UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
FACULTAD DE ARQUITECTURA E INGENIERÍAS CIVIL Y
DEL AMBIENTE
ESCUELA
PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
CURSO:
ECOTECNOLOGÍAS AVANZADAS
PRÁCTICA N°3:
PROPIEDADES FÍSICAS DEL AGUA Y ANÁLISIS DE MICROORGANISMOS
DOCENTE:
BERLY CARDENAS PILLCO
INTEGRANTES:
Nombre D. L. D.I. E.
Arroyo Pariente, Fairuz A A
Galdos Manrique, Luigi A A
Miauri Pacheco, Franschesca A A
AREQUIPA-PERÚ
2018
Práctica N°3
Propiedades físicas del agua y análisis de microorganismos
1. OBJETIVOS
1.1. Objetivo principal
➔ Realizar un análisis de los parámetros físicos y microbiológicos de diferentes
muestras de agua para evaluar su calidad.
1.2. Objetivos específicos
➔ Realizar un muestreo de agua natural, inducida y contaminada de la ciudad
de Arequipa.
➔ Determinar la cantidad y tipos de sólidos presentes en las muestras de agua.
➔ Determinar los microorganismos presentes en las muestras de agua
contaminada, inducida y natural.
2. Introducción
En nuestro país, el agua es un recurso relativamente abundante, sobre todo en
las partes superiores de las cuencas, sin embargo está sufriendo un deterioro en
su calidad. En la ciudad de Arequipa esto es debido al vertido de aguas
residuales domésticas (materia fecal), aguas residuales industriales (desechos
químicos de cromo, cadmio, zinc, mercurio, ácidos, etc.) y residuos sólidos,
comprometiendo las actividades de la población y del ecosistema.
Los Estándares de Calidad Ambiental del Agua (ECA-Agua), constituyen los
objetivos de calidad aplicables a los cuerpos de agua y están legislados por el
D.S. N° 004-2017-MINAM. Según el D.S. se definen 4 categorías a las que
pertenece un cuerpo de agua como son: Poblacional y recreacional, actividades
marino costeras, riego de vegetales y bebida de animales y conservación del
ambiente acuático. Éstas categorías son importantes ya que entran en el contexto
de los puntos de muestreo realizados en esta práctica, de un ambiente natural,
uno inducido (acequias) y contaminado.
Teniendo en cuenta lo anterior es necesario saber cuáles son las características
físicas (sólidos sedimentables, disueltos, en suspensión, etc.)y microbiológicas de
las diferentes muestras de agua que extrajimos de la ciudad y así poder
determinar en qué estado se encuentran.
3. Resumen
En la práctica se identificaron parámetros físicos de las muestras de agua los
cuales son la conductividad, el pH, los sólidos (sedimentables, totales, disueltos,
totales suspendidos, lisos volátiles) y en el análisis microbiológico se realizó
siembras en caldo LB y en agar Sabouraud, además de una tinción gram y
posterior observación al microscopio de cada una de las muestras de agua
obtenidas de diferentes puntos de la ciudad de Arequipa. Los resultados indican
Palabras clave: Conductividad, ph, sólidos totales, sólidos disueltos.
4. Marco teórico
CONDUCTIVIDAD ELÉCTRICA (CE)
La conductividad eléctrica de una solución es una medida de la capacidad de la
misma para transportar la corriente eléctrica y permite conocer la concentración de
especies iónicas presentes en el agua. Como la contribución de cada especie iónica
a la conductividad es diferente, su medida da un valor que no está relacionado de
manera sencilla con el número total de iones en solución. Depende también de la
temperatura. Está relacionada con el residuo fijo por la expresión conductividad
(μS/cm) x f = residuo fijo (mg/L) El valor de f varía entre 0.55 y 0.9.
pH
Se define como el logaritmo de la inversa de la concentración de protones:
pH = log 1/[H+ ] = - log [H+ ]
El pH es un índice longitudinal que mide la alcalinidad de alguna sustancia o lo que
es su similar mide su grado de acidez. (MINEM) Mide la cantidad de iones de
hidrógenos que contiene alguna sustancia química, sus variantes son mientras más
ácido la sustancia mayor cantidad de iones tendrá esta. Está dividida en 2 escalas
que varían entre 0 y 14, los mayores a 7 indican mayor grado de acidez. Medir el
grado de acidez es muy importante puesto que nos brinda información acerca de la
calidad del agua, mientras más acido sea esta, indicara un mayor grado de
desechos sólidos.
