Determinación de carbono orgánico total por el método
Walkley-Black
Lina María Gómez Molina±, Kevin Cuero Montalvo±
±
Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Departamento de Ciencias Químicas
Octubre 08 de 2020.
Resumen
Por medio del presente laboratorio, se logró determinar el contenido de carbono orgánico en una
muestra de metilcelulosa y lactosa, empleando el método de Walkley-Black. La cuantificación,
se llevó a cabo mediante la construcción de una curva de calibración de la cantidad de carbono
orgánico presente en un estándar de sacarosa con respecto a la absorbancia reportada por el
espectrofotómetro. A partir de esta y de los respectivos cálculos, se obtuvo el contenido de
carbono en la muestra de metilcelulosa (4.87 mg) y en la muestra de lactosa (3.89 mg). Para esta
última, se registró el porcentaje de error (7.6 %) y el porcentaje de rendimiento (92.4 %) al
compararlos con el valor reportado. Esto, permitió evaluar la viabilidad del método de Walkley-
Black en conjunto con técnicas instrumentales como la espectrofotometría visible para la
cuantificación de carbono orgánico total en una muestra.
1. Introducción es posible incidir un haz de luz en el rango
del visible del espectro electromagnético a la
El método de Walkley-Black es una técnica muestra en cuestión. Con esto, es pertinente
instrumental, la cual se emplea ampliamente generar una relación de proporcionalidad del
para la determinación de carbono orgánico contenido de carbono en la muestra con
(CO), principalmente en muestras de rocas, respecto a la absorbancia de este analito, esta
sedimentos y en general de materia relación corresponde a ley de Beer-Lambert.
orgánica1. Este método, es de carácter
húmedo, el cual consiste en el tratamiento Actualmente, es de gran relevancia la
oxidativo de la muestra de material orgánico implementación de esta técnica en la
empleando un agente oxidante fuerte como industria alimentaria, agropecuaria e incluso
dicromato de potasio (K2Cr2O7) en un medio en investigaciones ambientales en aras de
acidificado con ácido sulfúrico cuantificar el contenido de carbono en
esencialmente (H2SO4) concentrado. De este muestras de origen orgánico como suelos,
modo, la presente técnica requiere de un pH sedimentos y demás4. Por un lado, se puede
bajo adecuado, el cual es obtenido mediante cuantificar el contenido de carbono presente
la dilución del ácido en cuestión, en donde en muestras de rocas sedimentarias ricas en
se libera calor, aumentando por ende la materia orgánica de diversas procedencias a
temperatura del sistema y fomentando así la nivel mundial con fines agroindustriales1.
oxidación del carbono y en simultáneo la Asimismo, es posible emplear esta técnica
reducción del cromo, generando un color para determinar simultáneamente carbono
verde caracterísitico2. orgánico e incluso nitrógeno con potencial
mineral de suelos de diversos cultivos de
Es importante subrayar que, el método alimentos, tales como arroz, papa, frijol, café
original consiste en una titulación de tipo y demás en países principalmente
redox del ion dicromato (Cr2O72-) con sulfato agrónomos5. Por otro lado, la cuantificación
ferroso (FeSO4) en presencia de un ácido de carbono en suelos de diversos sectores del
fuerte3. No obstante, gracias al color mundo permite construir datos de contorno
generado por la reducción del ion cromato, ambiental que proporcionan información
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acerca de la contaminación del suelo de un calculan empleando la siguiente muestra de
determinada localidad6. cálculos. Entonces, para el balón uno se
tiene:
Con todo lo anterior, la finalidad del
1𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11
presente informe de laboratorio es la 2.5𝑚𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11 ∗ ∗
1000𝑚𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11
determinación de carbono en una muestra de 1𝑚𝑜𝑙𝐶12 𝐻22 𝑂11 12𝑚𝑜𝑙𝐶 12.01𝑔𝐶
∗ ∗ ∗
lactosa anhidra y metilcelulosa 342.296𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11 1𝑚𝑜𝑙𝐶12 𝐻22 𝑂11 1𝑚𝑜𝑙𝐶
1000𝑚𝑔𝐶
respectivamente por el método de Walkley - 1𝑔𝐶
= 1.05𝑚𝑔𝐶 (2)
Black. Para ello, se emplea una curva de 1.05𝑚𝑔𝐶
%𝐶 = (
2.5𝑚𝑔𝐶
) ∗ 100 = 42.0% (3)
calibración de absorbancia en
contraposición al contenido de carbono.
