PRÁCTICA 0
FOTOSÍNTESIS
OBJETIVO
Objetivo general
Desarrollar un experimento para cuantificar el efecto de variables medioambientales (pH, temperatura, intensidad de luz, edad de las hojas
etc.) sobre la velocidad de la fotosíntesis.
MARCO TEÓRICO
Generalidades
La fotosíntesis es un proceso anabólico empleado por todos los fotoautótrofos para capturar energía de la luz y convertir esta en la energía
química de los carbohidratos.
Esta puede ser medida en diferentes formas.
Aunque hay numerosas reacciones intermediarias involucradas, la reacción fotosintética promedio es simple: dióxido de carbono se combina
con el hidrógeno del agua, para producir un carbohidrato de 6 miembros (glucosa) y gas oxígeno.
6 CO2 + 6 H2O + luz solar C6H12O6 + 6 O2
La producción fotosintética de oxígeno y el conocimiento de la anatomía de hoja, permiten la construcción de un simple sistema que puede
ser usado para investigar experimentalmente muchas de las variables fotosintéticas. Muchos espacios extracelulares existen dentro de las
hojas de la planta que son normalmente llenadas con aire para propósitos de intercambio de gas. Esta es la razón por la cual las hojas van a
flotar en la superficie de cuerpos de agua.
Figura1. Diagrama del movimiento de los discos de hojas dependiendo de su contenido de gases, CO2 y O2.
Si los requerimientos básicos para la fotosíntesis son suministrados, el oxígeno producido en las hojas va a formar burbujas de gas y la hoja
va a flotar. En esencia, este es el método experimental, sin embargo, discos pequeños cortados de hojas van a ser usados para reemplazar
las hojas enteras para realizar el ensayo de disco de hoja flotante (EDHF).
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MATERIALES Y REACTIVOS
Lista de Materiales
NOTA: Cada equipo debe traer hojas verdes de espinaca, lotería u otra planta recolectadas recientemente (frescas). NOTA:
Los EQUIPOS son de dos personas y los GRUPOS se estimaron con 8 equipos (16 personas).
MATERIALES POR EQUIPO POR GRUPO
Beakers de 50 mL 2 16
Cronómetro 1 8
Fuente de luz variable 1 8
Jeringas plásticas de 10 mL 1 8
Sacabocados de 1 cm de diámetro. 1 2
Lista de Reactivos
MATERIAL POR EQUIPO POR GRUPO POR 3 GRUPO
Bicarbonato de sodio al 0.2% 500 mL 4 000 mL 12 000 mL
Detergente líquido 1 mL 10 mL 30 mL
Preparación de Reactivos
Bicarbonato de sodio al 0.2%
Disuelva 2.0 g de bicarbonato de sodio en 1000 mL de agua destilada.
NOTA: El bicarbonato de sodio, NaHCO3, no está clasificado como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Coloque en una botella plástica.
ALMACENAMIENTO: Esta solución es estable por una semana.
PROCEDIMIENTO:
Preparación de los discos de la planta a estudiar
1. Seleccione la planta con la que se realizará el experimento, este es uno de los aspectos más críticos. La superficie de la hoja debe ser
lisa y no muy gruesa, evite plantas con pelos, se recomienda el uso de espinaca fresca y la planta de lotería entre otras.
2. Usando el sacabocados, corte suficientes discos de 10 mm de diámetro para realizar las diferentes pruebas.
Infiltración de los discos con la solución de bicarbonato
1. Remueva el émbolo de la jeringa y coloque dentro de la misma cinco discos de hojas.
2. Coloque el émbolo de nuevo y empújelo hasta desalojar el 90% de aire de la jeringa.
NOTA: Evite dañar los discos de hojas al colocar el embolo y empujarlo.
3. Succione un pequeño volumen de solución de bicarbonato de sodio al 0.2% dentro de la jeringa y asegúrese de que los discos de hojas
queden suspendidos en la disolución de bicarbonato.
4. Tapando con el dedo la salida de la jeringa, jale el embolo para crear un vacío durante 10 segundos. Mientras mantiene el vacío, mueva
los discos de hojas en círculos para suspenderlos en la disolución.
5. Quite el vacío, al hacerlo, la disolución de bicarbonato va a infiltrar los espacios de aire en la hoja, permitiendo que los discos se saturen
y se sumerjan en la disolución.
6. Si los discos no se sumergen, repita los pasos 4 y 5.
7. Si aun así no se sumergen, agregue un par de gotas de detergente líquido al contenido de la jeringa y repita los pasos 4 y 5.
8. Siga el proceso hasta que los discos se sumerjan.
Determinación de la velocidad de fotosíntesis
1. Transfiera los cinco discos saturados con la solución de bicarbonato de sodio en la jeringa a un beaker de 50 mL.
2. Agregue suficiente bicarbonato de sodio al 0.2% para llegar a la marca de 50 mL.
3. Coloque el beaker con los cinco discos sumergidos en el sistema con la fuente de luz en su máxima potencia e inicie el cronómetro.
4. Anote el tiempo entre el inicio de la iluminación y el ascenso de cada disco hasta la superficie.
5. Una vez que ha ascendido los cinco discos, remueva el beaker, sin apagar la fuente de luz y determine la intensidad lumínica en el
punto central donde yacía el beaker.
NOTA: Entre los “apps” gratis de los celulares con cámara existen varias versiones de luxómetros.
6. Calcule el periodo de ascenso ( de cada uno de los cinco discos, usado la ecuación:
= 1/t
donde
es el período o velocidad de ascenso de un disco en segundos-1,
t es el tiempo de ascenso de un disco en segundos.
7. Calcule la media y la mediana de las velocidades de ascenso de los cinco discos para el sustrato de bicarbonato al 0.2% con la
intensidad de luz medida.
Efecto de la concentración de bicarbonato en la fotosíntesis
Repita el procedimiento anterior usando soluciones de 0,16%, 0.12%, 0.08%, 0.04% y 0.02% de bicarbonato de sodio usando la misma
intensidad de luz.
Enuna gráfica dibuje la curva de la variación de la media de velocidad de ascenso al variar la concentración de bicarbonato y analice su forma.
En la misma gráfica, incluya dibuje la curva de la variación de la mediana de velocidad de ascenso al variar la la concentración de bicarbonato
y analice su forma.
Compare ambas curvas.
Efecto de la intensidad de la luz en la fotosíntesis
Repita el procedimiento anterior usando la solución al 0,2% de bicarbonato de sodio usando ¾, ½ y ¼ de la intensidad original de la luz.
En una gráfica dibuje la curva de la variación de la media de velocidad de ascenso al variar la intensidad de la luz y analice su forma.
En la misma gráfica, incluya dibuje la curva de la variación de la mediana de velocidad de ascenso la variar la intensidad de la luz y analice su
forma.
Compare ambas curvas.
BIBLIOGRAFIA
1. Wickliff, J. L. & R.M. Chasson (1964) “Measurement of photosynthesis in plant tissues using bicarbonate solutions”
Bioscience, 14:32-33.
2. 2 Steucek, G. L. R.J. Hill & Class/Summer (1982) “Photosynthesis I: An Assay Utilizing Leaf Disk” The American Biology
Teacher 51(2):96-99.
3. Tatina, R E. (1986) “Improvements to the Steucek and Hill Assay of phptosynthesis” The American Biology Teacher
47(2):96-99.
4. Rukes, K.L. & T.J. Mulkey (1994) “Measurement on the Effects of Light Quality and other factors on the rate of
photosynthesis” Bioscene 20(3):7-11.
