UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA ZOOTECNIA
“Año de la universalización de la salud”
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA ZOOTECNIA
FORMULARIO:
AISLAMIENTO Y CUANTIFICACIÓN DEL GLUCÓGENO
HEPÁTICO
CURSO: BIOQUÍMICA LABORATORIO
DOCENTE: JESSICA MARIN VILLA
INTEGRANTES:
CUEVA ARANYA CRISTIAN 150573
CUSCO – PERU
2020
1. OBJETIVO:
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
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“Año de la universalización de la salud”
Determinar y cuantificar los niveles de glucógeno hepático de los pollos durante los estados de
ayuno y con dieta balanceada
2. INTRODUCCIÓN:
El glucógeno, sirve de reserva de carbohidratos en el organismo de los animales. Razón por la
cual es considerado como el almidón de las células animales. Su contenido varía en un intervalo
de 0.5 – 2.0 % en el músculo y en el hígado hasta en un 60% del contenido. El glucógeno es el
equivalente en el organismo animal, al almidón de las plantas; se almacenan principalmente,
bajo las formas de partículas libres en el citoplasma se trata de un polisacárido ramificado
compuesto de moléculas de alfa-D-glucosa unidas por enlaces 1,4 salvo en los puntos de
ramificación en donde el enlace se establece entre carbonos 1,6. Por sus numerosas
ramificaciones la molécula tiene forma de arbusto. El peso molecular del glucógeno varia
ampliamente según el grado de ramificación, y el tamaño global. En promedio se encuentra
entre 2 y 5 millones.
3. FUNDAMENTO:
El tejido hepático en presencia de una hidrólisis alcalina destruye a las proteínas y el glucógeno
queda intacto. El glucógeno es precipitado por su baja solubilidad con el alcohol, luego se
suspende el glucógeno y se cuantifica expresado en mg de glucosa por gramo de tejido hepático
(previa hidrólisis ácida con ácido sulfúrico). El Ácido Sulfúrico del reactivo Antrona hidroliza al
glucógeno en unidades de glucosa, la cual es convertida en Hidroximetil Furfural por el mismo
ácido y reacciona con Antrona para dar un compuesto coloreado.
4. MATERIALES
tubos de ensayo
pipetas
centrifuga
gradilla
varilla de vidrio
centrifuga
fotocolorímetro
5. REACTIVOS
Solución de Hidróxido de Potasio ( 30 % de KOH)
Alcohol Etílico ( 95% de CH 3 CH 2 OH)
Estándar de Glucosa 5mg/100mL
Reactivo Antrona al 0.2% en Ácido Sulfúrico ( H 2 SO 4 ) QP
6. MUETRA
Hígado de 2 pollos (uno de los pollos con alimentación normal y el otro sometido a ayuno durante
24 horas)
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7. PROCEDIMIENTO
a) Se toman 2 pollos, uno en ayunas, otro en estado normal de alimentación, se le sacrifica y se les extrae el
hígado rápidamente y se coloca en baño de hielo.
b) Separar y pesar 0.5 a 1.0 g. de cada hígado picar finamente, trasvasar a un homogenizador con 4 mL de
solución de hidróxido de potasio al 30%, y llevar a baño de agua hirviente hasta hidrólisis de los tejidos
durante 30 minutos.
c) Enfriar a chorro de agua fría y agregar 7 mL de etanol absoluto refrigerado para precipitar.
d) Centrifugar a 3.000 RPM x 10 minutos.
e) Decantar el sobrenadante y disolver el residuo (glucógeno) con 100 mL de agua destilada.
f) ⮚ Disponer 6 tubos de ensayo y proceder de acuerdo al siguiente cuadro.
1 Blanco 2 ayunas 3 alimento 4 estándar 5 estándar 6 estándar
Glucógeno aislado (ml) 0.50 0.50
Patron de glucose (ml) 0.50 1.00 1.50
Agua destilada (ml) 2.00 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50
React. De Antrona (ml) 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00
El reactivo de Antrona debe añadirse rápidamente, de tal manera que el chorro caiga en el centro del
tubo. Mezclar rápidamente, colocar los tubos en baño de agua hirviendo durante 10 minutos, enfriar y
leer la absorbancia a 620 nm en el fotocolorímetro.
8. CUESTIONARIO:
¿calcular la concentración de glucógeno en cada una de las experiencias (hígado de pollo con
alimentación normal y en ayunas) expréselos en mg de glucosa/ g de tejido hepático?
Estándar 1 0.50 ml 0.71 A
Estándar 2 1.00 ml 1.29 A
Estándar 3 1.50 ml 2.05 A
Glucógeno Aisl. ( pollito en ayunas) 0.52 A
Glucógeno Aisl. ( pollito alimentado) 1.50 A
¿escriba la estructura química del almidón y del glucógeno?