La muestra de cálculo que se expone en las
2. Cálculos y Resultados
ecuaciones (2) y (3) se replican para el resto
de los balones aforados y son suscitados en
2.1. Preparación de Curva de
la anterior tabla (ver Tabla 1). En segundo,
calibración patrón de sacarosa
lugar, se mide la absorbancia de cada patrón
En primer lugar, se exhibe el cálculo de la a una longitud de onda máxima de 590nm y
preparación de la solución “madre” de la Tabla 2 agrupa los datos de contenido de
sacarosa de 50mg/mL, para esto, se emplea carbono (mg de C) con sus respectivas
un balón aforado de 10mL. absorbancias.
50𝑚𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11 Tabla 2. Recopilación de datos para cada
𝑚𝑠𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 = ∗ 10𝑚𝐿 ∗
𝑚𝐿
1𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11 solución patrón.
= 0.50𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11 (1)
1000𝑚𝑔𝐶12 𝐻22 𝑂11
Mg de C en Absorbancia (λmax:
El resultado de la ecuación (1), indica que es cada balón 590nm)
indispensable medir 0.50g de sacarosa para (mg)
generar una solución patrón de 0 0
concentración de 50 mg/mL de sacarosa en 1.05 0.089
un volumen de 10mL. 1.47 0.134
En segundo lugar, se añaden las cantidades 2.11 0.211
mencionadas en la Tabla 1 para preparar los 3.58 0.373
estándares correspondientes. Para lo 4.21 0.416
anterior, se emplea la solución patrón
exhibida en el anterior apartado3. Con los datos de la Tabla 2, se procede a
Tabla 1. Preparación de estándares para la generar la respectiva curva de calibración de
curva de calibración absorbancia en contraste con el contenido de
Balón V Masa Contenido %C carbono en términos de miligramos. De este
estándar estándar de C en en modo, la Figura 1 muestra lo mencionado
50000pm 50000pm cada cada con anterioridad.
(µL) (mg) balón balón
(mg)
Absorbancia vs mg C
Absorbancia (590nm)
Blanco 0 0 0 0 0,6
(B)
0,4
1 50 2.5 1.05 42 0,2
2 70 3.5 1.47 42
0
3 100 5 2.11 42
0 1 2 3 4 5
4 170 8.5 3.58 42 -0,2
mg de Carbono
5 200 10 4.21 42
Ahora bien, tanto el contenido como el Figura 1. Curva de calibración de Abs. Vs
porcentaje de carbono en cada balón se contenido de carbono en mg.
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1𝑔C₁₂H₂₂O₁₁
Para lo anterior, se emplea el modelo [𝑚𝑔 𝐶] = 10.0𝑚𝑔C₁₂H₂₂O₁₁ ∗
1000𝑚𝑔C₁₂H₂₂O₁₁
estadístico de mínimos cuadrados y la 1𝑚𝑜𝑙C₁₂H₂₂O₁₁ 12𝑚𝑜𝑙𝐶 12.01𝑔𝐶
∗ ∗ ∗
respectiva ecuación de la recta acorde a la 342.3𝑔C₁₂H₂₂O₁₁ 1𝑚𝑜𝑙C₁₂H₂₂O₁₁ 1𝑚𝑜𝑙𝐶
1000𝑚𝑔𝐶
Figura 1 se presenta a continuación con el = 4.21𝑚𝑔𝐶 (9)
1𝑔𝐶
correspondiente coeficiente de correlación.
1𝑔𝐶 100
%𝐶 = 4.21𝑚𝑔 𝐶 ∗ ∗ =
𝐴𝑏𝑠 = 0.1029[𝑚𝑔 𝐶] − 0.00910 (4) 1000𝑚𝑔𝐶 10𝑔 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
0.421% (10)
R2=0.9962 (5)
Por añadidura, se halla el porcentaje de
2.2. Preparación de la muestra rendimiento (%R) propio a la determinación
instrumental de carbono presente en esta
Ahora bien, se determina la absorbancia de
muestra.
una muestra de 10.0 mg de lactosa anhidra,
la cual ha sido pretratada oxidativamente %𝑅 =
𝑚𝑔 𝐶 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙
∗ 100 (11)
𝑚𝑔 𝐶 𝑇𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜
con anterioridad. Con esto, se tiene que
dicha absorbancia corresponde a 0.391 %𝑅 =
3.89𝑚𝑔 𝐶
∗ 100 = 92.40% (12)
4.21𝑚𝑔 𝐶
unidades de absorbancia (a una longitud de
onda máxima de 590nm). Con estos resultados, se calcula el respectivo
0.391+0.00910 porcentaje de error relativo, usando tanto los
[𝑚𝑔 𝐶] = = 3.89𝑚𝑔 𝐶 (6)
0.1029 miligramos experimentales de la ecuación
El resultado obtenido en la anterior (6) como el teórico de la ecuación (9).
