UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
CURSO: LABORATORIO BIOQUIMICA
-pregrado biología
GRUPO: 4
INFORME 2 PRÁCTICA 2: cuantificación de proteínas
Estudiante:
Valentina Ossabal Arboleda
Valentina Patiño Areiza
Ana Catalina Clavijo Sepulveda
1. ¿Qué tipo de estructuras (primaria, secundaria o terciaria) se afecta cuando una proteína
es sometida a pH extremos?
El cambio extremo de pH a parte de que altera la estructura acuosa de la proteína también
afecta las cargas de los grupos acidos y basicos que se encuentran en los grupos R
afectando las interacciones electrostáticas que le dan estabilidad y cierta rigidez a las
proteínas, viéndose afectada la estructura terciaria.
2. ¿Qué es el punto isoeléctrico de una proteína y qué sucede cuando una proteína en
solución alcanza su punto isoeléctrico en cuanto a su solubilidad? Cuál es el punto
isoeléctrico de la caseína.
El punto isoeléctrico de una proteína es cuando ésta se encuentra en el pH donde todas
sus cargas son 0 y se comporta como zwitterion. Cuando una proteína en solución alcanza
su pI, su solubilidad es casi nula.
El punto isoeléctrico de la caseína es 4.6.
3. Indique cuales son las proteínas más abundantes de la leche y defina algunas de sus
características y funciones
Las proteínas más abundantes presentes en la leche son la caseína, lactoglobulina y la
𝛂-lactoalbúmina.
La caseína es una fosfoproteína globular y se separa de la leche por acidificación, tiene
una baja solubilidad a pH: 4.6; contiene muchos residuos de prolina, lo que le confiere
una estructura con plegamiento especial, no contiene puentes disulfuro y es
prácticamente insoluble en agua por las características de su estructura secundaria y
terciaria y su función es transportar grandes cantidades de Ca y P.
La 𝛃-lactoglobulina es una pequeña proteína globular, en la leche de los rumiantes se
encuentra en dímeros lo que le confiere propiedades de unión a diferentes moléculas
hidrofóbicas, aún no se le ha atribuido una función biológica definitiva, pero se cree que
la composición aminoacídica y la cantidad de 𝛃-lactoglobulinas presente en la leche de
los rumiantes, le da un papel nutricional, incluso por su apariencia en secuencia y
estructura terciaria con otras proteínas del tipo lipocalinas, también se cree que pueda
tener una función de transporte de moléculas hidrofóbicas.
La 𝛂-lactoalbúmina en la leche humana es la principal proteína del lactosuero, contiene
una elevada cantidad de aminoácidos esenciales incluyendo el triptófano, lo que le da un
importante valor nutricional a la leche. Tiene función bioquímica por su participación en
reacciones enzimáticas y función nutricional ya que forma parte de la composición de la
leche materna. La función bioquímica es de vital importancia en la lactogénesis, puesto
que se une con galactosil-transferasa formando un complejo enzimático llamado
lactosa-sintasa, la cual cataliza la síntesis de lactosa a partir de glucosa y galactosa.
4. De acuerdo al procedimiento descrito en la guía de laboratorio, realice un diagrama de
flujo del procedimiento empleado para la obtención de lactosuero, y la separación de lacto
albumina y lacto globulina.
Preparación del lactosuero
Tratamiento del lactosuero para extraer proteínas
5. Qué métodos se emplean para la precipitación de las proteínas de la leche según la
metodología.
En esta práctica se usan las técnicas de centrifugación y/o filtración y fotocolorimetría para
separar y definir la concentración de lactoalbúmina y lactoglobulina en el lactosuero.
6. Cualitativamente (mayor intensidad color violeta = mayor cantidad de proteína en una
muestra), que esperaría que pasara si se toman 1ml de las siguientes soluciones y se les
adiciona el reactivo de Biuret:
1ml agua + 4ml 1ml lactoalbumina + 1ml lactoglobulina + 1ml proteínas
Biuret 4ml Biuret 4ml Biuret totales + 4ml Biuret
Este tendría un La lactoalbúmina es La lactoglobulina al Al tener una
color azul claro, una proteína que se igual que la muestra con varias
debido a que el encuentra en la lactoalbúmina es proteínas se tendrá
reactivo Biuret leche, esperaríamos una proteína que se mayor cantidad de
indica presencia de que al adicionar el encuentra en la enlaces peptídicos
proteínas o Biuret se pueda leche. Como ya por lo que el
péptidos cortos observar de un color sabemos este reactivo de Biuret
que el agua no [Link] color reactivo da un reacciona con
tendrá en una se debe a la ensayo positivo con estos.