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FORMULARIO:
Determinacion de glucosa del suero
CURSO: BIOQUÍMICA LABORATORIO
DOCENTE: JESSICA MARIN VILLA
INTEGRANTES:
CUEVA ARANYA CRISTIAN 150573
CUSCO – PERU
1. OBJETIVO:
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La determinación de la glucosa en fluidos biológicos ha sido bien documentada. La prueba
de glucosa puede ser diagnosticada mente significativa en diabetes e hipoglucemia.
2. FUNDAMENTO:
La glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa a ácido gluconico hiperoxido de hidrogeno en
presencia de peroxidasa reacciona con el hidroxibenzoato y 4-aminoantipirina (PAP) para
producir un cromógeno de Quinoneimina rojo con un máximo de absorbancia a 505 nm.
La concentración de glucosa es directamente proporcional a la absorbancia del cromógeno
de
Quinoneimina a 505 nm.
3. MATRIALES
1 tubo de ensayo
1 pipeta de 20 microlitros
1 pipeta de 5ml
4. REACTIVOS
B-D-GLUCOSA + O2 + H2O
ACIDO D-GLUCONICO +H2O2
H2O2 + HIDROXIBENZOATO + 4 – AMINOANTIPIRINA ROJO + H2O
CROMOGENO QUINONEIMINA
La concentración de glucosa es directamente proporcional a la absorbancia del cromógeno
de
Quinoneimina a 505 nm.
REACTIVOS DE COLOR; Una solución contenido después de reconstitución 0.5125
mml/L de 4-antipirina, 1Ommol/L de p-hidroxibenzoato,>20.000 U/L de glucosa oxidasa,
>1000 U/L peroxidasa (Rabano Picante), buffer.
Estándar de glucosa:
Una solución acuosa conteniendo 90 mL/dl la glucosa.
5. PROCEDIMIENTO:
Recolectar la muestra; La muestra de suero sanguíneo debe ser colectada con
anticoagulante y ensayada rápidamente.
Preparar; El plasma fluorado para análisis de glucosa estable a 2-8 °C por 5 días.
Prepare el reactivo de trabajo de glucosa.
En tubos separados pipetee 20 microlitros del estándar o del suero del estándar o del
suero a ensayar.
Añada 2 mL de reactivo y mezcla.
Incube por 10 minutos a 37 °C, y determine la absorbancia del estándar (AS) y de cada
cero (A) a 505 nm. Contra blanco de reactivo.
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blanco estándar Muestra
Sol. Estándar ml 0.02
Muestra ml 0.02
Reactivo ml 2.00 2.00 2.00
Agua destilada 0.02
6. CÁLCULOS Y RESULTADOS
La glucosa se expresa en mg/dl o mmol/Litros.
Glucosa mg/dL = X concentración std glucosa mg/dl
A = absorbancia del problema
AS = absorbancia del estándar
VALORES ESPERADOS:
70 – 105 mg/dl
Estos valores son sugeridos. Se recomienda que cada laboratorio establezca el rango para
el área en que está localizada.
7. CUESTIONARIO
Calcular la concentración de glucosa en el suero problema en mg/L.
Compare estos valores experimentales con los valores referenciales.
Por qué es importante determinar la presencia de glucosa en la sangre.
El análisis de glucosa sanguínea proporciona información útil para el control de la
diabetes. Puede ayudarte con lo siguiente: Controlar el efecto de los medicamentos
para la diabetes sobre los niveles de glucosa sanguínea.
Cuáles son las funciones principales de la glucosa en el organismo.
La función principal de la glucosa es producir energía para el ser vivo y poder llevar a
cabo los procesos que ocurre en el cuerpo como: la digestión, multiplicación de células,
reparación de tejidos, entre otros. Asimismo, la glucosa es uno de los principales
productos de las fotosíntesis y combustible para la respiración celular.
Por qué otros métodos se puede determinar la glucosa en el suero sanguíneo.
1. Análisis de proteínas glicosiladas
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2. Péptido C
Absorbancia de Muestra A° 0.3980
Absorbancia de Estandar A° 0.3340
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FORMULARIO:
Cuantificación de colesterol total, lipoproteínas
LDL y HDL
CURSO: BIOQUÍMICA LABORATORIO
DOCENTE: JESSICA MARIN VILLA
INTEGRANTES:
CUEVA ARANYA CRISTIAN 150573
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1. OBJETIVO:
Cuantificar la cantidad del colesterol total determinado LDL y HDL en el suero sanguíneo, por el
método enzimático.