ecuación, indica que hay 3.89 mg de 4.21−3.89
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 = 7.6% (13)
Carbono en la muestra de lactosa anhidra. En 4.21
este mismo sentido, se determina la cantidad De la misma manera, se trata oxidativamente
porcentual de carbono presente en la muestra una muestra de 10mg de metilcelulosa y se
de lactosa utilizando el siguiente compendio determina una absorbancia en el
de ecuaciones. espectrofotómetro de 0.492 unidades de
𝑔𝐶 absorbancia a 590 nm. Al igual que en el
%𝐶 = 𝑔 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 ∗ 100 (7) apartado anterior, la ecuación (12) señala el
1𝑔𝐶 100 cálculo correspondiente de la cantidad de
%𝐶 = 3.89𝑚𝑔 𝐶 ∗ ∗ = carbono presente en la muestra.
1000𝑚𝑔𝐶 10𝑔 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
0.0389% (8) 0.492+0.00910
[𝑚𝑔 𝐶] = = 4.87𝑚𝑔 𝐶 (12)
0.1029
Igualmente, se procede a calcular el valor
teórico de mg de carbono y el porcentaje Con toda la información anterior, la Tabla 3
teórico correspondiente a la muestra en resume los datos obtenidos
cuestión, empleando factores experimentalmente en el presente ítem.
estequiométricos que se presentan a
continuación.
Tabla 3. Compendio de datos obtenidos para las muestras de metilcelulosa y lactosa.
Muestra Absorbancia Contenido de Error Rendimiento
(10.0mg) (590nm/A) Carbono (mg) (%) (%)
Lactosa anhidra 0.391 3.89 7.6 92.40
Metilcelulosa 0.492 4.87 - -
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3. Análisis de Resultados H2SO4 no sea tan elevada para que la
disminución de la temperatura no sea tan
Como se mencionó anteriormente, el método drástica y se pueda mantener la fuerza
de Walkley-Black es ampliamente empleado oxidante10. Teniendo en cuenta lo anterior,
en la industria agrícola para la determinación Walkley y Black indicaron que la relación
de carbono orgánico total en suelos7. Este 2:1 de ácido sulfúrico a dicromato de potasio
método, se basa en la oxidación húmeda de es la más adecuada para alcanzar
la materia orgánica (sacarosa, lactosa y temperaturas entre los 120 ºC y 140 ºC,
metilcelulosa) mediante la reducción de una rango entre el cual el potencial redox del
solución de dicromato de potasio en un sistema se ve optimizado. Sin embargo, es
medio de pH bajo8. Esta reacción redox, se pertinente resaltar que temperaturas
encuentra registrada en la reacción química superiores a los 150 ºC producen una rápida
(13). descomposición térmica del dicromato, por
2𝐶𝑟2 𝑂72− + 3𝐶 + 16𝐻 + → 4𝐶𝑟 3+ + lo que se debe tener un riguroso control
3𝐶𝑂2 + 8𝐻2 𝑂 (13) sobre este factor para evitar obtener valores
de recuperación errados10.
En este caso, para la cuantificación de
carbono orgánico se hace uso de las técnicas Adicionalmente, se debe asegurar que el
espectrofotométricas a partir de la medición sistema presente una intensidad oxidativa
de la absorbancia registrada por un complejo constante, lo cual se logra mediante la
coloreado en el rango del visible. Sin concentración de dicromato de potasio
embargo, la totalidad del carbono se libera empleada en la muestra. Así, se debe
de la reacción en forma de dióxido de emplear una concentración suficiente de
carbono, al oxidarse. Por lo tanto, mediante manera que la muestra no consuma más del
la espectrofotometría UV – Vis se va a 80 % del K2Cr2O7 presente10.
determinar los iones Cr3+ los cuales
De esta forma, empleando distintas
presentan una coloración verde y absorben
cantidades de la solución patrón (sacarosa) e
radiación electromagnética en el visible. La
iguales concentraciones de los demás
cantidad de iones Cr3+ formados mediante la
reactivos (ver Tabla 1), se prepararon el
reducción del dicromato, son proporcionales
blanco y los estándares de sacarosa según la
a la cantidad de carbono orgánico oxidado,
reacción (13) registrada. Se debe recordar
permitiendo así la cuantificación de este
que las mediciones de las absorbancias
último9.