Sólidos
El agua puede contener tanto partículas en suspensión como compuestos
solubilizados, definiéndose la suma de ambos como Sólidos Totales (ST). La
determinación de ST se realiza, conforme a la norma UNE 77030:1982, evaporando
un volumen conocido de muestra y secando el residuo en estufa a 105 ºC, hasta
pesada constante, indicándose el resultado en mg/L. Esta medida nos permite
conocer el contenido total de sustancias no volátiles presentes en el agua.
Los Sólidos sedimentables se determinan por decantación (UNE 77032:1982) a
partir de un volumen de muestra de un litro dejado en reposo en un recipiente
cónico (cono Imhoff) durante una hora, expresando el volumen sedimentado en el
fondo del cono en ml/L. Los Ss nos dan una idea de la cantidad de lodos que se
producirán en la decantación primaria.
Los sólidos disueltos se determina gravimétricamente mediante filtración, a vacío
o presión, con filtros de fibra de vidrio de borosilicato de diámetro de poro de 0,45
μm, de un volumen conocido de agua bruta, denominándose Sólidos en Suspensión
(SS) el residuo seco retenido en los mismos (UNE-EN 872:1996) expresado como
mg/L. Al residuo del filtrado secado a 105 ºC se le denomina Sólidos disueltos (SD),
y se expresa también en mg/L (UNE 77031:1982). denomina no volátil al peso del
residuo seco obtenido de los ensayos de ST, Ss, SD y SS calcinado a 550±50ºC, y
está formado por la mayoría de los compuestos de origen inorgánico presentes. Los
sólidos volátiles se determinan por diferencia de pesada entre la muestra sólida
inicial y el peso de no volátiles, siendo un indicador de la cantidad de materia
orgánica presente en esa fracción de muestra.
Los sólidos sedimentables son los causantes de la turbidez debido a que producen
dispersión de la luz que atraviesa la muestra de agua. La determinación de turbidez
se realiza conforme a la norma UNE-EN 27027:1995 mediante métodos de
observación semicuantitativos, indicando la profundidad a que deja de ser visible
una marca u objeto patrón, o cuantitativos, empleando turbidímetros ópticos, dando
los resultados en unidades nefelométricas de formacina (FNU). La turbidez es una
medida importante en aguas potables, pues las pequeñas partículas coloidales,
pueden portar gérmenes patógenos. En cursos naturales de agua la turbidez
produce una falta de penetración de la luz natural y por tanto modifica la flora y
fauna subacuática.
Sólidos Totales Disueltos (STD)
Constituyen una medida de la parte de sólidos, en una muestra de agua, que pasa a
través de un poro nominal de 2,00 μm ó menos, en condiciones específicas. La
concentración total de sustancias o minerales disueltos es un parámetro, útil para
conocer las relaciones edáficas y la productividad en un cuerpo de agua natural; de
allí que los STD, se pueden determinar por filtración (básicamente o multiplicando
por un valor constante de 0,55 del valor de la Conductividad) y evaporando una
determinada cantidad de agua, a baja temperatura (± 105,00 ºC). Entonces, STD, es
el residuo seco, que contiene materia orgánica e inorgánica.
Figura N°1: Esquema sobre los sólidos presentes en cuerpos de agua.
