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Microbiológicos” Julio – Agosto de 2015. 1 de 37

INFORME DE VALIDACIÓN

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1. OBJETIVO
Validar los métodos de ensayos microbiológicos IE-19, IE-24, IE-25 empleados para controlar la calidad del agua
potable de acuerdo con los valores establecidos en el Decreto 1575 del 2007, a través de la resolución 2115.

En base a ello se ha de:

 Determinar de manera experimental de acuerdo a distintos lineamientos internacionalmente aceptados y para
las condiciones del LCCA, los parámetros de desempeño siguientes: Linealidad (proporcionalidad), Precisión,
Límite de Cuantificación, Veracidad, Recuperación, Especificidad, Sensibilidad e Incertidumbre de Medida. Y
compararlos, en los caso que aplique, con los correspondientes criterios de aceptación

Nota 1: En adelante se mencionará el término “validación” pero lo expuesto aplica igualmente a la expresión
“verificación” de los métodos de ensayo.

2. ALCANCE
La validación del método de ensayo abarca a la matriz agua potable en el rango de LC - 200 UFC

3. REFERENCIAS

3.1 Guía para la Validación de Métodos Microbiológicos - GUI-LE-05 – Organismo Argentino de Acreditación
(2013)
3.2 ISO 13843:2000 - Water quality — Guidance on validation of microbiological methods
3.3 Guía Curso Validación Métodos Microbiológicos 2012 - Subdirección Red Nacional de Laboratorios - Grupo
de Salud Ambiental - Instituto Nacional de Salud.
3.4 Uncertainty of quantitative determinations derived by Cultivation of microorganisms. Seppo I. Niemelä.
Advisory Commission for Metrology. Helsinki 2003.
3.5 ISO TS19036: Microbiology Of Foods And Animal Feeding Stuffs - Guide On Estimation Of Measurement
Uncertainty For Quantitative Determinations.
3.6 ISO 5725 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results (partes 1-5)
3.7 JCGM 200:2008. Vocabulario Internacional de Metrología. Conceptos fundamentales y generales, y términos
asociados (VIM)
3.8 ISO/TS 21748: vigente: Guía para el uso de los estimados de la repetibilidad, reproducibilidad y la veracidad
en la estimación de las mediciones. (ISO/TS 21748 Guidance for the use of repeatability, reproducibility and
trueness estimates in measurement uncertainty estimation).

4. PERSONAL PARTICIPANTE EN LA VALIDACIÓN

 (Analista A)
 (Analista B)

5. ASPECTOS GENERALES DE LA VALIDACIÓN

Para los métodos de ensayo alcanzados se evaluaron los siguientes parámetros de desempeño

Ensayo Medio detector Parámetros de desempeño a

evaluar
IE-19 Plate Count Linealidad (proporcionalidad),
Precisión, Límite de Detección
y Cuantificación, Veracidad,
Recuperación e Incertidumbre
de Medida
IE-24 Coliblue Linealidad (proporcionalidad),
Precisión, Límite de Detección
y Cuantificación, Veracidad,

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Recuperación e Incertidumbre
de Medida
Endo Linealidad (proporcionalidad),
Precisión, Límite de Detección
y Cuantificación, Veracidad,
Recuperación e Incertidumbre
de Medida
IE-25 Colilert Especificidad y Sensibilidad

6. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS

 Unidades: Todos los resultados expresados en CFU en este documento se refieren a un volumen de 100 mL
de muestra.
 UFC / CFU: Unidades formadoras de colonias
 H0: Hipótesis nula
 H1: Hipótesis alternativa
 LC: Límite de cuantificación
 LD: Límite de detección
 Media Rec: Valor medio de recuperación
 RSD: Desvío estándar relativo
 s: Desviación estándar
 s Rec: Desviación estándar de los valores de recuperación
 t: Estadístico t
 T: Temperatura
 tcrit: Estadístico t crítico
 Repetibilidad: En este documento se refiere a la variabilidad intra-analista.
 Reproducibilidad: En este documento se refiere a la variabilidad entre-analista.

7. METODOLOGIA Y DISEÑO EXPERIMENTAL

Por ser este un método normalizado se procedió a su verificación (3.1) Se comparó en algunos casos con
especificaciones provistas en el propio método estandarizado.

