MICROBIOLOGÍA GENERAL

PRÁCTICA N°2: MICROSCOPIA

1.

INTRODUCCIÓN

El presente informe se refiere al tema de ¨microscopia¨ de la asignatura de

microbiología general, siendo muy indispensable en el laboratorio, daremos a
conocer la experiencia que se tuvo con el uso microscopio, en el que
utilizaremos diferentes muestras que serán observados en los objetivos del
microscopio (4X, 10X, 40X, 100X) y posteriormente los resultados del estudio
de cada una.

En él se conoció las partes y la manera de usar correctamente el microscopio

haciendo uso del mismo, utilizamos el microscopio que es una herramienta
óptica que nos permite observar elementos diminutos que a simple vista no se
y que mediante las diferentes medidas de enfoque a objeto muestra una
descripción detallada de los mismos,

El microscopio goza de ciertas características y propiedades las cuales son el

aumento de la imagen del objeto, mediciones, estimación del tamaño de los
microorganismos, el estudio de la morfología, fisiología y estructuras de
las células y tejidos.

Se hizo uso del microscopio de, microscopio eléctrico y el estereoscopio para

observar muestras y que a simple vista no podemos observar a los
microorganismos para ello es necesario que aprendamos a manejar con
cuidado estos instrumentos.

1.1 OBJETIVOS:

 El objetivo del segundo laboratorio es conocer las partes, principio y

funcionamiento de un microscopio.
 Hacer un repaso de la manera correcta en cómo utilizar el microscopio
oara lograr un buen enfoque.

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2. MARCO TEÓRICO

2.1 MICROSCOPÍA

El microscopio es un instrumento de precisión. Para usarlo apropiadamente

deben conocerse sus partes fundamentales. (Vera García, 1998).

Un microscopio consta de dos partes; la mecánica y la óptica. Consta de una

columna, apoyada sobre un pie rectangular, que a veces puede tener forma de
herradura. La columna sostiene un tubo cilíndrico y una plataforma o platina,
cuadrada o redonda, que tiene en su centro un orificio de aproximadamente un
centímetro de diámetro. (Vera García, 1998).

La parte óptica está constituida por las lentes, que son: el ocular, ubicado
donde el observador aproxima su ojo, y el objetivo, que es la lente que se
acerca al objeto que se quiere observar a continuación. (Vera García, 1998).

La función del objetivo es proporcionar una imagen agrandada del objeto en

observación; imagen que a su vez aumenta por el ocular. (Vera García, 1998).

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Hay microscopio que tienen 3 o´4 objetivos montados sobre un disco que gira,
llamado revolver. Los objetivos tienen impreso un número que representa las
veces que es capaz de aumentar. Por ejemplo, si el objetivo tiene el número
10, aumenta 10 veces el tamaño del objetivo que se observa y esto se
simboliza como 10X. Es común encontrar en un microscopio, objetivos 10X,
40X y 100X. (Vera García, 1998).

Para los oculares, los aumentos más usados son 5X y 10X. el numero impreso
en el ocular también representa las veces que es capaz de aumentar la imagen
del objeto que ha sido aumentada de antemano por el objetivo. Así, el aumento
el total producido por el microscopio, se obtiene al multiplicar el número de
aumentos dado por el objetivo por el número de aumentos proporcionado por el
ocular. (Vera García, 1998).

En el microscopio de campo claro, para poder observar las imágenes, se utiliza

la luz. El paso de la luz se regula mediante un sistema de iluminación que
generalmente está formado por una pequeña lámpara incorporada en la base,
un diafragma y un condensador. (Vera García, 1998).

Algunos microscopios utilizan, en lugar de la lámpara, un espejo que recoge la

luz natural, o la generada por una lámpara externa, y que la refleja hacia el
condensador, situado entre el espejo y la plataforma (después del diafragma).
(Vera García, 1998).

El diafragma, por medio de una pequeña palanca, regula la cantidad de luz que
llega al condensador, ya sea esta la reflejada por el espejo o la que proviene de
la lámpara incorporada en la base. El condensador, a su vez, concentra la luz
que recibe sobre el objeto que se desea observar. (Vera García, 1998).