PRINCIPALES CONTAMINANTES DEL AGUA:
a. Microorganismos patógenos. Son los diferentes agentes infecciosos portadores
de enfermedades, en los países de tercer mundo existe mucha mortalidad infantil
por causa de este tipo de agentes patógenos. La OMS recomienda que en el agua
para beber haya 0 colonias de coliformes por 100 ml de agua.
b. Desechos orgánicos. Son el conjunto de residuos orgánicos producidos por los
seres humanos, ganado, etc. Incluyen heces y otros materiales que pueden ser
descompuestos por bacterias aeróbicas, es decir en procesos con consumo de
oxígeno. Cuando este tipo de desechos se encuentran en exceso, la proliferación de
bacterias agota el oxígeno, y ya no pueden vivir en estas aguas peces y otros seres
vivos que necesitan oxígeno. Buenos índices para medir la contaminación por
desechos orgánicos son la cantidad de oxígeno disuelto, OD, en agua, o la DBO.
c. Sustancias químicas inorgánicas: En este grupo están incluidos ácidos, sales y
metales tóxicos como el mercurio y el plomo. Si tienen alta concentración causarán
daños irreversibles al consumidor de agua, además de altos daños a la maquinaria
d. Nutrientes vegetales inorgánicos: Nitratos y fosfatos son agentes que están
presentes naturalmente en el agua, pero su presencia excesiva origina crecimiento
excesivo de algas, y estas al morir tienden a originar un mal olor.
e. Sedimentos y materiales suspendidos. Son los resultantes de la interacción
que existe entre el agua y el suelo hídrico, esto a su vez genera turbidez que a su
vez complica la vida y alimentación de los peces
f. Sustancias radiactivas. Isótopos radiactivos solubles pueden estar presentes en
el agua y, a veces, se pueden ir acumulando a los largo de las cadenas tróficas,
alcanzando concentraciones considerablemente más altas en algunos tejidos vivos
que las que tenían en el agua.
g. Contaminación térmica. Cuando por motivo de reutilización el agua proviene de
centrales hidroeléctricas, este tiene una temperatura alta lo cual disminuye el
oxígeno y la vida dentro del agua.
5. Materiales y métodos
5.1. Materiales
Material de laboratorio
● Muestras de agua natural, inducido y 2 de contaminado
● Aceite de inmersión
● Cristal violeta
● Lugol
● Alcohol acetona
● Safranina
● Guantes de látex
● Papel filtro
● Probetas
● Placas petri
● Cápsulas de porcelana
● Baguetas
● Pipetas
● Envases de vidrio
● Láminas porta y cubreobjetos
● Matraz Kitasato
● Vasos de precipitado
● Tiras de pH
Equipo de laboratorio
● Balanza electrónica
● Bomba de vacío
● Conductímetro
● Mufla
● Microscopio
5.2. Métodos
A) Recolección, preservación y almacenaje de muestras: Las muestras deben
recolectarse en frascos plásticos o de vidrio y refrigerar inmediatamente.
Realizar el análisis lo antes posible, y en caso de requerirse almacenamiento,
hacerlo a temperatura 6°C por un tiempo máximo de 7 días.
B) Obtención de las muestras
Se tomó una muestra, de la zona de la Av. Ribereña-Sachaca-Arequipa. Esta
fue recolectada en un envase de vidrio de capacidad de 1 litro, se etiquetó y
conservó en refrigeración, a una temperatura adecuada.
Figura N°2: Ubicación geográfica de la toma de muestra, perteneciente a la
avenida Ribereña, Sachaca.
Figura N°3: Fotografía de la muestra.
C) Análisis físico de la muestra
Se determinó parámetros como conductividad, pH, sólidos sedimentables,
sólidos totales, sólidos disueltos, sólidos totales suspendidos y sólidos lisos
volátiles.
Conductividad
Se tomaron 100 ml. de cada muestra, las cuales se depositaron en
probetas de 100 ml y se llevaron a medir con el conductímetro. Asimismo,
se colocó la punta del electrodo en cada una de las muestras, y se esperó
unos minutos hasta que se estabilice.