Se estandarizo la cepa Ecoli de acuerdo al procedimiento completar

Para evaluar los distintos parámetros de desempeño se planificaron las siguientes mediciones

Nota 2: Las conclusiones obtenidas respecto de los parámetros de desempeño evaluados son válidas en todo el
rango de trabajo estudiado.

7.1 Linealidad
Se sembraron y analizaron por triplicado 6 diluciones sucesivas (pasos 1 en 2) de una muestra estándar de
concentración alta comenzando desde aprox. 250 UFC. Cada placa fue leída por ambos analistas (Prueba de
proporcionalidad).

7.2 Precisión: Repetibilidad y Reproducibilidad. Incertidumbre. Duplicados

Para cada medio, M COLIBLUE, ENDO M y PLATE COUNT: se sembró y analizó 4 veces (una por cada
operador) una muestra de agua potable de recuentos medios, enriquecida con cepa E. Coli .

7.3 Precisión: Repetibilidad y Reproducibilidad. Incertidumbre de medida

Para cada medio, M COLIBLUE, ENDO M y PLATE COUNT: Se sembró y analizó 10 veces (una por cada
analista) una muestra de recuento cero. Se sembró luego 10 veces la muestra anterior adicionada (Recuentos
altos). Se repitió para recuentos bajo.

7.4 Veracidad (Verificación de la trazabilidad). Recuperación relativa

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Para cada medio, M COLIBLUE, ENDO M y PLATE COUNT: Se sembró (Aprox. 20 UFC) y analizó diariamente
durante 2 días (todos los analistas aleatoriamente) dos muestras al azar de recuento cero, y paralelamente se
sembró (Aprox. 20 UFC) y analizó muestras control negativo (agua Tipo I).

7.5 Sensibilidad
Se sembró 10 veces cepa Klebsiella (una vez por cada analista, durante 3 días) a un nivel aproximado de 20-30 UFC
Se sembró 10 veces cepa E Coli (una vez por cada analista, durante 3 días) a un nivel aproximado de 20-30 UFC

7.6 Especificidad
Se sembró 10 veces cepa Enterococcus Faecalis (una vez por cada analista, durante 3 días) a un nivel aproximado
de 20-30 UFC

8. LISTADO DE EQUIPOS, INSTRUMENTOS, MATERIALES, MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y CEPAS

DE REFERENCIA.

8.1 EQUIPOS E IMPLEMENTOS

 Tubos tapa rosca 90 mm x 15 mm diámetro
 Probetas de vidrio de 100 ml
 Pipetas de 1 mL , 10 ml
 Cajas de Petri 15 mm x 60 mm
 Frascos de vidrio esterilizables de 100 mL, 250 ml ,tapa azul SchottDurán
 Cajas de petri de vidrio y desechables con almohadillas estériles
 Filtros de membrana estériles de 0,45 micras tamaño de poro y 47 mm de diámetro
 Pinzas en acero inoxidable estériles
 Pipeta automática 100 l – 1000 l
 Pipeteador
 Equipo de filtración de 6 puestos con embudos y portafiltros de vidrio
 Bomba de vacío
 Incubadora marca WTB BINDER modelo/serie 1711509900310 a 35,5 °C.
 Cabina de flujo laminar horizontal − Nevera para conservación de medios (5ºC +3 ºC)
 Balanza electrónica METTLER TOLEDO serie 1114100408
 Plato de calentamiento
 Autoclave horizontal marca ESSEN LTDA serie/modelo DO09BA0004
 Horno de esterilización marca WTB BINDER modelo /serie ED/EED53
 Espectrofotómetro Hach DR 5000
 Cuenta colonias.