El microscopio posee, además, dos tipos de mandos mecánicos (perillas): uno

llamado micrométrico, y el otro llamado micrómetro. Estos tienen como función
regular la distancia entre el objeto en estudios. Con el micrométrico se obtienen
grandes desplazamientos entre la muestra y el objetivo, en tanto que, con el
micrómetro, este ajuste es muy pequeño. La manipulación de estos dos
mandos permite enfocar la imagen de manera que se logre la mayor nitidez
posible. (Vera García, 1998).

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Generalmente, el microscopio de la luz es capaz de producir es capaz de

producir magnificaciones hasta unos 1000 diámetros, con un límite “útil” porque
con magnificaciones mayores las imágenes que se obtienen no se ven bien
definidas, sino borrosas. (Campos, Bazán, Sanmartí, 2002)

Así, la limitación básica del microscopio de campo claro no es de

magnificación, sino de poder de resolución, el cual se define como la capacidad
de una lente para poder distinguir dos puntos muy cercanos entre sí como
unidades independientes y separadas. (Campos, Bazán, Sanmartí, 2002)

Por lo tanto, un microscopio de luz que lograra aumentos mayores a los 2000
diámetros, sin la posibilidad de distinguir detalles, es decir, sin mayor poder de
resolución, no brindaría beneficio alguno. (Campos, Bazán, Sanmartí, 2002)

El poder de resolución de un microscopio depende de la longitud de onda de

luz utilizada, y de una propiedad óptica del lente objetivo, llamada abertura
numérica (AN). El poder de resolución (PR) se expresa con la siguiente
fórmula: (Campos, Bazán, Sanmartí, 2002)

λ
PR=
2 XAN

Donde λ es igual a la longitud de onda de la luz. (Campos, Bazán, Sanmartí,

2002)

El grado en que los objetos pueden ser modificados para aumentar su abertura
numérica es limitado. La longitud de onda de la luz visible también está limitada
a un ámbito entre 400nm de la luz azul y 700 nm de la roja, (nm=10 -9).
(Campos, Bazán, Sanmartí, 2002)

Según lo anterior, el poder de resolución del microscopio de luz está limitado

por la abertura numérica de los lentes objetivos y por la longitud de onda de la
luz visible. El límite de resolución, o sea, el objeto más pequeño que puede
verse nítidamente, se logra cuando la longitud de onda más pequeña de la luz
visible y un objetivo que tenga la máxima abertura numérica. En la práctica el

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límite de resolución es cercano a los 0,2um. (Campos, Bazán, Sanmartí,

2002)

3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 MATERIALES

3.2 MÉTODOS
3.2.1. MICROSCOPIA:

Observar cuidadosamente las partes del microscopio según el cuadro

siguiente:

PARTES DEL MICROSCOPIO

Ocular; puede ser Monocular;

Binocular o Trinocular

Objetivos de Amplificación
PARTE OPTICA
4X, 10X, 20X, 40X, 100X

Condensador de iluminación

Puede tener contraste de fases

Tornillo de ajuste grueso

(micrométrico)

Tornillo de ajuste fino (micrométrico)

PARTE MECÁNICA
Platina

Puede ser tornillo de ajuste de platina

Porta objetivos giratorio (revolver)

Soporte de base
ESTRUCTURAS DE SOPORTE
Soporte de brazo

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 Limpiar todos los lentes con el papel lente.

 Colocar el objetivo seco débil en posición debajo del tubo del cuerpo del
microscopio, sentirá un chasquido cuando haya quedado bien colocado.
Conectar la fuente de luz y encenderla sobre la platina y asegurarla con
las pinzas o sujetadores correspondientes a cualquier otro medio
adecuado.
 Acomodar la porción de la preparación que va a examinar en la apertura
central de la platina.
 Bajar el objetivo seco fuerte con la ayuda del tornillo de ajuste grueso a
aproximadamente medio centímetro por encima del cubreobjetos de la
preparación.
 Elevar el condensador al máximo con la ayuda del tornillo de ajuste del
condensador.
 Observar por el ocular y luego mover la palanca del diafragma del iris de
tal modo que este se abra a su límite máximo. Tal límite se determina
mirando por el ocular y observando los cambios en la intensidad de luz
al mismo tiempo que se manipula la palanca del iris.

