Aspectos funcionales y aplicaciones
de los interferones
M. Fresno
Centro de Biología Molecular.
Univcsidad Autónoma de Madrid y CSIC. Madrid.
Introducción
y beta) de la acción de las células del sistema
El interferón (IFN) se descubrió durante un inmune, ha conducido a la consideración de los
estudio de la interferencia vírica en el cual la in- IFN como citoquinas de amplias y complejas ac-
fección previa con un virus atenuado protegía ciones inmunorreguladoras implicadas en el
el animal frente a la acción subsecuente de un control homeostático de las funciones celulares
virus más virulento. Se encontró que el virus que (tabla II).
interfería producía una substancia que confe- El descubrimiento de algunas propiedades de
ría protección contra la infección subsiguiente los IFN como la antiproliferativa y la antivírica
por otro virus. La asociación de esta substan- produjo un enorme interés por su posible apli-
cia con el fenómeno de interferencia dio lugar cación clínica. El IFN, especialmente desde que
al nombre de «interferón»1. se ha podido obtener en grandes cantidades
El IFN ha sido considerado durante años con la tecnología de ADN recombinante, ha sido
como un agente antivírico directo. Sin embar- sujeto de numerosos ensayos clínicos y ha pro-
go, el posterior descubrimiento de varios tipos bado su eficacia en algunos tumores así como
de IFN, entre ellos de un cierto tipo de IFN, de- en ciertas infecciones víricas2. Sin embargo, los
nominado inicialmente inmune (gamma-IFN) resultados obtenidos no han sido todo lo bue-
sintetizado por linfocitos estimulados por mitó- nos que hubiera sido de desear. Ello puede ser
genos o antígenos (tabla I) y la modulación por debido a su enorme pleiotropismo y a ia exis-
éste y en menor medida por los otros IFN (alfa tencia de acciones contradictorias in vivo de-
TABLA I
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LOS IFN HUMANOS
Propiedades Aifa Beta Gamma
Nomenclatura antigua Le IFN F-IFN IFN inmune
tipo tipo I tipo II
Subtipos >12 1 ¡2?) 1
Mr ¡masa molecular relativa) 15-25 kD 20 kD 20-25 kD
Glicosilación No" Sí Sí
Estabiliaad a pH2 Sí Sí No
Inductor Virus Virus Mitógenos
Células productoras Leucocitos, otras Fibroblastos Linfáticos T
Intrones del gen No No Sí
Homología 80-90 % 30-5C % <10%
* La mayoría de los subtipos.
3IOTEC!\0LCGIA Dt APLICACIÓN íARMACELPCA
TABLA II
ALGUNAS PROPIEDADES BIOLÓGICAS DE LOS IFN
/. inhibición de la rephcación vírica
li. Inhibición de ia proliferación celular
Ir; vi tro
Céluias transformadas
Ciertas células normales
In vivo
Regeneración ciertos órganos
Hematopoyesis en la meduia ósea
Desarrollo de tumores
///. Cambios en la membrana plasmática
Incremento en antígenos
MHC
/Jrmicroglobullna
FcR
Disminución de la movilidad celular
IV. Efecto en e¡ sistema inmune
Linfocito B: aumento o disminución de la producción de Ac
Linfocito T: inhibe la proliferación
Linfocito Tc>: aumento o disminución de DTH
Llnfocito T(:: aumento de la citotoxicidad
Linfocito NK: aumento de la actividad ÍMK
Macró'ago: inducción, c fererciación y activación
Inducción de la secreción de IL-1, TNF, IL-2
pendiendo del tiempo de administración, dosis, puede ser sinérgica o antagónica y representa
etc., loque hace difícil predecir in vivo qué tipo una compleja malla de interacciones regulado-
de acción será la preponderante. ras (taola III).