2. INTRODUCCION:
El colesterol es un lípido policíclico no saponificable que se encuentra en todos los animales. Forma parte
de la estructura de membranas celulares y es precursor de muchos compuestos como las hormonas,
vitamina D, etc.
Su estructura química presenta 4 anillos designados como A, B, C y D. y circula a través de la sangre
asociado a proteínas específicas formando complejos macromoleculares denominadas lipoproteínas. VLDL
(Very Low Density Lipoprotein), LDL (Low Density Lipoprotein) y HDL (High Density Lipoprotein) cada uno
con sus propiedades y papel metabólico diferentes.
3. FUNDAMENTO QUIMICO
lipasa
ESTERES DE COLESTEROL COLESTEROL + ACIDO GRASO
CHOP
COLESTEROL + O2 (g) 4-COLESTEN-3-ONA+H2O2
colesterol oxidasa
POD
2H2O2 + 4-AF + FENOL QUINONIMIA COLOREADA + 4 H2O
peroxidasa
4. PROCEDIMEINTO (PARA HDL COLESTEROL)
En un tubo medir 0.5 mL (500 µL) de muestra y agregar 50 µL de reactivo precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir ) durante 20 segundos y dejar 30-40 minutos en refrigerador (4-10 °C)
o 15 minutos en baño de agua a la misma temperatura ( no colocar en congelador)
Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m y usar el sobrenadante liquido como muestra
En tres tubos de fotocolorímetro marcados B,S y D colocar:
B S D
SOBRENADANTE 20ul
STANDARD 20ul
REACTIVO DE TRABAJO 2 ml 2 ml 2 ml
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ABDORVANCIA 505 NM
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 °C si se usa el reactivo de trabajo de colesterol enzimático AA/liquida o
15 minutos a 37 °C. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotómetro con filtro verde,
llevando a cero con el blanco.
CALCULO DE RESULTADOS:
HDL Colesterol (g/L) = D.O. desconocido x f
f = 0.762/S
Valores de referencia 0.40 - 0.60 g/L
5. PROCEDIMIENTO (para cuantificar de LDL colesterol)
En un tubo colocar 200 µL de muestra y 100 µL del reactivo precipitante
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundo y dejar 15 minutos en un baño de 20 – 25 °C.
Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m separar inmediatamente el sobrenadante
Usar el sobrenadante como muestra para el ensayo colorimétrico
En tres tubos de fotocolorímetro marcadas B,S y D colocar:
B S D
SOBRENADANTE 20ul
STANDARD 20ul
REACTIVO DE TRABAJO 2 ml 2 ml 2 ml
ABDORVANCIA 505 NM
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 °C si se usa el reactivo de trabajo de colesterol enzimático AA/liquida o 15
minutos a 37 °C. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotómetro con filtro verde, llevando a cero
con el blanco.
CALCULO DE RESULTADOS:
LDL Colesterol (g/L) = Colesterol total (*) – (D X f)
f = 0.624/S
(*) Valor obtenido con colestat enzimático AA/liquido.
Valores de referencia
The National Cholesterol Education Program provee los siguientes valores
de LDL colesterol:
Riesgo bajo o nulo: Menores a 1.29g /L
Riesgo moderado a elevado: Valores entre 1.30 – 1.89 g/L
Riesgo muy elevado: > 1.90 g/L
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CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL TOTAL, LDL Y HDL.
BLANCO STANDARD COLES. TOTAL HDL LDL
Standard - 20 µL - - -
[200 mg/dL]
Absorbancias 0 0.4121 0.3076 0.2494 0.1291
CUESTIONARIO.
1.- ¿Explique la importancia del colesterol en la sangre?
El colesterol es una molécula esencial que forma parte del grupo de los lípidos o grasas, de la membrana
de nuestras células y necesario para la formación de hormonas, metabolismo de la vitamina D,
imprescindible para la absorción de calcio y Acidos biliares
2.- En la cuantificación del colesterol que función cumplen las enzimas Lipasa, Colesterol
oxidasa y peroxidasa.
La cuantificación de colesterol y triglicéridos en suero es un procedimiento analítico básico en el
diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias. Altos niveles de
colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. En esta práctica se realizará la
determinación en suero de colesterol total, colesterol-HDL y triglicéridos.
3.- Explique las diferencias que existe en la función de las lipoproteínas VDLD, HDL Y LDL.
HDL LDL
DEFINICION Lipoproteina de alta densidad Lipoproteína de baja densidad
DENSIDAD (gr/ml) 1.063-1.210 1.019-1.063
Composición Lípidos totales: 40-48% Lípidos totales:75-80%
Proteínas: 52-60% Proteínas:20-25%
Colesterol 24-45% de lípidos totales
Diámetro 120-70 A 250 A
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