NOTA:

1. Si no se dispone de un condensador, emplear la superficie curva

(cóncava) del espejo; si se cuenta con un condensador, utilizar la
superficie plana.
2. Mover el espejo hasta obtener un campo microscópico
uniformemente iluminado (homogéneo)
3. A continuación enfocar hacia arriba con el tornillo de ajuste fino hasta
que el espécimen se observe con toda claridad.
 Para cambiar de objetivos (pasar de seco débil a seco fuerte) no elevar
del tubo del microscopio, sino simplemente hacer girar el objetivo
deseado para colocarlo en su lugar.
 Siempre que se utiliza el objetivo de inmersión, este se limpiara con el
papel lente produciendo perdidas de definición en posteriores
observaciones.

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 El uso del xilol para limpiar la lente está reservada a aquellos casos en
que sea imprescindible, pues, a la larga se puede desprender la lente
frontal del objetivo.

3.2.3 PORTAOBJETOS Y CUBREOBJETOS

 La limpieza se realiza con un detergente referentemente no iónico. Si

todavía quedaran engrasados se sumergen en mezcla crómica durante
unas horas, tras las cuales se enjuagan primero con agua corriente y
después con agua destilada.
 Los portaobjetos limpios y secos se guardan en un frasco de cierre
hermético y que contenga una solución 1:1 alcohol etílico absoluto y de
éter etílico. Cuando se tenga que hacer una preparación se sacan los
portaobjetos del frasco.
 Los cubreobjetos no se suelen reciclar y siempre se suelen partir del
material nuevo.

3.2.3. PREPARACÍON EN FRESCO

 Con el asa de Kolle tomar cuidadosamente una gota de la muestra.

 Colocar sobre una lámina portaobjeto limpia.
 Cubrir la preparación con el cubreobjeto (ligera presión para
uniformizar).
 Si la muestra es sólida, colocar una gota de solución salina y en ella
se emulsiona el producto. También se tapa con el cubreobjeto.
 Observar en el microscopio con el objetivo menor y luego con el de
mayor aumento.
 Observar las distintas formas microbianas que se presentan en cada una
de las muestras y en el mayor número de campos posibles.

4. RESULTADOS Y DISCUSIONES

4.1 OBSERVACIÓN CON LOS MICROSCOPIOS DE LABORATORIO:

a) Estereoscopio:

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Es un instrumento que nos permite visualizar un objeto de manera más

grande, tiene un se usa para separar una muestra más grande a más
pequeñas, o poder diferenciar granulos de muestras.

Fuente: propia (laboratorio de microbiología)

b) Microscopio óptico:

Para poder usar este microscopio tuvimos que recurrir a una fuente de luz
alterna y adecuarlo para poder observar la imagen ya que por ser uno de los
más antiguos no cuenta con luz propia y es necesario la luz solar o algún tipo
de luz para una mejor observación.

Fuente: propia (laboratorio de microbiología)

c) Microscopios de Florescencia

Uno de los microscopios con los que cuenta ingeniera en industrias

alimentarias es el siguiente de la marca jenamed que nos permitió observar
la imagen que se encuentra a su lado.

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Fuente: propia (laboratorio de microbiología)

d) Microscopio electrónico

Se logró observar la imagen de la derecha con un zoom de 100x

multiplicando por lente ocular si se logra observar mejor la imagen siendo
este uno de los mejores microscopios con los que cuenta la facultad de
ingeniera en industrias alimentarias.

Fuente: propia (laboratorio de

microbiología)
4.1.2 Partes de microscopio y la diferenciación de cada una de estas,
diferenciándolos entre el microscopio óptico, electico invertido y
estereoscopio.