Se hace pues necesario conocer ¡as bases ce- El IFN aumenta la actividad citotóxica de los
lulares especialmente las inmunológicas y mo- iinfocitos T (Te). Este aumento parece deberse
leculares de la acción de los IFN de cara a una a varias causas. Los Te reconocen el antígeno
utilización terapéutica más racional y eficiente asociado al complejo principal de histocompa-
de los mismos. bilidad (VIHC) y los IFN inducen la expresión de
estas moléculas3. El incremento de MHC
aumenta la asociación con éste de las proteí-
Efectos del IFN en el sistema inmune nas víricas, favoreciendo el reconocimiento de
En cierto modo, el sistema del IFN es dife- las células T citotóxicas. Como resultado, el re-
rente del sistema inmune y, sin embargo, es una conocimiento y subsecuentemente la actividad
parte integral del mismo. Cualquier tipo celular citotóxica contra células infectadas resulta
es capaz de producir IFN alfa/beta y, por io tan- incrementada4. Así, el IFN no sólo restringiría
to, influir al sistema inmune. Además, éste pue- la infección produciendo un estado antivírico en
de producir su propio IFN, que tiene efectos la célula sino incrementando la susceptibilidad
muy importantes no sólo en el sistema inmune de las células infectadas a la lisis. Además, el
sino también fuera de él. IFN favorece la diferenciación de los Te5.
La respuesta a la infección o a la aparición Todos los IFN ejercen una acción reguladora
de tumores resulta de la integración de la in- sobre la producción de anticuerpos. Esta regu-
munidad celular y humoral reguladas por diver- lación puede ser positiva o negativa dependien-
sas citoquinas, algunas de las cuales influyen do de la dosis y el tiempo de administración de
la producción y acción de los IFN y, a su vez, FN6. Recientemente se ha encontrado que el
el IFN ejerce numerosos efectos en la actividad gamma-IFN es un factor de diferenciación de
y síntesis de otras citoquinas. Esta interacción Iinfocitos B7 y es capaz de modular selectiva-
70
ASPECTOS FUNCIONALES Y APLICACIONES DE LOS INTERFERONES
TABLA III
INTERACCIÓN DEL IFN CON OTRAS LINFOQUINAS
Linfocitos Actividad
IL-2 Sinergismo/activación de linfocitos B
Sinergismo/activación NK
Sinergismo/activación de la DTH
TNF Sinergismo/actividad antivírica
Sinergismo / actividad antiproliferativa
Sinergismo / diferenciación monocitos
Sinergismo / inducción del MHC
IL-4 Inhibición activación de linfocitos B
mente la producción de isotipos de IgG, aumen- El IFN estimula la actividad NK de varios mo-
tando algunos isotipos o inhibiendo otros, de- dos. Así, el IFN es capaz de estimular la dife-
pendiendo de la relación con otras linfoquinas renciación de las células precursoras de NK
como IL-48 (tabla III). inactivas a NK activas.
Los IFN también afectan de modo variable la Así mismo, el IFN estimula la actividad de es-
respuesta de hipersensibilidad retardada (DTH), tas últimas de diversas maneras complemen-
dependiendo de la dosis y el tiempo de admi- tarias: induciendo una mayor velocidad de lisis,
nistración aunque se cree que el gamma-IFN una mayor velocidad de reciclaje y una mayor
desempeña un importante papel en la fase efec- capacidad de formar conjugados efectivos
tora de esta respuesta6. (fig. I) 6 .
Los IFN inducen una serie de genes9. Uno
de los más conocidos es el que codifica para
Efecto antitumoral del IFN la enzima denominada 2'-5' oligoadenilato-
El IFN puede tener acción antitumoral debi- sintetasa, capaz de sintetizar en presencia de
do a varios motivos. Así, puede presentar un ATP oligómeros de adenina con el inusual en-
efecto directo antiproliferativo, estimular la ac- lace 2'-5' en lugar del 3'-5' presente en los áci-
tividad NK o la capacidad citotóxica antitumo- dos nucleicos10. Esta enzima en presencia de
ra! de los macrófagos. De estas tres acciones, ARN de doble cadena, que es un intermediario
hemos encontrado que la estimulación de la ac- muy común en la replicación del genoma víri-
tividad NK es la más sensible a la acción del co, activa a una endonucleasa que degrada los
IFN. ARNm víricos. Este mecanismo tiene por misión
IFN
JO Activa
* t Velocidad lisis
diferencia Formación conjugados
Pre-ND f Reciclaje células efectoras
Fig. 1. Regulación de la actividad de las células NK por IFN.