Figura N°4: Determinación de la conductividad de la muestra
contaminada.
Medición del pH
Se tomaron 100 ml. de cada muestra, las cuales se depositaron en
probetas de 100 ml y se midió el pH con las tiras indicadoras de pH.
Figura N°5: Determinación del pH de todas las muestras.
Determinación de sólidos sedimentables
Primeramente, se trató cada uno de los vasos de precipitado, para luego
extraer el sobrenadante con ayuda de una jeringa con filtro.
Posteriormente, se extrajo hasta solo obtener el sedimento compacto. Los
sedimentos fueron pesados y por diferencia de pesos se determinaron los
SST.
Figura N°6: Fotografía de una de las muestras dejadas en reposo para su
sedimentación
Determinación de sólidos totales
1. Colocar alícuota de 50 mL de muestra de agua residual o tratada en
una cápsula de porcelana de peso conocido y constante. También
prepare una cápsula con 50 mL de agua potable de alguna marca
conocida (ésta le servirá para la siguiente práctica).
2. Si la cápsula que le proporcionen, tiene una capacidad menor a 50 mL,
adicione el agua por partes, puede adicionar 20 mL, dejar que casi se
evaporen y adicionar otros 20 mL, y así hasta completar los 50 mL.
3. Calentar la parrilla hasta sequedad, evitando proyecciones.
4. Introducir la cápsula a una estufa de temperatura constante y
controlada a 105°C durante una hora.
5. Determinar el contenido de sólidos totales en la muestra usando la
siguiente ecuación:
DONDE: A = Peso del residuo más la cápsula en mg.
B = Peso de la cápsula en mg
Figura N°7: Placas con muestra.
Determinación de sólidos disueltos
1. Filtrar 50 mL de agua a través de un embudo que contenga un papel
filtro previamente lavado con agua desionizada.
2. Recolectar el agua filtrada en una cápsula de porcelana en
condiciones similares a la de sólidos totales.
3. Continuar de acuerdo al procedimiento indicado para sólidos totales.
4. Determinar el contenido de sólidos totales disueltos en agua.
Determinación de sólidos totales suspendidos
1. Montar el equipo de ultrafiltración, utilizar una membrana de nylon de
0.45 μm de diámetro de poro, previamente pesada.
2. Filtrar 50 mL. de muestra.
3. Lavar el residuo depositado sobre la membrana con 3 porciones de 10
mL de agua desionizada previamente filtrada.
4. Retirar la membrana por medio de pinzas y colocarla en una caja petri
de vidrio.
5. Secar la membrana en una estufa de temperatura controlada a 105°C
durante una hora.
6. Pesar la membrana y determinar el contenido de sólidos totales
suspendidos en la muestra de acuerdo a la siguiente ecuación.
DONDE: A = Peso del residuo más la membrana, en mg
B = Peso de la membrana en mg
Determinación de sólidos lisos volátiles
Las condiciones ambientales no son críticas para la realización de este ensayo.
● Selección de la metodología: definir la fracción (totales, disueltos o
suspendidos) sobre la cual quieren determinarse los sólidos volátiles.
● Proceder según la IE correspondiente para la preparación del filtro o la
cápsula de evaporación, pero cambiando el calentamiento a 103 ó 180°C, por
incineración en mufla a 550°C durante una hora. Guardar la cápsula o el filtro
en desecador y pesar inmediatamente antes de utilizarlo.
● Determinar la fracción deseada según la IE correspondiente. Registrar el
peso de la cápsula o el filtro más el residuo, una vez secado a 103 ó 180°C.
● Incinerar el residuo obtenido a 550°C durante 15 minutos.
● Dejar la cápsula o el filtro, según sea el caso, al aire hasta que disminuya
algo su temperatura y luego depositarlo dentro del desecador hasta que
alcance la temperatura ambiente.
● Pesar el filtro o la cápsula y registrar los datos.
● Repetir las etapas hasta que la diferencia con la pesada previa sea < 4% ó <
0.5 mg (seleccionar el valor que resulte menor). Anotar el peso del filtro o la
cápsula.