A) Partes de microscopio

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La parte óptica se compone de:

A) Sistema de iluminación: W
cuya intensidad se puede
regular mediante un botón.
B) Condensador: Formado por
una o varias lentes que permiten
con preparación los rayos
emitidos por la fuente luminosa.
Asociado suele haber un
diafragma que permite regular
también la intensidad luminosa.
C) Objetivos: Lentes de distintos
aumentos colocadas en el
revólver.
D) Oculares: lente intercambiable
en el soporte o pie: para
mantener el aparato en su
posición. Puede tener distintas
formas.
Parte mecánica se compone de:

A) Brazo: Pieza fija al soporte a la

que están unidos los otros
elementos. Sirve también para
sujetar el microscopio cuando lo
transportamos.
B) Platina: Soportar la preparación
que queremos observar. Posee
un orificio en su centro que
permite el arriba y abajo
mediante los tornillos de
enfoque.
C) Tubo: Pieza por la que se mira y
a la que están unidas las lentes.
D) Revólver: pieza giratoria a la
que están unidos los objetivos.
Al girar, se col uno de los
objetivos en la prolongación del
tubo extremo superior del tubo.

B) Diferenciando cada microscopio:

MICROSCOPIO MICROSCOPIO
MICROSCOPIO ÓPTICO ESTEROSCOPIO:
ELECTRÓNICO INVERTIDO:

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 Ocular: Lente  La limitada apertura no
 Tiene la técnica de  El microscopio
situada cerca del ojo del permite que la información
grabación de la invertido es un
observador. detallada alcance la imagen,
información microscopio cuya
 Objetivo: Lente limitando de este modo
visual tridimensional.  estructura está
situada en el revólver. la resolución.
 Hace una creación de la invertida en
 Condensador: Lente  El contraste de amplitu
ilusión de profundidad en comparación
que concentra los rayos d (que radica en la
una imagen de una al microscopio co
luminosos sobre la naturaleza corpuscular de los
muestra. nvencional.
preparación. electrones) se debe al
 El estereoscopio, es  La fuente de luz
 Diafragma: regula la contraste de difracción,
decir, el aparato que está ubicada por
cantidad de luz que llega provocado por la pérdida de
presenta una doble encima de
al condensador. electrones del rayo. Es un
imagen que se mezcla la platina y el
 Foco: dirige los contraste dominante en
en nuestro cerebro como principio de
rayos luminosos hacia el especímenes gruesos.
una sola imagen funcionamiento y
condensador.  El contraste
estereoscópica, fue formación de la
de fase (que radica en la
 Tubo: es la cámara inventado por imagen es el
naturaleza ondulatoria de los
oscura que porta el ocular Sir Charles mismo que el del
electrones) se debe al
y los objetivos. Puede Wheatstone en 1840. microscopio
contraste de interferencia
estar unida al brazo  Es un dispositivo muy tradicional.
provocado por los
mediante una cremallera simple que consta de  Utilizado
desplazamientos en las
para permitir el enfoque. cuatro pequeños principalmente
fases relativas de las
 Revólver: Es el espejos, ubicados en para cultivos
porciones del rayo. Es un
sistema que porta los forma tal que permiten celulares (células
contraste dominante en
objetivos de diferentes desviar las imágenes vivas) sin una
especímenes finos.
aumentos, y que rota para correspondientes a cada preparación
 Existen también
poder utilizar uno u otro, ojo puestas una al lado previa.
distintas aberraciones
alineándolos con el de la otra de tal manera  Para monitorear
producidas por los lentes:
ocular. que al verse montadas actividades
astigmática, esférica y
 Tornillos macro y una sobre la otra dan el (crecimiento,
cromática.
micrométrico: Son tornillos  Para muestras grandes efecto estereoscópico o comportamiento).
de enfoque, mueven la como órganos, tejidos o tridimensional.  Fue inventado en
platina o el tubo hacia células, se utilizan tres  Para ajustarse al tamaño 1850 por J.
arriba y hacia abajo. El técnicas: de distintas imágenes el Lawrence Smith,
macrométrico permite 1. La fijación química o la dispositivo tiene un eje o un miembro de la
desplazamientos amplios crio fijación. pivote que altera el facultad de
para un enfoque inicial y 2. La inclusión en resinas grado de separación. la Universidad de
el micrométrico (crio sustitución);  Este aparato sustituye el Tulane
desplazamiento muy 3. La réplica Metálica. cruzar los ojos para ver