mayor proporción formación de un los enlaces
complejo de peptídicos entre
coordinación entre aminoácidos,
los iones Cu2+ y los cuando la solución
pares de electrones queda de color
no compartidos del violeta. Esto se debe
nitrógeno que forma a que el cobre tiene
parte de los enlaces la propiedad de
peptídicos. Quizá la formar iones
cantidad de proteína complejos,
no sea de mayor especialmente entre
impacto para dar un los enlaces
color muy oscuro peptídicos.
AZUL CLARO AZUL OSCURO/ AZUL OSCURO / MORADO
MORADO CLARO MORADO CLARO
7. De acuerdo al procedimiento descrito en la guía de laboratorio, calcule la concentración
final de la solución patrón
Ci=(0.45gr/100ml)*100%
Vi=1 ml
Vf=5ml (1ml sln + 5ml Biuret)
CiV i 0,45% * 1ml
Vf
= C f ---> 5ml
= 0.09gr/ml concentración final de la solución patrón.
8. De acuerdo a los siguientes datos de la tabla cuál es la concentración de proteínas
totales, de lactoalbúmina y lactoglobulina,
Solución Sln Patrón Lactoglobulinas Lactoalbúminas Proteínas
totales
Absorbanci 0,199 0,0125 0,006 0,013
as
%sln patrón x absorb proteínas totales 0.09 % x 0.013ml
% proteínas totales = absorb sln patrón
x 20 x 5 = 0.199ml
x 20 x 5 = 0.58%
%sln patron x absorb lactoalbumina 0.09 % x 0.006ml
% lactoalbúmina = absorb sln patrón
x5 = 0.199ml
x5 = 0.013%
%sln patron x absorb lactoglobulinas 0.09 % x 0.0125ml
% lactoglobulinas = absorb sln patrón
x5 = 0.199ml
x5 = 0.028%
9. Exprese los valores de las concentraciones anteriores en mg/ml, ¿los valores son cercanos
a lo teórico?
*0,58 g de soluto en 100ml solución = 0,0058g/ml= 5,8mg/ml
*0.013g/100ml = 0.00013 g/ml = 0.13mg/ml
*0.028g/100ml = 0.00028 g/ml =0.28mg/ml
Valores teóricos:
Lactoalbúmina = 1 a 1.5 mg/ml,
Lactoglobulina = 2 a 4 mg/ml
Los valores no son cercanos puesto que los datos no son reales y se alejan mucho de lo esperado.
10. Consulte la función de las sales de sulfato de amonio y cloruro de sodio en el
procedimiento de separación de las globulinas.
A altas fuerzas iónicas, la solubilidad de las proteínas disminuye, este fenómeno es conocido
como “Salting out”; se da básicamente por la competencia que establece la sal con la proteína
por el agua, logrando sacar la capa de solvatación quedando las cargas de la proteínas libre,
trayendo como consecuencia que estas se atraigan y se aglomeran, logrando la precipitación
de las globulinas; esto también se debe a que la sal se encontraba a una solución saturada.
Bibliografía
● [Link] Consultado el 26/09/2020
● Diapositivas: grasayproteina_1796.pdf
● Munray,R. Granner D. Mayes, P, Rodwell, V(1996) Bioquímica (México D.F) 14ta
edición. Manuel Moderno.
● Práctica 3. EXTRACCIÓN DE LA CASEÍNA Y DETERMINACIÓN DEL PUNTO
ISOELÉCTRICO. Licenciatura en biotecnología. Fisicoquímica de biomoléculas.
Consultado el 28/09/2020
● Ballester, M. 2005. La 𝛃-lactoglobulina y su aplicación en la transgénesis.
Universidad autónoma de Barcelona. Facultad de veterinaria.
● Peso, P. 2012. 𝛂-lactoalbúmina como ingrediente de fórmulas infantiles.
Departamento de tecnología de los alimentos, nutrición y bromatología. Facultad de
veterinaria. Universidad de Murcia, España.
