Aislamiento de bacterias Gram Positivas a partir de
un exudado faringeo
Módulo: Prevención y control de la propagación
microbiana
Profesora: Dra. Ana Laura Esquivel Campos
Grupo: BJ51Q
Integrantes:
Castillo Gabriela
Mendoza Peralta Miguel Angel
Vazquez Quiroz Juan Siad
Equipo: 4
Introducción
En las últimas décadas se han hecho importantes avances en el estudio de
bacterias, lográndose una identificación bioquímica de muchas de las fracciones
subcelulares, estos avances han permitido ubicar definitivamente a las bacterias en
el reino Procariota. El conocimiento en profundidad de las diferentes estructuras y
su composición ha permitido comprender, cómo muchas bacterias se relacionan con
el hombre, ya sea cuando lo hacen como integrantes de la flora normal o cuando se
comportan como agresoras para el mismo. De gran relevancia han sido también los
avances en el estudio del material genético bacteriano cromosómico y plasmídico
que han posibilitado el desarrollo de técnicas con aplicaciones en investigación y
diagnóstico que han revolucionado las últimas décadas.
Es justo de todos modos señalar que a pesar de todas estas innovaciones la
observación al microscopio óptico y la reacción de las bacterias ante las diferentes
coloraciones sigue siendo de fundamental importancia en la taxonomía e
identificación bacteriana. Por tal motivo, las bacterias se estudian por métodos que
combinan técnicas de resurrección o preenriquecimiento, aislamiento en medios de
cultivos comunes o selectivos, e identificación a través de pruebas bioquímicas.
Estos análisis permiten, en la mayoría de los casos, determinar el género bacteriano
involucrado y algunas especies. Sin embargo, ciertos organismos muy próximos
filogenéticamente precisan de técnicas complejas de biología molecular, para poder
distinguir uno y otro.
Métodos fenotípicos
Actualmente, la identificación bacteriana se realiza por medio de métodos
convencionales basados en las características fenotípicas, puesto que su
realización y coste los hace más asequibles. Los esquemas tradicionales de
identificación fenotípica bacteriana se basan en las características «observables» de
las bacterias, como su morfología, desarrollo, y propiedades bioquímicas y
metabólicas. El cultivo, cuando es factible, continúa siendo el método diagnóstico de
elección; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su identificación, el
estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la aplicación de marcadores
epidemiológicos. En el cultivo es esencial la correcta elección del medio de
crecimiento y las condiciones de incubación.
En el presente reporte se aisló e identificó bacterias de una muestra de exudado
faríngeo
Objetivo general
● Aislamiento y reconocimiento de bacterias gram positivas a partir de una
muestra de exudado faríngeo.
Objetivo particulares
● Aislar la muestra en diferentes medios de cultivo de uso general diferencial y
selectivo.
● Identificar colonias representativas de cada medio de cultivo.
● Evaluar la resistencia a antibióticos de los microorganismos gram positivos.
● Evaluar la actividad metabólica de los microorganismos.
Materiales y métodos
Cada integrante del equipo realizó un exudado faringeo y posterior siembra en cada
uno de sus medios.
Preparación de los medios de cultivo
Para el cultivo de la muestra se utilizaron los siguientes medios, preparados según
la etiqueta de cada uno de ellos.
Cantidad Medio de cultivo
3 cajas con 22 ml Agar gelosa sangre
3 cajas con 22 ml Agar Sal Manitol
3 cajas con 22 ml Agar S-110
3 cajas con 22 ml Agar Mueller Hinton (Antibiograma)
3 tubos con 3 ml Caldo BHI
Tabla 1. Medios de cultivo para el aislamiento de un exudado faringeo.
Toma de muestra
Prender los mecheros para tener una zona estéril; con la ayuda
de un hisopo estéril se procede a tomar la muestra, raspando
las paredes de la faringe (ver figura 1) para su posterior
siembra.
Figura 1. Procedimiento para realizar un exudado de faringe.
Cultivo de la muestra
Una vez obtenida la muestra sembrar por estría cruzada (figura
2) en: Agar Gelosa Sangre,Agar Sal Manitol, Agar S-110 e
incubar 37°C 24h.
Figura 2. Método estría cruzada
Con el mismo hisopo con el que se tomó la muestra colocarlo
en el tubo con caldo BHI e incubar a 37°C 24h
Descripción morfología colonial
Una vez incubada la muestra se procede a realizar la descripción macroscópica de
cada uno de los medios de cultivo con la ayuda de la figura 3.
Figura 3. Características para colonias
Figura 4. Observación macroscópica de colonias
Tinción Gram
Preparación del frotis
Prender el mechero, colocar una gota de agua estéril en el centro de un
portaobjetos, con un asa estéril tomar una pequeña porción de una cepa obtenida
de agar sal manitol y esparcir cuidadosamente, fijar con calor hasta secar (ver figura
5).
Proceder a la tinción gram y leer a 100x con aceite de inmersión
Figura 5. Pasos a realizar para una función de Gram
Prueba Catalasa
Colocar con un asa estéril en un portaobjetos una pequeña porción de muestra
obtenida de Agar Sal Manitol y agregar una gota de H2O2, observar y anotar
resultados.
Prueba Coagulasa
En caso de tener una prueba catalasa positiva proceder a realizar coagulasa.
Antibiogramas
Con las medidas de seguridad utilizadas anteriormente
sembrar por estría cruzada en el Agar Mueller Hinton
colonias sospechosas de S. aureus, colocar sensidiscos e
incubar a 37°C/ 24h. Leer antibiograma midiendo el halo
de inhibición de crecimiento.
