UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN
FACULTAD DE INGENIERIA PROCESOS
ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA
INFORME 9: COLORACIÓN SIMPLE Y DIFERENCIAL (TINCION DE
GRAM)
DOCENTE: ING. MARCIA JUANA QUEQUEZANA BEDREGAL
INTEGRANTES:
DE LA CRUZ AROQUIPA RUTH
MAMANI ONSIHUAY ARLEN
TURNO: C3 - MIERCOLES
AREQUIPA – PERÚ
2020
PRACTICA N° 9
COLORACIÓN SIMPLE Y DIFERENCIAL (TINCION DE GRAM)
I. OBJETIVOS
- Observar células muertas en frotis seco y teñidas con diferentes procedimientos.
II. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es un colorante y cuáles son sus propiedades?
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras,
etcétera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes naturales, los cuales
son extraídos de plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos de
minerales procesados y manipulados en el laboratorio.
Químicamente, el colorante está constituido de un componente cromóforo y un
auxócromo. El cromóforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene una
absorción característica en la región ultravioleta o visible; dicho de otra forma, es la
capacidad que tiene la molécula para que sus electrones absorban energía o luz visible,
se exciten y emitan diversos colores de acuerdo con la longitud de emitida como resultado
del cambio en el nivel energético.
Los cromóforos son principalmente grupos funcionales con dobles y triples enlaces
carbono-carbono, anillos aromáticos, grupos carbonilos, imino, diazo.
Los auxócromos son grupos funcionales o radicales que constituyen una molécula y
poseen carga parcial positiva; tienen la función de intensifi car la formación de color
mediante la acción de grupos de átomos no saturados; su función es desplazar a los
cromóforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad.
Los siguientes grupos funcionales son considerados auxócromos: grupo metilo,
halógenos, hidroxi, alcoxi y amino.
los colorantes tienen las siguientes funciones:
Permiten hacer visibles a los objetos microscópicos y transparentes.
Revelan su forma y tamaño.
Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
Producen reacciones químicas específicas.(Luis,2014)
2. ¿A qué se debe la afinidad que tiene un colorante por la bacteria?
La afinidad tintoral de una bacteria se debe a que, los colorantes utilizados con frecuencia son
moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes
celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos.
Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros
colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes
celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la
eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los
colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo
para revelar la localización de las gotículas o depósítos de grasa. Un ejemplo de colorante
liposoluble es el negro Sudán.
3. ¿De qué manera influye el pH en la coloración?
Diferenciales: se les añade un hidrato de carbono y un indicados de pH de forma que si
el microorganismo es capaz de utilizar ese hidrato de carbono se produce un cambio de
pH que hace que el indicador cambie de color y evidencie la reacción. Así las colonias
son fácilmente reconocibles por su color.
4. ¿Por qué es necesario utiliza métodos de tinción para visualizar a las bacterias?
Es necesario para aumentar el contraste entre la bacteria (la cuales son difíciles de ver con el
microscopio óptico) y el medio que lo rodea haciendo mas fácil la identificación de las bacterias,
se logra aumentar el contraste por medio de colorantes estos pueden emplearse para distinguir
entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.
5. Mencione 4 microorganismos que tengan la forma de bacilos
Bacillus anthracis
Corynebacterium-Corynebacterium diphtheriae.
Erysipelothrix spp
enterobacterias,
Pseudomonasspp.
6. Mencione 4 microorganismos que tengan la forma de espirales
Helicobacter pylori
Campylobacter jejuni
Borrelia burgdorferi
Treponema pallidum
7. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos gram positivos
y explique la función que cumple cada uno de ellos.
Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan
con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano
en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las
características tintoriales, también contienen ácidos teicoicos, polímeros de glicerol y ribitol
unidos por grupos fosfato y aminoácidos o azúcares unidos a los grupos glicerol y ribitol.
Figura 1: pared celular de microorganismos gran positivas
fuente: https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
La pared celular Gram-positiva se eriza por la presencia de una capa de peptidoglicano muy
gruesa, que es responsable de la retención de los tintes violetas durante la tinción de Gram. Las
paredes celulares Gram-positivas contienen unos polialcoholes denominados ácidos teicoicos,
algunos de los cuales se enlazan con lípidos para formar ácidos lipoteicoicos.