8.2 REACTIVOS Y MATERIALES DE REFERENCIA

 Cepa de Escherichia Coli certificada (ATCC 25922) Cat. 0335 lote. 33501
 Cepas de Klebsiella pneumoniae, Kit control Quanticult Cat. 0353 Lote 35375
 Cepa de Enterococcus faecalis COMPLETAR
 Cloruro de Bario Grado Reactivo Ref. 1.01719.1000 marca Merck
 Ácido Sulfúrico Grado Reactivo Ref.1.00732.2500 marca Merck
 Solución Buffer estéril preparada según IE24 “Determinación de Coliformes Totales y Escherichia Coli
Método filtración por membrana”
 KH2PO4 Grado reactivo Ref A651773524
 Caldo M Coliblue ref. Cat.2608442 mColiblue24 Broth Lote 7183
 Caldo M Endo COMPLETAR
 Agar nutritivo ref 1.05450.0500 marca Merck
 Ácido Clorhídrico Grado Reactivo ref 1.000317.2500 Merck
 Agua Ultrapura tipo I

9. SOFTWARE UTILIZADO
9.1 Microsoft Excel 2010.
9.2 Minitab 15 (versión de prueba)

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10. CONDICIONES DE MEDICIÓN DE LOS EQUIPOS

Las condiciones de medición del equipo, se aseguran mediante el cumplimiento de las actividades programadas en el
DG39 “Plan de mantenimiento, verificación y calibración de equipos y patrones”, además de las actividades descritas
en el IT20 “Gestión metrológica de equipos del LCCAP”. 5.3.2

11. CONDICIONES AMBIENTALES

El método se desarrolló de acuerdo a las directrices establecidas en el instructivo IT 75 “Instalaciones y condiciones
ambientales LCCAP”. Las Lecturas de Temperatura y Humedad Relativa fueron registradas en el formato
FTSTESLA030.

12. CONSIDERACIONES RESPECTO DE LAS HERRAMIENTAS ESTADISTICAS EMPLEADAS

Empleando los datos obtenidos en 7 se describe la evaluación de los siguientes parámetros de desempeño de los
métodos de ensayo:

12.1 ADECUACIÓN Y FILTRADO DE DATOS.

Respecto de los datos experimentales de recuentos (como UFC) obtenidos en 7 a fin de evaluar los parámetros de
desempeño se indica que:

 Se inspeccionaron gráficamente a fin de identificar valores discrepantes (outliers*) empleando gráficas de

caja. Como criterio analítico para n>4 se asumen como potencialmente discrepantes aquellos valores que se
encuentran más allá de 1.5 veces el rango intercuartílico desde el borde de la caja.
 Aquellos valores identificados como potencialmente discrepantes en el ítem anterior fueron evaluados de
acuerdo a la Prueba paramétrica Q (o de Dixon) a fin de confirmar su rechazo
 Los resultados en UFC fueron transformados a logaritmo decimal a fin de aproximar a distribución normal.
 A los conjuntos de datos transformados se aplicaron pruebas de normalidad (Anderson Darling) para verificar
dicha distribución estadística de probabilidad.

12.2 CONSIDERACIONES RESPECTO DE LAS PRUEBAS ESTADÍSTICAS

12.3 En todas las pruebas estadísticas aplicadas, salvo que se indique otra cosa, el nivel de significancia,
, siempre fue del 5%.
12.4 Siempre que se utilizó la herramienta de contraste estadístico Análisis de Varianza de un factor
(ANOVA) se realizó un estudio previo de homogenidad de varianzas (Prueba F de Fisher) y de normalidad
(Anderson - Darling)

13. EVALUACION DE LOS PARAMETROS DE DESEMPEÑO

13.1 LINEALIDAD, RANGO DE TRABAJO

13.1.1 MEDIO M PLATE COUNT

A continuación se muestran los datos obtenidos desde 7.1

Tabla

Analista
Volumen
Dilución Determinaciones Analista A Determinaciones Analista B Suma global
relativo
(CFU) (CFU)
1 2 3 1 2 3
1 268 280 304 280 312 296 32 1740
0,5 144 160 184 140 168 176 16 972
0,25 96 88 108 88 80 68 8 528

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0,125 52 50 68 64 47 34 4 315
0,063 33 47 24 33 43 25 2 205
0,031 19 22 23 19 19 20 1 122

Gráfica
Scatterplot of Suma global vs Volumen relativo (VR,i)
2000

1500
Suma global

1000

500

0
0 5 10 15 20 25 30 35
Volumen relativo (VR,i)

13.1.1.1 CONDICIÓN DE ACEPTACIÓN

Relación lineal para el perfil “Suma Global (total UFC para todos los analistas vs Volumen Relativo)”

13.1.1.2 CONCLUSIÓN
Ya definido anteriormente el intervalo de lecturas de UFC aceptable (de fácil lectura para el analista) se demuestra
visualmente desde la gráfica anterior que el mismo presenta un comportamiento lineal en función de diluciones
sucesivas 1:2. Por lo tanto se cumple la condición de aceptación.