71
BIOTECNOLOGÍA DF APLICACIÓN -A^MACTUIICA
Células normales
HSV-1-
Reduce la producción de virus Infectivo / Reduce Susceptbilidad
Céulas infectadas
Inferieron Susceptibilidad (íTR)
Actividad
Diferenciación
Células pre-NK
hlg J. LSQUC:11¿1 globflt di: I-J ¿líXJOn UOi HuifN ¿illa LOI'iitd HSI/ i
inhibir la traducción de los ARNm/víricos e im- crófagcs y mimetizan la acción del IFN13. El
pedir la producción de virus infectivos. TNF sinerglza con el IFN tanto en la capacidad
Hemos estudiado la función de la 2'-5' mlcrobicida y tumoricida como en la capacidad
oligoadenilato-sintetasa en la potenciación de la de inducción de la 2'-5' oligoadenilato-sintetasa
actividad NK antitumoral utilizando oligómeros y el incremento del metabolismo de hidrógeno.
sintéticos añadidos a las células NK. Nuestros El IFN también tiene un efecto antiprolifera-
resultados parecen indicar que estos oligcme- tivo directo. Este efecto también es mediado por
ros no desempeñan ningún papel en la poten- la 2'-5' oligoadenilato-sintetasa y parece afec-
ciación de la actividad de las células NK por IFN, tar principalmente la traducción de ARNms de
sino más bien todo lo contrario. De hecho, las ciertos oncogenes necesarios para la prolifera-
células NK son las que tienen un nivel más oajo ción celular, como c-fos y c-myc.
de 2'-5' olígoadenilato-sintetasa de todos los
linfocitos11.
Efecto a n ti vírico del IFN
El IFN-gamma, pero no el afa ni el beta, es
también capaz de inducir la actividad tumoric:- Estudios in vivo realizados por varios grupos
da y microbicida de los macófagos. Nosotros han demostrado que el IFN parece tener una
hemos encontrado que el IFN no es el único ac- aplicación terapéutica en ciertas infecciones ví-
tivador (MAR. El IFN activa los macrófagos y ricas aunque no en todas2. En principio el IFN
estimula la actividad tumoricida en sinerglsmo puede tener un efecto antivírico directo, afec-
con otros activadores sintetizados por infocltos tar a las células Te o a las NK. Las células Te
Ty con endotoxinas bacterianas. Estas endoto- parecen desempeñar un importante papel en
xinas inducen la síntesis de un factor de alto ia lisis de células infectadas por virus. Sin em-
peso molecular que activa la capacidad tumo- bargo, el IFN in vivo no parece resultar eficaz
ricida en sinergismo con IFN12. Nuestros resul- frente a todos los virus.
tados más recientes sugieren que este factor Hemos estudiado el papel del IFN en infec-
puede ser el necrosante de tumores (TNF), im- ciones víricas. No todos los virus al infectar cé-
plicado también de muchas formas en la acti- lulas dei hospedador las convierten en suscep-
vidad antitumoral. tibles de lisis por linfocitos cltotóxicos NK. Sin
A diferencia de la activación de la citotoxici- embargo, hemos detectado una excelente co-
dad natural este efecto del IFN está mediado rrelación entre los virus en los que el IFN pare-
por la 2J-5' oligoadenilato-sintetasa ya que los ce actuar in vivo y aquellos que convierten a las
oligómeros sintéticos son capaces de activar la células que infectan en susceptibles de lisis por
capacidad microbicida y tumoricida de los ma- NK. Además, diversos grupos han demostrado
72
ASPECTOS FUNCIONALES Y APLICACIONES DE LOS INTERFERONES
claramente la implicación de las células NK en esta hipótesis y definir distintas regiones de la
la resistencia a ciertos virus como herpes- molécula de IFN que poseen distintas funcio-
virus14. Ello, unido a que la estimulación de las nes inmunorreguladoras. Ello ha permitido se-
células NK por IFN es la acción que menor can- parar las acciones antiproliferativas, antivíricas
tidad de IFN requiere, nos llevó a estudiar en y potenciadoras de macrófagos de las acciones
profundidad el mecanismo de acción del IFN potenciadoras de la actividad NK, confirman-
en las infecciones víricas. Así, hemos podido de- do la separación de funciones y los distintos me-
mostrar que el IFN actúa de modo sinérgico en canismos de acción del IFN18.
el combate de ciertas Infecciones víricas6'15 En conclusión, creemos que es muy impor-
(fig. 2). tante de cara a una aplicación clínica más efi-
El IFN ejerce una acción como antivírico de caz de las citoquinas, en general, y los IFN, en
varios modos: a) inhibe la replicación vírica; b) particular, conocer las bases moleculares e in-
induce la producción de IFN por linfocitos NK; munológicas de la acción de las mismas. Hoy
c) este IFN activa las células NK de varios mo- día la biotecnología en el campo de las citoqui-
dos, tal y como se ha mencionado anteriormen- nas avanza hacia un mayor y mejor conocimien-
te (fig. 1); d) las células infectadas que han sido to de las acciones a nivel molecular y celular de
protegidas por IFN son, así mismo, mucho más las mismas para encontrar algún producto na-
sensibles a la lisis por los linfocitos NK; e) ade- tural que mimetice, antagonice o sinergice sólo
más la interacción de las células NK con estas las acciones deseadas de las mismas.