deben realizarse frente al blanco de
Se debe resaltar que el ácido sulfúrico referencia, para así destacar la absorción
desempeña un papel fundamental en el proveniente de la matriz y que los valores
método, pues este compuesto al diluirse es el obtenidos correspondan únicamente a los
que brinda el medio ácido necesario para suministrados por el analito.
favorecer la reacción de oxidación de la
Antes de realizar las lecturas mediante el
materia orgánica mediante la liberación de
espectrofotómetro, se hace necesario filtrar
calor y el incremento de la temperatura del
las distintas soluciones con el fin de que se
sistema9.
eliminen cualquier tipo de impurezas y
En cuanto al potencial redox del sistema, se partículas suspendidas en esta. Esto, para
debe resaltar que este depende en gran evitar el fenómeno de difracción que se
medida de la concentración de ácido puede generar cuando el tamaño de las
sulfúrico y de la temperatura de la reacción. partículas suspendidas es igual a la longitud
De esta forma, un incremento en la de onda de la luz incidente, generando
concentración de ácido sulfúrico tiene como lecturas erróneas. De modo que, al filtrar, se
resultado un aumento de la fuerza oxidante evita en gran medida la difracción de la luz
del sistema, pero reduce la temperatura y los resultados obtenidos son más óptimos.
alcanzada en la disolución. Por lo anterior,
se hace necesario que la concentración de
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Así, a partir de los valores de absorbancia Siguiendo los mismos pasos de los
arrojados por el instrumento para cada estándares, se prepararon las muestras de
alícuota de la solución estándar, se elaboró metilcelulosa y lactosa para su análisis con
la correspondiente curva de calibración el espectrofotómetro. De esta forma, se
empleando el método de mínimos obtuvo una absorbancia de 0.492 para la
cuadrados, de modo que se obtuviera una metilcelulosa, a partir de la cual se calculó el
recta que se ajustara a los datos contenido experimental de carbono orgánico
experimentales (ver Figura 1). La ecuación (4.87 mg). Sin embargo, no se pudo obtener
de la recta obtenida se encuentra plasmada el porcentaje de error, ya que no se cuenta
en la ecuación (4). Es importante señalar con la cantidad reportada de carbono en la
que, el contenido de carbono orgánico (C) metilcelulosa. Esto, se debe a que no se tiene
para la construcción de la curva de conocimiento sobre el peso molecular, la
calibración se registró en términos de estructura, la distribución ni el grado de
miligramos en vez de porcentaje. Esto, metilación de este compuesto orgánico, lo
debido a que el porcentaje de C permanece que imposibilita la realización de cálculos
constante al ser la misma muestra de materia estequiométricos que permitan determinar el
orgánica y se mantiene la proporción 2:1 de contenido de carbono presente en este.
moles de carbono en moles de sacarosa, de
manera que estas unidades no permitirían Es importante señalar que, la absorbancia
reflejar el verdadero comportamiento de la registrada por la muestra de metilcelulosa
absorbancia en función de la variación del (0.492) es un dato no confiable, puesto que
contenido de carbono. se encuentra por encima del rango permitido
de la curva de calibración construida
Teniendo en cuenta la ecuación de la recta, (0.416). Por lo anterior, se podría llevar a
se puede observar que la variable cabo un proceso de dilución de manera que
independiente es el contenido de carbono en se disminuya la concentración de la
la muestra (mg), mientras que la variable solución, la absorbancia registrada por esta
dependiente corresponde a la absorbancia. se reduzca y pueda entrar en el rango de
Esto, responde a la Ley de Beer Lambert, trabajo. Sin embargo, este proceso de
pues respalda la relación directamente dilución puede afectar el coeficiente de
proporcional entre estas 2 variables, la cual correlación al alejar el valor obtenido de la
se ve reflejada en el comportamiento de la unidad.
curva de calibración, en donde un
Mientras que, para la lactosa, se obtuvo una
incremento en el contenido de carbono, la
absorbancia de 0.391. A partir de esta, se
cual es proporcional a la cantidad de iones
calculó el contenido de carbono orgánico
𝐶𝑟 3+ , viene acompañado de un aumento en
presente en la muestra (3.89 mg), donde este
la absorbancia del analito, concordando así
último se comparó con el respectivo valor
con la teoría11.
reportado (4.21 mg), obteniendo así un
En cuanto al coeficiente de correlación (5), porcentaje de error del 7.6 %. Este valor,
se puede evidenciar el elevado grado de indica que se presentó una desviación del
covariación existente entre la cantidad y la 7.6% del valor reportado, lo que indica la
absorbancia del analito. Esto, ya que se alta exactitud del método.
obtuvo un coeficiente muy cercano a 1
No obstante, es pertinente resaltar que
(0.9962), lo que indica la proximidad a una
mediante el método de Walkley-Black no se
relación perfecta positiva entre las variables.
oxida la totalidad del carbono orgánico,
Lo anterior, se evidencia en la pendiente
debido a que la temperatura suministrada por
positiva y en la tendencia relativamente
la reacción exotérmica no es lo
lineal presentadas en la curva de calibración;
suficientemente elevada para permitir que el
tendencia que responde a la
proceso de oxidación se lleve a cabo
proporcionalidad expuesta entre las
completamente. De esta forma y según el
variables analizadas (Ley de Beer Lambert),
estudio realizado por estos 2 autores en 20
aspecto discutido en el apartado anterior11.
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suelos diferentes, el porcentaje de carbono electromagnético. Todo lo anterior,
recuperado corresponde aproximadamente sustentado en los datos y análisis mostrados
al 76 % del carbono orgánico total presente en este informe de laboratorio.
en la muestra, ya que solo dicho porcentaje
es el que se oxida12.
Por esta razón, se calculó el porcentaje de 5. Bibliografía
rendimiento experimental en la lactosa
(92.4%) con el fin de compararlo con el [1] Gelman, F.; Binstock, R.;
Halicz, L. Application Of The
rendimiento reportado. A partir de esto, se
Walkley–Black Titration For
pudo observar que el porcentaje de carbono
The Organic Carbon
orgánico recuperado experimentalmente fue Quantification In Organic Rich
superior al reportado en la literatura, Sedimentary
demostrando así la viabilidad del método. En Rocks. Fuel 2012, 96, 608-610.
muchas ocasiones, se utiliza un factor de [2] De la Rosa, J.; Knicker, H.;
corrección de (1.32), con el fin de expresar López-Capel, E.; Manning, D.;
los resultados en porcentaje de carbono González-Perez, J.; González-
orgánico total13. Vila, F. Direct Detection Of
Para finalizar, es importante señalar que la Black Carbon In Soils By Py-
determinación de carbono orgánico por el GC/MS, Carbon-13 NMR
método de Walkley-Black también puede Spectroscopy And
realizar mediante un análisis volumétrico. Thermogravimetric
En este, el contenido de carbono orgánico se Techniques. Soil Science
determina mediante la titulación del ion Society of America
dicromato en exceso con sulfato ferroso Journal 2008, 72 (1), 258-267.
como agente titulante13. Sin embargo, en la [3] Rojas, G., Del Pilar, M. Práctica
práctica se empleó la técnica instrumental de 3 Determinación de Carbono
espectrofotometría, pues de esa forma se total por el método de Walkley
reduce el consumo de reactivos al no Black. Universidad Icesi, Cali,
requerir de la titulación3. 2020.
[4] Walkley A and Black I A 1934
4. Conclusiones An examination of the
Degtjareff method for
En conclusión, la implementación de la
determining soil organic matter
técnica instrumental Walkley-Black permite
and a proposed modification of
la cuantificación de carbono orgánico en
the chromic acid titration
muestras de materia orgánico (metilcelulosa
method. Soil Sci. 37, 29–38.
y lactosa anhidra) específicamente. Lo
[5] Sahrawat, K. Simple
anterior, gracias al principio físico aludido Modification Of The Walkley-
en las primeras instancias del presente
Black Method For
informe (Ley de Beer-Lambert). Así, el Simultaneous Determination Of
entendimiento de dicho fenómeno
Organic Carbon And Potentially
contribuye significativamente en la
Mineralizable Nitrogen In
determinación analítica mencionada,
Tropical Rice Soils. Plant and
empleando una curva de calibración para
Soil 1982, 69 (1), 73-77.
dicho proceso.
[6] Sahrawat, K. Assay Of Nitrogen
De la misma manera, es de gran relevancia Supplying Capacity Of Tropical
el uso de este método instrumental gracias al Rice Soils. Plant and
alto impacto agroindustrial, ambiental y Soil 1982, 65 (1), 111-121.
pecuario. Esto, posible de igual medida a la [7] Food and Agriculture
adaptación del método a espectrofotometría Organization of the United
en el rango visible del espectro Nations. Standard operating
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procedure for soil organic Tropical Rice Soils. Plant and
carbon Walkley-Black method Soil 1982, 69 (1), 73-77.
Titration and colorimetric
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[8] Aguirre, A.; Rodríguez, F.;
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Modification Of The Walkley-
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Simultaneous Determination Of
Organic Carbon And Potentially
Mineralizable Nitrogen In
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