Repetir para Coliblue y Endo pero con un grado más de dilución mas

13.2 PRECISIÓN

Se evaluó la precisión en condiciones de repetibilidad y repetibilidad.

13.2.1 FUENTE DE DATOS #1.

Se valoró la precisión de los resultados obtenidos en 7.2 (3.5). Para ello se empleó el parámetro “Promedio de los
cuadrados dentro de grupos” para repetibilidad y “Promedio de los cuadrados entre grupos” para reproducibilidad
desde la herramienta de análisis de datos Análisis de Varianza de un factor (9.1 y 3.6).

13.2.1.1 MEDIO M COLIBLUE

Analista A Analista A Analista B Analista B Promedio

Fecha (siembra)
(UFC) (Log UFC) (UFC (Log UFC) (Log UFC)

27/05/2014 72 1,857 80 1,903 1,861

27/05/2014 88 1,944 52 1,716
27/05/2014 76 1,881 64 1,806
27/05/2014 76 1,881 80 1,903

Si bien la cantidad de datos es pequeña (n=4) se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

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Boxplot of Analista A (UFC). Analista B (UFC

90

80
Data

70

60

50
Analista A (UFC) Analista B (UFC

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad (se cumple H0*)

Probability Plot of Analista A (Log UFC) Probability Plot of Analista B (Log UFC)
Normal Normal
99 99
Mean 1,891 Mean 1,832
StDev 0,03742 StDev 0,08987
95 N 4 95 N 4
AD 0,427 AD 0,348
90 90
P-Value 0,142 P-Value 0,257
80 80
70 70
Percent
Percent

60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
1,80 1,85 1,90 1,95 2,00 1,6 1,7 1,8 1,9 2,0 2,1
Analista A (Log UFC) Analista B (Log UFC)

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas - Repetibilidad

𝑠repetibilidad.coliblue = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √𝟎, 𝟎𝟎𝟒𝟕𝟑𝟖𝟒𝟔𝟒 = 0,0688

𝑠repetibilidad.coliblue 0,0688
𝑠repetibilidad.coliblue.relativa = = = 0,03698
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝐿𝑜𝑔 𝑈𝐹𝐶 1,861

Precisión entre analistas - Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.coliblue = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √𝟎, 𝟎𝟎𝟔𝟗𝟏 = 0,0831

𝑠reproducibilidad.coliblue 0,0831
𝑠reproducibilidad.coliblue.relativa = = = 0,0447
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝐿𝑜𝑔 𝑈𝐹𝐶 1,861

ANÁLISIS DE VARIANZA
Valor crítico
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad para F
Entre grupos 0,006907771 1 0,006907771 1,457808 0,272711 5,987378
Dentro de los grupos 0,028430783 6 0,004738464

Total 0,035338553 7

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13.2.1.2 MEDIO M-ENDO

Promedio
Fecha Analista A Analista A Analista B Analista B (Log
(siembra) (UFC) (Log UFC) (UFC (Log UFC) UFC
27/05/2014 64 1,806 72 1,857 1,834

27/05/2014 68 1,833 56 1,748

27/05/2014 96 1,982 64 1,806
27/05/2014 60 1,778 72 1,857

Si bien la cantidad de datos es pequeña (n=4) se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

Boxplot of Analista A (UFC). Analista B (UFC

100

90

80
Data

70

60

50
Analista A (UFC) Analista B (UFC

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad

Probability Plot of Analista A (Log UFC) Probability Plot of Analista B (Log UFC)
Normal Normal
99 99
Mean 1,850 Mean 1,817
StDev 0,09107 StDev 0,05198
95 N 4 95 N 4
AD 0,420 AD 0,355
90 90
P-Value 0,150 P-Value 0,246

80 80

70 70
Percent
Percent

60 60
50 50
40 40
30 30

20 20

10 10

5
5

1
1
1,6 1,7 1,8 1,9 2,0 2,1 1,70 1,75 1,80 1,85 1,90 1,95
Analista B (Log UFC)
Analista A (Log UFC)