células infectadas pretratadas con IFN induce
un gran incremento en la síntesis de IFN por
las NK, con lo que se produce un circuito am-
plificador; f) por último, el IFN disminuye la sus-
ceptibilidad a la lisis NK de las células norma- BIBLIOGRAFÍA
les del huésped no infectadas. En resumen,
todas estas acciones del IFN convergen en pro- 1. Issacs A, Lindemans J. Virus interference. I, The
teger al individuo de la acción de ciertos virus, interferon. Proc Roy Soc 1957; 147: 258-273.
de los cuales herpesvirus puede ser el ejemplo 2. Stringfellow DA. ed. Clinical applications of interfe-
más representativo. rons and their inducers. Marcell Dekker, Inc 1986.
3. Wong GHW, Lewis I, Harris AW, Scharader JW.
El hecho de que las células NK sean capa- Effect of cloned ¡nterferon on expression of H-2
ces de lisar células infectadas por varios virus and la antigens on cell lines of hematopoietic,
plantea la cuestión del tipo o mecanismo de re- lymphoid, epithelial, fibroblastic and neuronal or¡-
conocimiento de las células infectadas por las gin. Eur J Immunol 1984; 14: 52-56.
NK y su relación con las NK antitumorales, es- 4. Blackman MJ, Morris AG. The effect of interfe-
pecialmente a la luz de la no distribución clo- ron treatment of targets on the susceptibility to
nal de los receptores de éstas. Hemos encon- cytotoxic T lymphocyte killing: augmentation of
allogeneic killing and virus-specific killing relati-
trado que aunque se necesita replicación vírica ve to viral antigen expression. Inmunology 1985;
para que una célula infectada sea susceptible, 56: 451-457.
la infección por varios virus diferentes parece 5. Chen L, Tourvielle B, Burns GF, Mathieu-Mahual
inducir la aparición en la membrana de recep- D, Sasportes M, Bensussan A. Interferon: a cyto-
tores para la transferrina16, que son una de las toxic T lymphocyte differentiation signal. Eur J Im-
estructuras dianas reconocidas por células munol 1986; 16: 767-770.
NK17. 6. Muñoz A, Fresno M. Interferones y sistema inmu-
ne. Inmunología 1986; 5: 29-35.
7. Nakagawa T, Hirano T, Nakagawa N, Yoshizakí
Conclusiones K, Kishimoto T. Effect of recombinant IL-2 and IFN
on proliferation and differentiation of human B
Los datos presentados anteriormente sugie- cells. J Immunol 1985; 134: 959-966.
ren que el IFN, aunque es altamente pleiotró- 8. Rabin EM, Mond JJ, Ohara J, Paul WE. Interfe-
pico, es capaz de realizar acciones mediadas ron inhibits the action of B cell stimulatory factor
por diversos segundos mensajeros de un modo (BSF)-l on resting B cells. J Immunol 1986; 137:
diferencial, según el tipo celular implicado. Ya 1.573-1.576.
que no parece existir más que un tipo de re- 9. Friedman Ri_, [Link]. Interferon induced trans-
ceptor, estos resultados sugieren que pueden cription of HLA and methallothionein genes con-
existir diferentes modos de transducir señales taining homologous upstream sequences. Natu-
por el IFN. Mediante el uso de anticuerpos re 1985; 314: 637-639.
monoclonales hemos podido comprobar 10. DeMaeyer E, Schellekens H, eds. The biology of
the interferon system. Holanda, Elsevier, 1983.
73
BIOTCNaLOGIA JE APLICACIÓN FARMACEU1ICA
11. Alarcón B, Redondo JM, Bugany H, Carrasco L, 15. Muñoz A, Carrasco L, Fresno M. Enhancement
Fresno M, Inhioition of natural killer cytotoxicity of the susceptibility of HSV-1 infecteo cells to na-
by ext'ace lular ppp (A21 p5') nA oligonLcleotides. tural killer lysis by interferon. J Immunol 1983;
Int J Immunopharmaco! 1988; 10: 73-80. 131: 783-787.