Figura N°7: Placas con muestra.
D) Análisis microbiológico
➔ Observación e Identificación de microorganismos:
Observación directa
1. Lavar y desengrasar un portaobjetos con alcohol
2. Poner una gota de muestra sobre el portaobjetos equivalente a 10ul.
3. Cubrir la muestra con el cubreobjetos.
4. Observar a microscopio con el menor, mediano y mayor aumento.
➔ Tinción de Gram: La tinción de Gram es la tinción diferencial más utilizada
en bacteriología pues permite separar las bacterias en dos grandes grupos,
las Gram-positivas y las Gram-negativas. La tinción de Gram requiere cuatro
soluciones:
● Primer colorante. Es un colorante básico que en contacto con las
células cargadas negativamente, reacciona con ellas
coloreándolas. El más utilizado es el cristal violeta.
Figura 8: Placas con cristal violeta
● Solución mordiente. Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre
el colorante y las células. Los mordientes empleados suelen ser
sales metálicas, ácidos o bases, como, por ejemplo, una solución
diluida de yodo.
Figura 9: Placas con lugol
● Agente decolorante. Es un disolvente orgánico, por ejemplo,
alcohol acetona.
● Colorante de contraste. Es un colorante básico de distinto color
que el primer colorante, como, por ejemplo, la safranina.
Figura 10: Placas con safranina
Tinción Gram:
1. Lavar y desengrasar un portaobjetos con alcohol.
2. Poner una gota de muestra sobre el portaobjetos. Fijar por calor, sin
quemar las células.
3. Teñir 1 minuto con cristal violeta.
4. Lavar con agua
5. Teñir 1 minuto con lugol
6. Lavar con agua
7. Desteñir 30 segundos con etanol
8. Lavar con agua
9. Teñir 1 minuto con safranina
10. Lavar con agua, secar y observar al microscopio
6. Resultados y discusión
6.1. Resultados
A continuación, se presentan los principales resultados:
A) Obtención de las muestras
Tabla N°1: Características organolépticas de las muestras de agua.
Muestra Volumen (ml) Olor Color Material
suspendido
Natural 1000 Inodoro Incoloro Tierra
Inducido 1000 Inodoro Amarillento Materia
claro orgánica, tierra
Contaminado 400 Fétido Verdusco Materia
1 orgánica, tierra
Contaminado 1000 Fétido Amarillento Materia
2 orgánica, tierra
La tabla N°1 nos muestra que las muestras presentan casi las mismas
características, resaltando su olor fuerte y color turbio, lo cual hace evidente que
contienen alta carga de materia orgánica proveniente de los desechos de las
tuberías clandestinas que vierten sus aguas directamente, sin ningún tipo de
tratamiento.
B) Análisis físico
Tabla N°2: Características organolépticas de las muestras de agua
Muestra Conductividad pH
Natural 9.56 mS 7
Inducido 568 mS 6
Contaminado 1 37.78 mS 9
Contaminado 2 1588 uS 6
Inicialmente, se dejaron en reposo las muestras para que sedimentaron
por un período de 12 horas, pero a simple vista se apreciaba que
necesitaban más tiempo para la compactación. Se observó que los
sedimentos estaban compuestos principalmente por materia orgánica
(fecal).