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas - Repetibilidad

𝑠repetibilidad.endo = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,005498 = 0,07415

𝑠repetibilidad.endo 0,07415
𝑠repetibilidad.endo.relativa = = = 0,04044
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝐿𝑜𝑔 𝑈𝐹𝐶 1,834

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Precisión entre analistas - Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.endo = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,002115048 = 0,04599

𝑠reproducibilidad.endo 0,04598
𝑠reproducibilidad.endo.relativa = = = 0,025
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝐿𝑜𝑔 𝑈𝐹𝐶 1,834

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 0,002115048 1 0,002115048 0,38468 0,557915 5,987378
Dentro de los grupos 0,032989172 6 0,005498195

Total 0,03510422 7

Nota 3: Puede advertirse, que contrariamente a lo esperado, el valor del promedio de los cuadrados entre grupos
(varianza entre analistas) es numéricamente menor al valor del promedio de los cuadrados dentro de grupos
(varianza intra analistas). Sin embargo desde el propio contraste del Análisis de Varianzas de un factor (ANOVA)
cuyos estadísticos se muestran en la tabla anterior es posible observar que no existen diferencias significativas entre
las varianzas antes mencionadas.

13.2.1.3 MEDIO PLATE COUNT

Fecha Analista A Analista A Analista B Analista B Promedio

(siembra) (UFC) (Log UFC) (UFC (Log UFC) (Log UFC

27/05/2014 64 1,806 96 1,982

27/05/2014 92 1,964 56 1,748
1,864
27/05/2014 52 1,716 92 1,964
27/05/2014 56 1,748 96 1,982

Si bien la cantidad de datos es pequeña (n=4) se advierte en la gráfica de abajo que existe, para el grupo de datos
del analista B, un potencial valor discrepante (56 UFC).

Boxplot of Analista A (UFC). Analista B (UFC

100

90

80
Data

70

60

50
Analista A (UFC) Analista B (UFC

La realización de la prueba Q corrobora tal hipótesis y por tanto puede rechazarse el valor en cuestión.

Q = (56 – 92)/(96-56) = -0,9

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Qcrit (n=4) = 0,83

La tabla depurada queda

Tabla
Analista A Analista B
Fecha Analista A (Log UFC) Analista B (Log UFC) Promedio
(siembra) (UFC) (UFC (Log UFC

27/05/2014 64 1,806 96 1,982

27/05/2014 92 1,964 * *
1,880
27/05/2014 52 1,716 92 1,964

27/05/2014 56 1,748 96 1,982

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad

Probability Plot of Analista A (Log UFC) Probability Plot of Analista B (Log UFC)
Normal Normal
99 99
Mean 1,809 Mean 1,976
StDev 0,1100 StDev 0,01067
95 N 4 95 N 3
AD 0,322 AD 0,488
90 90
P-Value 0,313 P-Value 0,057
80 80
70 70
Percent
Percent

60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2,0 2,1 1,95 1,96 1,97 1,98 1,99 2,00
Analista A (Log UFC) Analista B (Log UFC)

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas - Repetibilidad

𝑠repetibilidad.pcount = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,007308 = 0,08549

𝑠repetibilidad.pcount 0,08549
𝑠repetibilidad.pcount.relativa = = = 0,0454
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝐿𝑜𝑔 𝑈𝐹𝐶 1,864

Precisión entre analistas - Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.pcount = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,04814 = 0,2194

𝑠reproducibilidad.pcount 0,2194
𝑠reproducibilidad.pcount.relativa = = = 0,1177
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝐿𝑜𝑔 𝑈𝐹𝐶 1,864

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las Suma de Grados de Promedio de los Valor crítico
variaciones cuadrados libertad cuadrados F Probabilidad para F
6,5867
Entre grupos 0,048136812 1 0,048136812 56 0,05025 6,607891
Dentro de los grupos 0,036540609 5 0,007308122

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Total 0,084677421 6

13.2.2 FUENTE DE DATOS #2.

Se valoró la precisión de los resultados obtenidos en 7.3 (3.5).. Para ello se empleó el parámetro “Promedio de los
cuadrados dentro de grupos” para repetibilidad y “Promedio de los cuadrados entre grupos” para reproducibilidad
desde la herramienta de análisis de datos Análisis de Varianza de un factor (9.1 y 3.6).

