Luz Marina Lizarazo Forero Ph.

ESTRUCTURA DE LA PARED DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

[Link] MEMBRANA EXTERNA (OUTER MEMBRANE)

[Link]
[Link] PERIPLASMICO
 La pared de las bacterias Gram-negativas es estruturalmente más compleja que las de
las bacterias Gram-positivas
 Al observar un corte transversal al microscópio electrónico: se puede apreciar 5
capas, alternándose las claras (L2, L5) y las oscuras (más densas a los electrones: L1,
L3, L4).
-Las capas L1 a L3 corresponde a la membrana externa o outer membrane
-La capa L4 corresponde al peptidoglicano, que se encuentra inmerso en la capa clara
L5, que es el espacio periplásmico.

Figura1. Fuente: Harvey, A.R. Champe, C.P. Fischer, D.B. 2007.

 1. UNA MEMBRANA EXTERNA (=OUTER MEMBRANE)

¿Qué es la membrana externa? es un mosaico fluido asimétrico, pero esta fluidez es
menor que la de la membrana citoplasmática. Forma una especie de saco rígido de lona
alrededor de la bacteria.

¿Cuál es la composición de la membrana externa (=outer membrane)? Es una

estructura con dos capas: (Figura 2)

 Una capa externa formada por una molécula anfipática (es decir, con terminaciones
tanto hidrófobas como hidrófilas) denominada lipopolisacárido (LPS).
 Una capa interna: que contiene fosfolípidos (FL) lipoproteinas (LPP) o
lipoproteína mureína o lipoproteína de Braun y otras proteínas
 Figura 2. Fuente: Microbiologia Médica (Jawetz,Melnick y Adelberg, 2002)

 Capa externa de la membrana externa(=outer membrane): (Figura 2)

 Lipopolisacárido (LPS) se sintetiza en la membrana citoplasmática y se transporta
hasta su posición exterior definitiva y Consta de tres componentes:
 Lípido A, es un glucolípido, la porción lipídica es hidrófoba
 Heteropolisacárido o núcleo (core, en inglés)
 Polímeros de oligosacáridos de longitud variable
Veamos cada uno por separado:
 Lípido A
 Compuesto por un disacárido de dos unidades de glucosamina fosforilada unidas por
enlace β (1→6). Esta Esterificado (es decir los grupos hidroxilos están esterificados
a varios ácidos grasos de cadena larga β-hidroxilados) con ácidos grasos (que pueden
ser ácido caproico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico y ácido esteárico. El
ácido mirístico, siempre está presente y es exclusivo de este lípido, los otros ácidos
grasos, junto con los grupos sustituyentes en los fosfatos, varían de acuerdo con
las especies bacterianas.
 Heteropolisacárido o núcleo se divide en tres partes:
 Una región o centro interno: Compuesta por: ácido 3-desoxi-D-
manooctulosónico (CDO), heptosas, y L-glicero-D-manoheptosa (Hep).
 Una región o centro externo: Compuesta por: hexosas (galactosa, glucosa, y N-
acetilglucosamina).
 Polímeros de oligosacáridos de longitud variable llamados también
somáticos o antígeno O repetido (presente en algunas bacterias Gram
negativas)
-Contienen un número variable (más de 40) unidades de oligosacáridos repetidas
compuestas por tres a cinco monosacáridos cada una.
-En algunos casos contiene azúcares poco comunes como 6-desoxihexosas y 3,6-
didesoxihexosas y ácido aminohexurónico.