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macrophage celí line J774 against infection by 1-infected cells by natural killer cells. J Gen Vire I
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activities by the interferon induced (2'-5') oligo- transfeTin receptor oeing eme of the target struc-
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113-120. 134: 1.286-1.291.
14. Rager-Zisman B. Quan PC, Rosner M, Moller JR, 18. Cebrian M, Yague E, O de Landázuri, M et al. Dif-
Bloom BR. Role of NK cells in protection of mice ferent funcional sites on rlFN-2 and their relatlon
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nol 1987; 137: 884-888. 1985; 138: 484-490.
DISCUSIÓN
L. ENJUANES: Según mi información, uno de os en e! sitio D. Es decir, los anticuerpos mono-
principales inconvenientes de la utilización del clonales que bloquean el sitio D bloquean esas
interferon, aparentemente está relacionada acciones del interferon. Por ello opinamos que
con su propiedad de inhibir el crecimiento. De sería muy interesante disponer de un tipo de
hecho se utiliza a veces para inhibir tumores molécula de interferon, híbrida o mutada, que
o determinados virus. La pregunta sería, ¿no careciera de ese sitio y por tanto sirviera sólo
tendría interés tratar de mapear este efecto para potenciar ia actividad NK. Es la única fun-
de inhibición del crecimiento, siguiendo la es- ción que hemos conseguido mapear indepen-
trategia que usted ha expuesto, con el fin de dientemente de las anteriores, aunque hay zo-
tratar de eliminarlo ya que incluso puede in- nas comunes a ambas.
terferir con la expansión clonal en la respues- M.T. GALLART: Me ha parecido entender que és-
ta inmune? tos son experimentos del bloque A, entonces
M. FRESNO: La inhibición del crecimiento se ha mi pregunta es ¿no podría matizarse la fun-
mapeado ya en el mismo sitio D. Todas las ac- ción de cada parte mediante bloqueo exter-
ciones del interferon descritas por nosotros y no del anticuerpo correspondiente?
otros grupos, exceptuando la NK, mapean en M. FRESNO: El trabajo se refiere a bloqueo de
esa región. Sin embargo, sólo se dispone de anticuerpos, pero de anticuerpos contra el si-
anticuerpos monoclonales capaces de inhibir tio C. En este caso el interferon transmite la
selectivamente todas las acciones, exceptuan- señal a la célula uniéndose al receptor, que
do la NK, es decir, que el sitio NK parece ser obviamente al existir un solo tipo, es idéntico
diferente. Las células NK prácticamente no en las distintas células y posteriormente se
contienen 2-5-A sintetasa y la inducción de produce un proceso de internalización. Enton-
esta enzima por interferon es muy escasa en ces, al igual que ocurre con los anticuerpos
este tipo de células, mientras que en las res- neutralizantes de acción vírica, los más efec-
tantes células la 2-5-A sintetasa se induce en tivos son los que no tienen nada que ver con
gran cantidad. Ello indica que las células NK e. sitio de unión, es decir, que de alguna ma-
son particulares en la inducción de la 2-5-A nera Impiden alguna función posterior del vi-
sintetasa por interferon. Hemos mapeado en rus. Estos anticuerpos contra los sitios C, B
esa zona y pensamos que los efectos negativos y D, inhiben funciones posteriores a la entra-
antiproliferativos, sobre el sistema Inmune, so- da del interferon. Nosotros sugerimos que en
bre la hematopoyesis, mapean indirectamente células NK el proceso de ¡nternalización es dis-
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ASPECTOS FJNCI0NA1ES Y APLICACIONES DE LOS INTERFERONFS
tinto, o al menos existe una región de la mo- tificado ningún segundo mensajero que sea
lécula que es importante para dar una segun- atribuible al sitio C. Tenemos segundos men-
da señal que es inhibida por un monoclonal. sajeros y genes inducidos por el sitio D, que
Lógicamente, se puede intentar obtener pép- es el que teóricamente no nos interesa, pero
tidos sintéticos que contengan esta señal, y no por el sitio C. Cuando los tengamos, po-
enlazarlo a otro que contenga la señal de dremos realizar un sondeo para buscar com-
unión al receptor para mimetizar la acción del puestos que a su vez sean capaces de intro-
interferón. Desgraciadamente no hemos iden- ducir otra enzima que sea la clave en NK.
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