Tabla N° 3: Resultados obtenidos la determinación de Sólidos sedimentables:
Muestra Sólidos sedimentables (%)
Natural 0
Inducido 0
Contaminado 1 3.75
Contaminado 2 2
DONDE: A = Peso del residuo más la cápsula en mg. B = Peso de la cápsula en
mg
mg de sólidos totales=( A−B)∗1000/ volumen de muestra (ml)
Tabla N° 4: Resultados obtenidos la determinación de Sólidos totales:
Peso de la Volumen de Peso de la
Sólidos
Muestra placa “B” la muestra placa+residu
totales (mg)
(mg) (ml) o “A” (mg)
Natural 48410 8.99 48430 2224.69
Inducido 43360 4.68 43370 2136,75
Contaminado
43740 8.29 43800 7237,64
1
Contaminado
41290 1.94 41300 5154.64
2
DONDE: A = Peso del residuo más la cápsula en mg. B = Peso de la cápsula en
mg
mg de sólidos totales=( A−B)∗1000/ volumen de muestra (ml)
6.2. Discusión
A nivel de PH`s podemos diferenciar claramente la varianza entre las muestras, la
muestra natural, la cual tuvo un valor de PH igual a 7, siendo neutra debido al
tratamiento previo que se realiza antes de su destino final para consumo,que en
comparación de la muestra inducida, la cual a simple vista no contienìa sólidos la
diferencia es mínima.
Con respecto a los datos obtenidos de sólidos sedimentables, a excepción de la
muestra natural e inducida ya que éstas no contenían ningún tipo de sólido,por lo
tanto no fue necesario determinar el porcentaje de sólidos sedimentables.
Sin embargo para el resto de muestras si fue necesario calcular el porcentaje de
sólidos sedimentables; para las muestras de agua contaminado, se determinó
que no existe la relación entre nivel de contaminación y cantidad de sólidos
contenidos en las porciones de agua, debido a que la muestra contaminada no
contenía muchos sólidos , sin embargo es la que presenta mayor contaminación,
por ello el análisis microbiológico ayudará a determinar los factores causantes de
esta premisa.
En la muestra de agua contaminada 1, luego del análisis microbiológico y
observación en el microscopio, Se pudo distinguir la presencia de Bacterias Gram
negativas (Escherichia Coli), por lo que da a conocer la presencia de materia
fecal en el agua tomada de la acequia - Parque Industrial de Río Seco - Cerro
Colorado.
7. Conclusiones
● Determinamos la calidad del agua a partir de técnicas analíticas, mediante
cálculos, obtuvimos, los sólidos sedimentables, sólidos disueltos y sólidos
totales suspendidos.
● Mediante estas experimentaciones, resaltamos la importancia ecológica de
las propiedades físicas del agua, su color, olor e incluso su sabor son
indicadores también de su calidad, esta calidad puede ser alterada debido a
los contaminantes presentes cerca a los cuerpos de agua, especialmente si
el agua está en contacto humano, como la contaminada y modificada y con
menor incidencia en el agua nativa al estar más alejada de actividades
antrópicas
8. Bibliografía
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★ FLORIÁN PRETELL, Talía Karely “ANÁLISIS FÍSICOS, QUÍMICOS Y
MICROBIOLÓGICOS DE LA CALIDAD DEL AGUA SUPERFICIAL DE LA
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★ Rojas Tamata, Karen “REMOCIÓN DE ARSÉNICO (V) Y CROMO (VI)
PRESENTE EN LECHOS ACUÁTICOS MEDIANTE EL USO DE TIERRA DE
DIATOMEAS RECUBIERTA CON SALES DE HIERRO, AREQUIPA
★ Weyser Canaquiri Pezo Víctor Miguel Ruíz Calderón “Estudio y análisis
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Iquitos Loreto”.
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★ Carranza Leon, V. (2016). [Link]
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9. Anexos
Análisis microbiológico
Tabla N° : Características microscópicas de la tinción Gram
Característica
Muestra Dilución
microscópicas
Tinción Gram
Contaminado Gram +
1
Placa N°1 Forma celular
Cocos
Tinción Gram
Contaminado Gram -
1
Placa N°2 Forma celular
Levaduras
Tinción Gram
Contaminado Gram -
2
Placa N°1 Forma celular
Levaduras
Tinción Gram
Contaminado Gram -
2
Placa N°2 Forma celular
Levaduras
Tinción Gram
Contaminado Gram -
2
Placa N°3 Forma celular
Levaduras
Toma de muestra con el conductimetro
Medición de Sólidos Sedimentables