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corto, para el enfoque  Para muestras

fotos o videos
más preciso. Pueden pequeñas como complejos
estereoscópicos, que
llevar incorporado un macromoleculares se utilizan
para muchos es algo
mando de bloqueo que fija las siguientes técnicas:
difícil y/o incómodo.
la platina o el tubo a una 1. La tinción negativa:
 La fotografía tradicional
determinada altura. Los agentes de tinción
estereoscópica consiste
 Platina: Dos pinzas más usados son
en crear una ilusión de
sirven para retener el el molibdato amónico,
3-D que comienza de un
portaobjetos sobre la el fosfotungstato
par de imágenes de 2-D.
platina y un sistema de sódico y sales de uranio
 El modo más fácil de
cremallera que permite como acetato y formiato.
crear la percepción de
mover la preparación. Todos ellos presentan
profundidad en el
Puede estar fija o unida al las siguientes
cerebro es de
brazo por una cremallera propiedades: interactúan
proporcionar a los ojos
para permitir el enfoque. mínimamente con la
del espectador dos
 Brazo: La unión con muestra y son estables
imágenes diferentes,
la base puede ser en la interacción con los
representando dos
articulada o fija. electrones, son
perspectivas del mismo
altamente solubles en
objeto, con una
agua, presentan una alta
desviación menor a las
densidad que favorece
perspectivas que ambos
el contraste, tienen un
ojos naturalmente
punto alto de fusión,
reciben en la visión
tienen un tamaño de
binocular.
grano pequeño;
2. La réplica metálica:
para construir la réplica La fotografía moderna
metálica se evapora el industrial tridimensional
metal (estaño), que se puede usar el láser u otras
deposita sobre la técnicas avanzadas para
muestra a la vez que descubrir y registrar
información tridimensional.
esta, por el vacío, se
disuelve.

4.2 DISCUSIÓN

Según VERA, C. Dice que para poder utilizar mejor el microscopio es

necesario conocer sus partes fundamentales ya que se trata de un
instrumento de precisión. Esto se puedo comprobar en el laboratorio
ya que tenías que saber las partes del microscopio para poder hacer
una correcta manipulación y de esa forma realizar una correcta
visualización de la muestra.

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Según Campos, P. Indica que los estereoscopios permiten hacer

estudios de objetos y especímenes demasiado pequeños para ser
estudiados a simple vista, pero demasiado grandes para ser
estudiados bajo el microscopio compuesto. Esto se logró comprobar
mediante el uso del estereoscopio visualizando una muestra de en los
diferentes tamaños.

Según VERA, C. Nos indica que algunos microscopios, en lugar de

lámpara, usan un espejo que recoge la luz natural o la generada por
una lámpara externa. En nuestro caso nos tocó empezar con el
microscopio que funciona a luz natural o necesita una luz externa
para poder visualizar una muestra por ende se nos dificulto un poco la
visualización de la primera muestra, tuvimos que generar la luz
necesaria para poder utilizar el microscopio y lograr ver la muestra
con los deferentes lentes de objetivos.

5. CONCLUSIONES

 Podemos afirmar que cumplimos con el objetivo de la práctica, puesto

que fue de gran utilidad, ya que aprendimos a manejar y conocer el
microscopio el cual nos es muy útil para el laboratorio. Así mismo se
comprendió que sin el microscopio sería imposible visualizar los
microorganismos a simple vista
 El microscopio ha sido uno de los avances científicos más importante del
hombre ya que ha sido un gran avance para la ciencia.

6. BIBLIOGRAFÍA

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 Vera García (1998). “Introducción a la Microbiología 2 da Edición”.

Editorial: UNIVERSIDAD ESTATAL A DISTANCIA. Pág. 24-27.
DISPONIBLE EN:
https://books.google.com.pe/books?
id=K_ETVnqnMZIC&pg=PA24&dq=el+microscopio+y+sus+partes&hl=es
&sa=X&ved=0ahUKEwiqrITHpO3aAhWlzVkKHQ1uDiEQ6AEIJzAA#v=on
epage&q=el%20microscopio%20y%20sus%20partes&f=false
 Campos, P., Bazán, B., Sanmartí, N., y otros. (2002) “Biología, volumen
1”. Editorial: LIMUSA. Pág. 17
DISPONIBLE EN:
https://books.google.com.pe/books?
id=gVvx46dJ9XQC&pg=PA17&dq=el+microscopio+y+sus+partes&hl=es
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7. CUESTIONARIO

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8. ANEXOS

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