Funciones del Lipopolisacárido LPS:

 Responsable de la menor fluidez de dicha membrana, y por lo tanto de la mayor
resistencia física.
 Es la endotoxina bacteriana*, y es el responsable de la iniciación de la respuesta
inmunitaria en el sujeto infectado y, por tanto, de la fiebre y el malestar.
 Las cadenas de ácidos grasos, al estar sobre la superficie de la pared repelen los
compuestos hidrofóbicos (antibióticos)
 Actúa como receptor para muchos bacteriófagos y bacteriocinas.
  Es la estructura donde se fijan los componentes del complemento**
 En el hospedador evita el reconocimiento del lípido A por parte de los macrófagos.
 El LPS hace que sea menos soluble a detergentes y más resistente a disolventes
orgánicos.
-Pero su Función principal: son responsables de la especificidad antigénica
de las cepas individuales. Por ejemplo cada serotipo de Salmonella, tiene
Polímeros de oligosacáridos específicas que permiten la confirmación serológica y
provee parte de la “huella digital” epidemiológica del microorganismo cuando se
investigan brotes de enfermedades transmitidas por alimentos causados por esta
bacteria. El número de tipos antigénicos son más de 1000 para este género.

*Endotoxina, es una toxina que se libera después de la destrucción de la pared celular y

puede provocar daño en la célula huésped o puede activar el complemento del huésped y
esto tiene efectos beneficiosos, ya que puede ocasionar la lisis de la bacteria, mejora las
propiedades de las células fagocitica, etc.

**Complemento, sistema defensivo de los animales superiores que conduce a la inserción,

en la membrana externa, de una serie de proteínas llamadas complejo de ataque a la
membrana, que agujerea dicha membrana y ocasiona la lisis de la bacteria.

 Capa interna de la membrana externa (=outer membrane)

 Fosfolípidos (FL)
 La composición de los fosfolípidos es similar a la de la membrana citoplasmática, con
un ligero incremento en fosfatidil-etanolamina y fosfatidilglicerol.
 La lipoproteína mureína (LPP), o lipoproteína de Braun
 Son muy lipofílicas
 Es la más abundante en las Gram negativas (alrededor de 700.000 moléculas por
célula).
Su porción polipeptídica:
 Es una pequeña proteína (7.200 kDa) contiene 57 aminoácidos, que representan
repeticiones de una secuencia de 15 aminoácidos
El componente lipídico:
 Conformado por un tioéter diglicérido unido a una cisteína termina
Función:
-Estabilizar la membrana outer
-Une el LPS y el peptidoglucano: Mediante enlaces peptídicos de su porción polipeptìdica;
une covalentemente al grupo amino del ácido diaminopimélico del peptidoglucano
y se extienden a través del espacio periplásmico como una estructura alfa-helicoidal y la
porción lipídico:

 OMP: Proteínas principales de la membrana externa: forma parte de alrededor

del 60% de la masa de la membrana outer. Se sintetizan en los ribosomas unidos a
la superficie citoplasmática de la membrana celular

Tipos: Proteínas tipo porinas, Proteínas transmembrana, Proteínas periféricas,

Proteínas integrales de membrana, como OmpA, Proteínas involucradas en la
biogénesis de flagelos, Enzimas (p. ej., proteasa OmpT y fosfolipasas), proteínas
menos abundantes que participan en el transporte de moléculas específicas (como
vitamina B12 y complejos hierro-sideróforo).

Funciones:

 Al estar intercaladas en la membrana outer, participando en la estabilización de

la arquitectura tridimensional, interaccionando unas con otras y con los
lípidos. Además desempeña un papel menor en la conexión de la membrana outer
con el PG.

Tipos de proteínas:

 Proteínas tipo porinas:

 Tamaño de 35 kDa, atraviesan la outer membrane.
 Permiten la difusión pasiva de compuestos hidrofílícos de bajo peso molecular
(entre 500 y 700 Dalton), como azúcares, aminoácidos y ciertos iones.
 Pero actúa como barrera frente a antibióticos hidrófobos, colorantes, ácidos
biliares, a enzimas (p. ej., la lisozima, que podría alcanzar y atacar al PG).
 En las enterobacterias, colaboran en la protección contra las sales biliares que
existen en el ecosistema intestinal donde generalmente se encuentran.

 Proteínas integrales de membrana, (OmpA):

 Participa en el anclaje de la membrana outer a la capa de peptidoglucanos
 Es el receptor del pili sexual en la conjugación bacteriana.