Tabla 2. Halo de inhibición de crecimiento microbiano
Diagrama de flujo
Resultados y discusión
Descripción macroscópica
Muestra 1
Solo se observó crecimiento en agar Gelosa Sangre, posterior a esto se resembró a
partir del caldo BHI; después de la la incubación se observa ausencia de
crecimiento en agar S-110 y sal manitol; esto podría deberse a que los medios
utilizados son selectivos para staphylococcus a diferencia de Agar Gelosa sangre
que es un medio enriquecido donde podría crecer streptococcus por lo que existe la
primera sospecha de tener solamente streptococcus.
A continuación se muestra la hoja de seguridad de cada uno de los medios
utilizados donde se observa el crecimiento de las cepas características.
Hoja de seguridad de Agar S-110
Hoja de seguridad de Agar sal-manitol
Descripción macroscópica colonial de la
Muestra 1 (Gaby).
Agar Gelosa Sangre
Forma Puntiforme
Elevación Convexa
Margen Entero
Superficie Cremosa
Pigmentació Blanquecina
n
Hemólisis Beta-Hemólisis
Tabla 3. Morfología macroscópica del Agar gelosa sangre
Tinción Gram
Teniendo la sospecha de tener estreptococos se procede a realizar la descripción
microscópica por medio de la tinción gram donde se confirma la presencia de
Estreptococos gram positivos.
Figura 6. Observación microscópica presencia de estreptococos
Prueba Catalasa
Catalasa negativa, lo cual confirma que se trata de estreptococos, por lo que no se
procede a realizar coagulasa.
Miguel
Morfología macroscópica
Morfología macroscópica
Medio Forma Elevación Margen Superficie Color
Sal Circular Plana Entero Cremosa Blanco
manitol
Agar Puntiforme Convexa Entero Cremosa Color
sangre blanco
Hemólisis
gamma
S-110 Circular Elevada Entero Cremosa Blanco
Tabla 4. Características de las colonias de los agares utilizados
Morfología microscópica
Figura 7. Presencia de estreptococos
Teniendo con tinción gram donde se confirma la presencia de Estreptococos gram
positivos.
Prueba de catalasa
En la prueba realizada se obtuvo un resultado positivo por lo que se procedió a
realizar la prueba de coagulasa para la presencia de [Link].
Prueba de coagulasa
Se tiene como resultado negativo interpretando que no hay presencia de [Link].
Said
Morfología macroscópica
En la tabla 5 se muestran los resultados de la morfología macroscópica de los
agares utilizados.
Morfología macroscópica
Medio Forma Elevación Margen Superficie Color
Sal Circulares Elevada Entero Cremosa Blanco
manitol
Agar Puntiforme Convexa Entero Cremosa Color
sangre blanco
Hemólisis
gamma
S-110 Circulares Convexa Entero Cremosa Blanco
Tabla 5. Características de las colonias de agares empleados en la práctica
Morfología microscópica
De acuerdo con la tinción de gram realizada se determinó que las bacterias
presentes son cocos gram positivos (ver figura 8).
Figura 8. Observación microscópica presencia de cocos gram +.
Prueba de catalasa
De acuerdo con la prueba realizada se determinó un resultado positivo por lo que se
procedió a realizar la prueba de coagulasa para la presencia de [Link].
Prueba de coagulasa
De acuerdo con la prueba realizada esta dio como resultado negativo interpretando
que no hay presencia de [Link] (ver figura 9).
Figura 9. Resultado de la prueba de coagulasa
Antibiograma
En la tabla 6 se muestran los resultados de la prueba de antibiograma.
Antibiótico Muestra 1 (mm) Muestra 2 (mm) Muestra 3 (mm)
Gaby Miguel Said
Amoxicilina 20 26 24
Ciprofloxacino 18 17 18
Imipenem 30 0 25
Oxacilina 13 15 16
Penicilina 23 24 24
Tabla 6. Resultados de antibiogramas
Se puede observar que las tres muestras son sensibles a penicilina, amoxicilina;
también medianamente a ciprofloxacino y oxacilina, cabe resaltar que una presentó
resistencia a imipenem
Conclusión
Al término de la práctica se observa que aunque existen distintos tipos de
microorganismos presentes en el organismo humano, conviviendo de manera
simbiótica, es posible determinar cuales en su mayoria estan presentes en las
distintas partes del cuerpo; si bien es conocido que en la faringe abundan en su
mayoría bacterias Gram positivas que pueden o no causar alguna patología, se
descartó la presencia de Staphylococcus aureus en las muestras cultivadas; sin
embargo hay presencia de otra especie de microorganismo. Es indispensable
conocer a profundidad las diferentes estructuras y composición de los
microorganismos ya que este estudio ha permitido comprender, cómo muchas
bacterias se relacionan con el hombre, ya sea cuando lo hacen como integrantes de
la flora normal o cuando se comportan como agresoras para el mismo
En la actualidad existen muchas técnicas que permiten clasificar microorganismos
en especie, si bien justo de todos modos señalar que a pesar de todas estas
innovaciones la observación al microscopio óptico y la reacción de las bacterias ante
las diferentes coloraciones sigue siendo de fundamental importancia en la
taxonomía e identificación bacteriana.
Referencias
- Alarcón, T., BAQUERO, M., DOMINGO, D., LÓPEZBREA, M., & ROYO, G. (2004).
Procedimientos en Microbiología Clínica Recomendaciones de la Sociedad
Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica Editores: Emilia
Cercenado y Rafael Cantón 17. Diagnóstico microbiológico de la infección por
Helicobacter pylori.
-Pírez, M. C. (2014). Morfología y estructura bacteriana. 1-5.
-Carrillo, L., Audisio, M. C., & Bejarano, N. (2007). Manual de Microbiología de los
Alimentos. Jujuy, 10, 102-116.
