidad
de, en este caso, colesterol y triglicéridos el concepto Para el colesterol, se calculó un total de 2444 mg/dL
de absorbancia es significativo ya que en base a la (Tabla 2). En el caso de otro grupo encargado de
variación de este dato se realizan los cálculos para realizar la misma práctica se encontró un resultado de
lograr la cuantificación de estos mismos[4]. 1862 mg/dL. Considerando esto, es significativa la
diferencia entre los dos grupos encargados del
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de desarrollo experimental, teniendo en cuenta que los dos
onda de intensidad Io incide perpendicularmente sobre poseíamos los mismos instrumentos y los mismos
una disolución que absorbe luz o cromóforo, el sustratos y enzimas. Se concluyó entonces que
compuesto absorbe una parte de la radiación incidente ocurrieron errores sistemáticos en la práctica. Se
y deja pasar el resto. denomina error sistemático a aquel que es constante a
lo largo de todo el proceso de medida y, por tanto,
La absorbancia es un concepto relacionado con la afecta a todas las medidas de un modo definido y es el
muestra ya que indica la cantidad de luz absorbida por mismo para todas ellas [5]. Estos errores, pueden
la misma. La cantidad de luz absorbida dependerá de la afectar notablemente los resultados, por lo que en
distancia que atraviesa la luz a través de la solución del próximas prácticas se propone realizar el procedimiento
cromóforo y de la concentración de éste. al mismo tiempo con todos los equipos para garantizar
Para hacer este tipo de pruebas se usa un la calidad del desarrollo práctico.
espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la
longitud de onda, es decir, la luz que pasa por una El valor promedio normal de triglicéridos son de ≤ 0,4
solución y mide la cantidad de luz absorbida por la mmol/L.[6] Siendo así, los valores de triglicéridos 1,06
misma, en este caso la longitud de onda usada (max) es mmol/L de nuestro grupo y 0,832 mmol/L del otro
de 505 nm ya que el sustrato coloreado presenta un grupo, estarían por encima del rango de triglicérido
máximo de absorbancia de 505 nm aprox [2]. aceptado como normal.
Continuando con el tema de la longitud de onda,
podemos entender que la obligatoriedad del uso de un Según el rango promedio para la concentración
“blanco” es que este tiene un color innato, que se resta sanguínea de colesterol, los valores obtenidos
a las siguientes muestras. estuvieron por encima de los valores normales, cuyo
rango es de 80 hasta 240 mg/dL.[6] Los resultados que
obtuvimos en el laboratorio en unidades de mg/dL son formación del producto generado por la
2444 (nuestro grupo) y 1862 (otro grupo). En base a reacción enzimática.
esta información se establece que el bovino podría estar ● Se afianzó en el uso y función del
teniendo una mala alimentación y se estima la espectrofotómetro así mismo diversos
posibilidad de que la especie pudiera tener alguna conceptos como absorbancia, transmitancia,
enfermedad de carácter lipídico o que se encontrará longitud de onda, entre otros.
durante las 2-4 últimas semanas de gestación, donde se ● Se aprendió el uso básico de las micropipetas,
produce un aumento de las necesidades energéticas sus usos y sus respectivos cuidados para el
debido al desarrollo del feto y a la síntesis de calostro. desarrollo de la práctica. Del mismo modo,
fundamentos para prácticas futuras propuestas
Por otro lado, se debe tener en cuenta que durante la por la academia.
práctica no fue posible dejar la incubación a 37 grados
centígrados, como lo indicaba la práctica, ya que el V. REFERENCIAS
baño estaba a una temperatura de 60 grados
[1]D. Martin, P. Mayes, V. Rodwell and R. Murray,
centígrados. Si se hubiera tomado la decisión de
Bioquímica de harper. México: Editorial el Manual
colocar las muestras a esa temperatura, muchas
Moderno, 2001.
enzimas perderían sus propiedades catalíticas, haciendo
que sus estructuras terciarias y cuaternarias
[2]N. Abril Díaz1 , Bárcena Ruiz1 , Fernández Reyes
desarrollarían una desnaturalización completa y dejaría
,Galván Cejudo1 , Jorrín Novo1 ,Peinado
la muestra la reacción enzimática al producto de
Pein,Meléndez-Valdés1 , ITúnez Fiñana,
interés que este caso es las quinonas. Por lo anterior, si
"Espectrofometría: Espectros de absorción y
los datos fueran analizados en el espectrofotómetro,
cuantificación colorimétrica de biomoléculas",
arrojaría datos totalmente incorrectos.
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, 1
Además otros errores que se pudieron cometer en la
Campus Universitario de Rabanales, Córdoba., 2020.
práctica fue al momento de preparar las muestras, ya
que se tenían que manejar volúmenes tan pequeños que [3]E. Aparicio canela, "Técnicas colorimétricas",
en ocasiones no se podía fijar si en realidad se tenía la Revista.cleu.edu.mx, 2020. [Online]. Available:
sustancia en la micropipeta. Otro factor es que algún http://revista.cleu.edu.mx/new/descargas/1703/articulos
reactivo pudo quedar en las paredes de los tubos del /Articulo08_Tecnicas_colorimetricas.pdf.
espectrofotómetro sin entrar en contacto con las otras
sustancias, perdiendo así cantidad de sustrato que no [4]M. Moyano Bautista, and C. Rodríguez,
fue convertido en el producto establecido, haciendo que "Suplementación energética y su efecto en el nivel de
los datos arrojados por el espectrofotómetro no sean tan colesterol y el perfil hormonal preovulatorio en vacas",
precisos o reales. Energy supplementation and its effect on cholesterol
levels and preovulatory hormonal profile in cows.
IV. CONCLUSIONES Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia,
● Se determinó las concentraciones de colesterol Tunja, p. 5, 2020.
y triglicéridos indirectamente, gracias a la
[5] UGR (2020). TÉCNICAS AUXILIARES DE
LABORATORIO. [online] TEB. Available at:
https://www.ugr.es/~andyk/Docencia/TEB/Errores.pdf
[Accessed 20 Oct. 2020].
[6] Jiménez, A. (2020). Lipidosis hepática. [ebook]
axonveterinaria, p.3. Available at:
http://axonveterinaria.net/web_axoncomunicacion/criay
salud/27/cys_27_56-58.pdf [Accessed 21 Oct. 2020].