 2. PEPTIDOGLICANO
 Constituye entre el 5-10% de la pared. La escasa cantidad de peptidoglucano
aumenta su susceptibilidad a la ruptura mecânica.
 Se encuentra en el periplasma (espacio periplásmico).
 La pared de la bacteria Gemmata obscuriglobus es diferente de las otras
Gram-negativas:
 Es única por poseer una pared compuesta principalmente de proteína, que funciona
como capa estruturalmente rígida.
 La otra característica es la presencia de las formaciones ovaladas llamadas estructuras
crateriformes. Se distribuyen uniformemente alrededor de la célula con una densidad
entre 50 y 100 por µm

El peptidoglucano de las bacterias Gram-negativas

 Conformado generalmente por pocas capas de peptidoglucano, por lo tanto, el

entrecruzamiento sucede con las capas de peptidoglucano inmediatas, más que con
las capas de peptidoglucano, que se encuentran más profundos o más externas a la
superficie celular.
 El resultado es una capa simple de PG (de 1 nm de espesor), a modo de malla
floja, laxa, es decir, tan sólo la mitad de las cadenas peptídicas unidas a los residuos
del ácido N-acetilmurámico, están en realidad involucradas en el entrecruzamiento.
  Además, el entrecruzamiento dentro del peptidoglucano sucede directamente desde el
tetrapeptido muramilo en una cadena de peptidoglucano hasta el
tetrapéptido muramilo de una cadena de peptidoglucaro adyacente (no
puentes interpeptídicos).y con grandes poros (los “huecos” dejados por las zonas
donde no hay enlace peptídicos).
 Ello explica el comportamiento de las bacterias Gram-negativas en la tinción de Gram:
al añadir el alcohol, se produce una deshidratación que tiende a contraer la estructura
del PG, pero los poros son grandes y por ellos sale el colorante (el violeta de
genciana).
 El enlace entre cadenas polisacarídicas se realiza normalmente mediante unión
peptídica directa entre el grupo carboxilo de la D-alanina terminal y el
grupo -amino del meso-DAP. En este enlace participan solamente el 50% de los
tetrapéptidos.
 En E. coli, el entrecruzamiento está directamente entre el meso-DAP de una “cadena”
de peptidoglucano y el residuo D-alanina terminal en la hebra adyacente (Figura 3).

Figura 3. Estructura de la unidad del peptidoglicano repetitiva de Escherichia coli (koneman,

2008)

En las espiroquetas, el diaminoácido en posición 3, en vez de ser meso-DAP, está sustituido

por la L-ornitina (que también es un diaminoácido).

 3. ESPACIO PERIPLASMICO O PERIPLASMA

 Ubicado: Entre la outer membrane y la membrana citoplásmica
 Definiciòn: es un compartimento acuoso gelatinoso bañando al peptidoglucano.
 Puede llegar a representar un 20-40%, del volumen celular total. El contenido del
periplasma (el “gel periplásmico”) incluye:
 RNasa, fosfatasa, proteasas, lipasas, nucleasas y enzimas metabolizadoras de hidratos
de carbono.
 Enzima Penicilinasa: degrada penicilina, evitando la destrucción del PG
 Enzimas destoxificantes (como la β-lactamasa y la fosforilasa de aminoglucósidos) que
inactivan ciertos antibióticos.
 Proteínas de transporte de nutrientes (p. ej., maltosa)
  Proteínas de unión para sustratos específicos (como arninoácidos, azúcares, vitaminas
y iones),
 Proteínas de unión a estímulos químicos. Algunas de estas proteínas de unión pueden
formar parte de un sistema quimiotáctico encargado de «percibir» el entorno
extracelular.
 En bacterias desnitrificantes y quimiolitoautotrofas, existen proteínas implicadas en el
transporte de electrones.
 Al se una solución densa, con alta concentración de macromoléculas, puede
participar también en la regulación de la osmolaridad celular frente a la del
medio exterior.

Consulta
1. ¿Qué son las nanovesículas y para que se usan?

Bibliografía
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