Puesto que los ácidos lipoteicoicos tienen enlaces covalentes con los lípidos de la membrana
citoplásmica, son responsables de enlazar el peptidoglicano a la membrana citoplásmica. Los
ácidos teicoicos dan a la pared celular Gram-positiva una carga negativa total debido a la
presencia de los enlaces de fosfodiéster entre los monómeros del ácido teicoico.
8. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos gramnegativos
y explique la función que cumple cada uno de ellos.
Figura 2 : Pared Celular Gram Negativa
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La pared celular de las bacterias Gram negativas está formada por dos membranas lipídicas, una
interna (citoplasmática) y otra externa, con un espacio entre ellas denominado espacio peri
plasmático en el que se dispone una capa de una sustancia llamada peptidoglicano.
1. Membrana Citoplasmática
Transporta nutrientes hacia el interior de las células y expulsa las sustancias tóxicas fuera
de la célula.
Le da forma a la estructura celular
Aislar selectivamente el contenido de la célula del ambiente externo
Es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la Tinción de Gram
2. Espacio Peri plasmático
Se encuentran enzimas importantes para la nutrición de la bacteria.
Proporciona rigidez a la pared celular bacteriana
Tiene una gran importancia en el metabolismo energético, que se basa en la alimentación
por procesos activos de diferencias de composición química, concentración osmótica y
carga eléctrica entre este compartimento y el citoplasma.
Es el responsable de la incapacidad de la pared celular para conservar el color violeta en
la decoloración con etanol durante la tinción de Gram
3. Membrana Externa
Sirve como tamiz celular
Protege a la bacteria
Condiciona las propiedades de la superficie de la célula (humedad, adhesividad, carga
negativa)
Se encuentran las porinas unas proteínas que forman canales por los que pueden pasar
determinadas sustancias
9. Explique el fundamento de la coloración de Gram y esquematice.
La tinción de Gram diferencia a las bacterias en dos grandes grupos. Se llama bacterias Gram
positivas a aquellas que retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram negativas
a las que se decoloran y después se tiñen con safranina. Esta diferencia de tinciones se debe a la
estructura de las paredes celulares de ambos tipos de bacterias (figura . Las bacterias Gram
positivas tienen una pared gruesa compuesta de peptidoglucanos y polímeros, e impermeable, que
hace que resista la decoloración. En cambio, las bacterias Gram negativas tienen una capa delgada
de peptidoglucanos más una bicapa de lipoproteínas que se puede deshacer con la decoloración.
(Roberto Arenas, 2018).
Figura 3: diferencias entre bacterias gram positivas y gran negativas
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Tinción de gram
1Colocar las láminas extendidas y fijadas en una bandeja adecuada y cubrir su superficie con
cristal violeta por un minuto.
2. Cubrir la superficie de la lámina con la solución de lugol por un minuto.
3. Colocar cada una de las láminas en posición inclinada y decolorarlas con alcohol a 95° hasta
que el color libre deje de salir. Este es el paso más importante de la coloración ya que una excesiva
adición del alcohol permite la salida del colorante primario de las células gram positivas.
4. Cubrir las láminas con safranina por 30 segundos
5. Secar las láminas, Observar varios campos hasta encontrar aquél, donde las células están
adecuadamente separadas, para permitir la visualización de la morfología, arreglo de las células,
presencia de endosporas y su reacción al Gram.
10. ¿A qué se denomina mordiente y mencione tres ejemplos?
Los reactivos mordientes son aquellos que preparan al tejido para su coloración el reactivo
mordiente es una substancia que tiene una afinidad tanto con el material tintóreo como con el
material que va a ser teñido. Actúa como un puente entre ambos y de esta manera ayuda a que el
tinte se fije permanentemente en la fibra (por ejemplo el ácido oxálico presente en las hojas de
Ruibarbo, el alumbre (sulfato de aluminio), cremor tártaro (potasio) óxidos de hierro
Figure 4: Ejemplo de Materiales con su respectivo mordiente
Fuente: https://es.scribd.com/document/359972682/microbiologia-tincion
Paginas Consultadas
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Membrana-celular
https://es.scribd.com/document/359972682/microbiologia-tincion
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicr
o/Diag_directo.html
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article&id=46&Itemid=61
BIBLIOGRAFÍA
Luis Esaú López-Jácome, 2014. Las tinciones básicas en el laboratorio de
microbiología URL: https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2014/ir141b.pdf
Roberto Arenas, 2018. Hans Christian Gram y su tinción URL:
https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf
