Determinación de la Curva Espectral y Cuantificación de

Fe(II) por Espectroscopía Visible

Lina María Gómez Molina,1 Kevin Cuero Montalvo1
[Link] Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Departamento de Ciencias Químicas
Septiembre 10 de 2020.

Resumen
El presente informe, permite elaborar la respectiva curva de calibración de la concentración de Fe
(II) con respecto a la absorbancia, empleando la técnica instrumental de espectroscopía en el rango
visible del espectro electromagnético. Asimismo, la cuantificación de este analito metálico y en
una muestra problema de jarabe de sulfato ferroso, en términos de ppm y porcentaje peso-volumen
de sulfato ferroso respectivamente, empleando los respectivos cálculos estequiométricos.

1. Introducción determinar las concentraciones de analito

basados en la absorbancia detectada por el
La espectrofotometría es una técnica espectrofotómetro.
analítica experimental empleada para la
caracterización y cuantificación de Así, el interés por la espectrofotometría se
moléculas1. Este método se basa en las ha acrecentado en los últimos años gracias a
interacciones entre la radiación su precisión, sensibilidad y aplicabilidad a
electromagnética y la materia, en donde el moléculas de distinta naturaleza y estado de
instrumento mide la cantidad de energía agregación4. Ello le ha permitido convertirse
radiante absorbida por la muestra en un en una técnica valiosa en diversas industrias
rango de longitudes de onda determinado como la química, biológica, médica,
(absorbancia)2. La cuantificación de la farmacéutica, agrícola y ambiental1. Sin
muestra se rige mediante la Ley de Beer- embargo, es importante destacar su
Lambert, la cual establece que la importancia en el proceso de control de
absorbancia de un analito se puede calidad en la fabricación de productos
relacionar cuantitativamente con su farmacéuticos6. De esta forma, el análisis
concentración en solución, donde estas dos cualitativo y cuantitativo arrojado por las
variables guardan una relación directamente técnicas espectrofotométricas permiten
proporcional3. Mientras que, la determinar los principios activos presentes
caracterización de la muestra es posible en los distintos medicamentos y detectar las
gracias a los espectros de absorción trazas de impurezas remanentes, con el fin
característicos de cada molécula, atribuidos de garantizar su óptima acción
a las diferencias exhibidas en las estructuras farmacológica y prevenir los efectos
electrónicas de estas4. adversos que podría tener una composición
imprecisa y contaminada sobre el
Es importante señalar que en esta técnica se
organismo7.
emplea una curva de calibración, la cual es
una curva de referencia construida con Teniendo en cuenta lo anterior, el presente
cantidades conocidas de analito (patrón o trabajo tiene como objetivo determinar y
estándar) empleada para determinar la cuantificar la cantidad de hierro (II) en una
cantidad de esta sustancia presente en una muestra de jarabe de sulfato ferroso por
muestra incógnita5. En este caso, la curva de espectrofotometría, mediante la
calibración se elabora con el fin de construcción de la curva de calibración

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(Concentración Fe2+ vs Absorbancia) y la Con los datos reportados en la Tabla 1, se
obtención de su respectiva ecuación de la procede a realizar la correspondiente curva
recta. de calibración de la variable de respuesta
analítica (absorbancia) con respecto a la
2. Resultados y Cálculos
concentración de Fe. Para lo anterior, se
2.1. Preparación del complejo Fe2+ (o-
emplea un ajuste de mínimos cuadrados. La
fenantrolina) Figura 1 ilustra lo mencionado.
En primera instancia, se prepara una
solución estándar de Fe (II), cuya Absorbancia vs Concentración Fe (II)
composición es 0.0087g de 0,8
FeSO4(NH4)2· 𝑆𝑂4 ·6H2O en 25 mL (también 0,7

Absorbancia (nm)
conocida como la sal de Mohr). Lo anterior, 0,6
en aras de reproducir seis patrones del 0,5
respectivo analito. Así, el correspondiente 0,4
cálculo estequiométrico para la solución 0,3
estándar de Fe (II) se exhibe a continuación. 0,2
0,1
[𝐹𝑒𝑝𝑝𝑚 ] = 0.0087𝑔𝐹𝑒𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 )2 𝑆𝑂4 · 6𝐻2 𝑂 ∗ 0
1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 )2 𝑆𝑂4 ·6𝐻2 𝑂 0 1 2 3 4 5 6
392.13𝑔𝐹𝑒𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 )2 𝑆𝑂4 ·6𝐻2 𝑂
∗
1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒 55.845𝑔𝐹𝑒 1000𝑚𝑔𝐹𝑒
Concentración de hierro (ppm)
∗ ∗ ∗
1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 )2 𝑆𝑂4 ·6𝐻2 𝑂 1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒 1𝑔𝐹𝑒
1 Figura 1. Curva de calibración para el analito.
= 49.56𝑝𝑝𝑚 (1)
0.025𝐿
Así, el arreglo de mínimos cuadrados arroja
El resultado (1) constituye la concentración la siguiente función matemática con su
de la “solución madre”. En segunda respectivo coeficiente de correlación.
instancia, se reporta la muestra de cálculo
para la dilución de los seis patrones en 50mL 𝐴𝑏𝑜𝑠𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 = 0.1342[𝐹𝑒𝑝𝑝𝑚 ] + 0.003 (4)
a partir del resultado (1), teniendo en cuenta 𝑅𝟐 = 0.9944 (5)
que se toman 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL de la
solución madre respectivamente. 2.2. Cuantificación de la muestra de
hierro (Jarabe de Sulfato Ferroso)
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 (2)
(49.56𝑝𝑝𝑚)(1𝑚𝐿) En este orden de ideas, se emplea un factor
𝐶𝑝1 = 50𝑚𝐿
= 0.99120𝑝𝑝𝑚 (3) de dilución para determinar la concentración
analítica de Fe. Para lo anterior, se mide la
Así, el proceso exhibido en (2) y (3) se aplica
absorbancia de esta, cuyo valor corresponde
para el resto de los patrones. En tercera
a 0.49 unidades de absorbancia. Para ello, se
instancia, la Tabla 1 expone las absorbancias
emplea (4) de la siguiente manera.
medidas por el espectrofotómetro para los
patrones mencionados con anterioridad. 0.49−0.003
[𝐹𝑒𝑝𝑝𝑚 ] = = 3.63𝑝𝑝𝑚 (6)
0.1342
Tabla 1. Recopilación de datos obtenidos
experimentalmente por el espectrofotómetro para
Así, la concentración en %p/v del analito en
los 5 patrones con sus concentraciones. una muestra problema de jarabe de sulfato
ferroso, en términos de 𝐹𝑒𝑆𝑂4 es la
Patrón* [𝐅𝐞𝐩𝐩𝐦 ] Absorbancia siguiente:
(λmax, nm)
3.63𝑚𝑔𝐹𝑒 2.0𝑚𝐿 100𝑚𝐿
1 0.99120 0.15
𝐿
∗ 0.1𝑚𝐿 ∗ 1𝑚𝐿
= 7.26 ∗ 103 𝑚𝑔𝐹𝑒/𝐿
2 1.9824 0.25 (7)
3 2.9736 0.41
𝑝(𝐹𝑒𝑆𝑂4 ) 𝑚𝑔𝐹𝑒 1𝑔𝐹𝑒
4 3.9648 0.52 % = 7.26 ∗ 103 ∗ ∗
𝑣 𝐿 1000𝑚𝑔𝐹𝑒
5 4.9560 0.68 1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒 1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒𝑆𝑂4 151.9𝑔𝐹𝑒𝑆𝑂4 1
∗ ∗ ∗ ∗
*No se reporta el patrón de volumen 0 mL de la 55.845𝑔𝐹𝑒 1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒 1𝑚𝑜𝑙𝐹𝑒𝑆𝑂4 100𝑚𝐿
solución madre. Corresponde al blanco. 100 = 19.75%𝑝/𝑣 (8)

pág. 2
Con lo anterior, se calcula el porcentaje de libres de los nitrógenos del compuesto
error relativo de (8), teniendo presente que el orgánico y el hierro (II).
valor teórico reportado es 20.00%p/v de
𝐹𝑒𝑆𝑂4 8.
19.75−20.00
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 = −1.28% (9)
20.00

Por último, los resultados obtenidos en el

presente ítem se resumen en la Tabla 2.
Tabla 2. Recopilación de datos obtenidos en la
cuantificación de hierro en la muestra problema.

Soluci Absorban Concentrac %Err Figura 2. Reacción de coordinación balanceada

ón cia (nm) ión (%p/v) or entre la O – fenantrolina y el hierro (II).

Muestr 0.49 19.75 -1.28 Es pertinente señalar que esta reacción

a química es específica para el 𝐹𝑒 2+ . Por
consiguiente, para asegurar que todo el
hierro presente en la muestra se encuentre
3. Análisis de resultados deficiente en 2 electrones, se debe añadir un
exceso de clorhidrato de hidroxilamina
Como se mencionó anteriormente, las
previo a la adición de la solución de O–
técnicas espectrofotométricas se basan en el
fenantrolina. Este compuesto actúa como
principio de absorción de la radiación
agente reductor y permite reducir el 𝐹𝑒 3+ a
electromagnética2. Para este desarrollo
𝐹𝑒 2+ , según la ecuación 1010.
experimental, se busca cuantificar el Fe (II)
presente en una muestra de jarabe de sulfato 4𝐹𝑒 3+ + 2𝑁𝐻2 𝑂𝐻 → 4𝐹𝑒 2+ + 𝑁2 𝑂 + 4𝐻3 𝑂+ +
ferroso mediante su absorbancia en el 𝐻2 𝑂 (10)
espectro del visible9. Por lo tanto, para
De igual forma, es importante recordar que
garantizar la obtención de lecturas óptimas a la reacción de coordinación ocurre en un
través del espectrofotómetro, se hace intervalo de pH comprendido entre 2 y 910.
necesario que la solución patrón y la muestra De manera que, para mantener el pH de la
a analizar presenten una absorción
solución constante, se adiciona acetato de
considerable en este rango del espectro
sodio y ácido clorhídrico, a partir de los
electromagnético.
cuales se obtiene la solución amortiguadora
Tanto en la solución patrón como en la con el 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻 como ácido y el
muestra, el hierro presente es el encargado 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎 como base conjugada.
de conferirles la tonalidad rojiza que las
Una vez preparados el blanco y las cinco
caracteriza. Sin embargo, este elemento
soluciones patrón de hierro, se procedió a
metálico absorbe muy poca luz en el visible
realizar un barrido espectral para determinar
y la absorbancia detectada por el
la longitud de onda de máxima absorbancia.
espectrofotómetro sería mínima dificultando
Sin embargo, se debe recordar que previo a
así su cuantificación. De esta forma, se
la lectura de los estándares por parte del
requiere la formación de un complejo
espectrofotómetro, se requiere determinar la
coloreado (rojo -anaranjado) que maximice
absorbancia del blanco y presionar el botón
la absorción; el cual se obtiene mediante la
de auto cero. Esto es de suma importancia,
reacción de coordinación entre la O-
pues en las lecturas posteriores se pueden
fenantrolina y el Fe (II), como se ilustra en
obtener los valores de absorbancia
la figura 210. Esta reacción tiene lugar
correspondientes únicamente al hierro
gracias a la formación de enlaces covalentes
(absorbancia corregida), al restar la
coordinados entre los pares de electrones
absorción proveniente de la matriz.

pág. 3
Adicionalmente, las disoluciones blanco hierro (II) (7.26 ∗ 103 𝑚𝑔𝐹𝑒/𝐿) y sulfato
permiten medir la respuesta del ferroso (19.75%𝑝/𝑣) en la muestra, donde
procedimiento analítico a las impurezas que esta última se comparó con la respectiva
existan en el analito.8 concentración teórica (20.00%𝑝/𝑣)8,
obteniendo así un porcentaje de error de -
Así, a partir de los valores de absorbancia
1.28%. El signo negativo indica que el valor
arrojados por el instrumento para cada experimental del sulfato ferroso está por
alícuota de la solución estándar, se elaboró debajo del correspondiente valor teórico.
la correspondiente curva de calibración
empleando el método de mínimos Teniendo en cuenta lo anterior, se percibe
cuadrados, de modo que se obtuviera una que el porcentaje de error obtenido es
recta que se ajustara a los datos mínimo, lo que demuestra la exactitud entre
experimentales (ver figura 1). La ecuación el contenido de sulfato ferroso del jarabe
de la recta obtenida se encuentra plasmada obtenido experimentalmente y el reportado
en la ecuación (4). en la etiqueta del producto. Sin embargo, es
pertinente analizar los factores que pudieron
Teniendo en cuenta la ecuación de la recta se
haber contribuido a la desviación obtenida
puede observar que la variable
por poco significativa que sea. Entre estos
independiente es la concentración de hierro factores se encuentran los errores
(II), mientras que la variable dependiente instrumentales. Para el caso del
corresponde a la absorbancia. Esto responde espectrofotómetro, se pudo presentar un
a la Ley de Beer Lambert, pues respalda la error de lectura inherente al detector debido
relación directamente proporcional entre
a la poca cantidad de analito empleado,
estas 2 variables, la cual se ve reflejada en el
resultando así en una poca absorbancia. Esto
comportamiento de la curva de calibración,
se debe a que casi toda la totalidad de la
en donde un incremento en la concentración
potencia incidente atraviesa la muestra o
de 𝐹𝑒 2+ viene acompañado de un aumento llega al detector, el cual se encuentra en la
en la absorbancia del analito, concordando zona de saturación y no aprecia bien
así con la teoría4. pequeñas variaciones en la absorción.
En cuanto al coeficiente de correlación (5), Adicionalmente, se pudo presentar la
se puede evidenciar el elevado grado de interferencia de señales debido a las
covariación existente entre la concentración interacciones exhibidas con otras
y la absorbancia del analito. Esto, debido a absorciones, pues los espectrofotómetros no
que se obtuvo un coeficiente muy cercano a pueden seleccionar una radiación de una
1 (0.9944), lo que indica la proximidad a una única longitud de onda, sino un rango12.
relación perfecta positiva entre las variables. En cuanto a los errores químicos, se pudo
Lo anterior, se evidencia en la pendiente presentar la ionización parcial del analito
positiva y en la tendencia relativamente
hacia 𝐹𝑒 2+ , donde esta especie ionizada
lineal presentadas en la curva de calibración; cuenta con una absorbancia diferente que la
tendencia que responde a la
del complejo coordinado coloreado formado
proporcionalidad expuesta entre las entre el hierro y la O-fenantrolina, discutida
variables analizadas (Ley de Beer Lambert), al inicio de esta sección10.
aspecto discutido en el apartado anterior11.
Por último, se encuentra la incidencia de
Posteriormente, siguiendo los mismos pasos errores sistemáticos y aleatorios. Al igual
de los estándares, se preparó la muestra de
que los asociados al analista, como los
jarabe de sulfato ferroso para su análisis con
errores al momento preparar las distintas
el espectrofotómetro. De esta forma y según
disoluciones empleadas en el desarrollo
lo indicado por el docente, se obtuvo una
experimental, al manejar el
absorbancia de 0.498. A partir de esta, se
espectrofotómetro y al realizar la lectura de
calculó la concentración experimental de
los datos arrojados por este.

pág. 4
 4. Conclusiones (UV/VIS)”.
[Link]
En suma, la presente práctica contribuye de
0.11799/68318/secme-
manera significativa a la cuantificación del
[Link]?sequence=1&isAllowed=y
analito Fe (II) en una muestra problema de
(accessed Sep 9, 2020).
jarabe de sulfato ferroso. Lo anterior, gracias
a la técnica instrumental de espectroscopía [2] Fundamentos de Espectrofotometría.
visible, empleando por ende un [Link]
espectrofotómetro que opera esencialmente /PRACTICA6ESPECTROFOTOMETRIA_
en el rango visible del espectro [Link] (accessed Sep 9, 2020).
electromagnético.
[3] Díaz, N.; Ruiz, A.; Fernández, E.;
De la misma forma, son empleadas Galván, A.; Jorrín, J.; Peinado, J.; Toribio,
transformaciones químicas con la finalidad F.; Túnez, I.
de optimizar la determinación analítica [Link]
instrumental, tales como el control del pH en mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.p
la solución mediante búferes, generación de df (accessed Sep 9, 2020).
compuestos químicos coordinativos
[4] Práctica 4 Epsectrofotometría.
coloreados como el Fe (II) en presencia de la
[Link]
O-fenantrolina (colorimetría) y reacciones
ocencia/quimbiotec/[Link]
de tipo oxido-reducción particularmente la
(accessed Sep 10, 2020).
reducción del Fe (III) a Fe (II) por acción del
clorhidrato de hidroxilamina. [5] Análisis químico, medir es comparar.
[Link]
En este sentido, es de gran importancia el
content/uploads/Analisis-quimico-medir-es-
conocimiento del fenómeno físico del
instrumento, para así hacer uso de este en la [Link] (accessed Sep 9, 2020).
presente determinación química. En este [6] Aplicación de la espectroscopia óptica al
contexto, la ley de Beer-Lmabert constituye control de calidad de los productos
el principio físico del espectrofotómetro farmacéuticos.
empleado en esta práctica. Asimismo, dicho [Link]
principio y en conjunto con técnicas espectroscopia-optica-control-calidad-
experimentales permite la producción de la productos-farmaceuticos (accessed Sep 9,
curva de calibración (Fig. 1) con su 2020).
correspondiente ecuación de la recta (4),
para así cuantificar el analito en cuestión. [7] Germer, T.; Zwinkels, J.; Tsai,
B. Spectrophotometry: accurate
Asimismo, se exhiben los cálculos y datos measurement of optical properties of
experimentales pertinentes con su respectivo materials; 2014; pp 409-456.
porcentaje de error relativo (9), en donde se
tiene una buena exactitud en el momento de [8] Rojas, G., Del Pilar, M. Práctica 1
realizar la cuantificación. Por último, se Cuantificación de Fe (II) por espectroscopía
recomienda que, a la hora de emplear esta visible; Universidad Icesi: Cali, 2020.
técnica, la concentración de la muestra no [9] May, M.; Fish, W. The Uv And Visible
sea en exceso concentrada ni en exceso Spectral Properties Of Ferritin. Archives of
diluida, con el fin de no presentar mayores Biochemistry and Biophysics 1978, 190 (2),
interferencias instrumentales. 720-725 [Link]
9861(78)90332-6 (accessed Sep 9, 2020).

5. Bibliografía [10] Khalil, M.; Shahat, A.; Radwan, A.; El-

Shahat, M. Colorimetric determination of Cu
[1] García, M. “Apuntes para Espectrometría (II) ions in biological samples using metal-
de Radiación Ultravioleta Visible organic framework as scaffold.

pág. 5
[Link]
7.00014-3 (accessed Sep 9, 2020).
[11] COEFICIENTE DE CORRELACIÓN
LINEAL DE PEARSON.
[Link]
[Link] (accessed Sep 9, 2020).
[12] Apuntes de espectrofotometría.
[Link]
al/bioquimica%20clinica/apuntes%20de%2
[Link] (accessed Sep 9,
2020).

pág. 6