13.2.2.1 MEDIO M COLIBLUE

13.2.2.1.1 SERIE 1. RECUENTOS ALTOS

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

Fecha de Valor Recuento Valor Recuento R Promedio

Analista
siembra esperado (CFU) obtenido (CFU) esperado (LogCFU) obtenido (LogCFU) (Recuperación) Recuperación

27-may A 200 144 2,30103 2,158362 0,937998 0,9235

27-may A 200 144 2,30103 2,158362 0,937998

27-may A 200 120 2,30103 2,079181 0,903587
27-may A 200 104 2,30103 2,017033 0,876578
27-may A 200 108 2,30103 2,033424 0,883702
27-may A 200 144 2,30103 2,158362 0,937998
27-may A 200 120 2,30103 2,079181 0,903587
27-may A 200 124 2,30103 2,093422 0,909776
27-may A 200 132 2,30103 2,120574 0,921576
27-may A 200 136 2,30103 2,133539 0,92721
27-may B 200 128 2,30103 2,10721 0,915768
27-may B 200 156 2,30103 2,193125 0,953106
27-may B 200 160 2,30103 2,20412 0,957884
27-may B 200 176 2,30103 2,245513 0,975873
27-may B 200 144 2,30103 2,158362 0,937998
27-may B 200 128 2,30103 2,10721 0,915768
27-may B 200 128 2,30103 2,10721 0,915768
27-may B 200 128 2,30103 2,10721 0,915768
27-may B 200 140 2,30103 2,146128 0,932681
27-may B 200 124 2,30103 2,093422 0,909776

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Boxplot of A. B
180

170

160

150
Data

140

130

120

110

100
A B

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados
transformados no presentan desviaciones significativas de la normalidad para valores de R (Recuperación).

Probability Plot of R Analista A Probability Plot of R Analista B

Normal Normal
99 99
Mean 0,9140 Mean 0,9330
StDev 0,02239 StDev 0,02264
95 N 10 95 N 10
AD 0,372 AD 0,622
90 90
P-Value 0,347 P-Value 0,074
80 80
70 70
Percent

Percent

60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
0,850 0,875 0,900 0,925 0,950 0,975 0,88 0,90 0,92 0,94 0,96 0,98 1,00
R Analista A R Analista B

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas – Repetibilidad

𝑠repetibilidad.coliblue.r.H = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,000507 = 0,0225

𝑠repetibilidad.coliblue.r.H 0,0225
𝑠repetibilidad.coliblue.r.H.relativa = = = 0,024
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,9235

Precisión entre analistas – Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.coliblue.r.H = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,001812 = 0,04257

𝑠reproducibilidad.coliblue.r.H 0,04257
𝑠reproducibilidad.coliblue.r.H.relativa = = = 0,04609
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,9235

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las Suma de Grados de Promedio de los Probabilida Valor crítico para
variaciones cuadrados libertad cuadrados F d F
3,57419
Entre grupos 0,001812 1 0,001812 7 0,074894 4,413873
Dentro de los grupos 0,009126 18 0,000507

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Total 0,010939 19

13.2.2.1.2 SERIE 2. RECUENTOS BAJOS

Fecha de Valor esperado Recuento obtenido Valor esperado Recuento obtenido R Promedio de
Analista
siembra (CFU) (CFU) (LogCFU) (LogCFU) (Recuperación) Recuperación

28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482 0,77906496

28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622

28-may A 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may A 20 9 1,30103 0,954243 0,733452
28-may A 20 13 1,30103 1,113943 0,856201
28-may A 20 5 1,30103 0,69897 0,537244
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may A 20 14 1,30103 1,146128 0,880939
28-may A 20 20 1,30103 1,30103 1
28-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may B 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may B 20 9 1,30103 0,954243 0,733452
28-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may B 20 6 1,30103 0,778151 0,598104
28-may B 20 11 1,30103 1,041393 0,800437
28-may B 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may B 20 18 1,30103 1,255273 0,96483
28-may B 20 17 1,30103 1,230449 0,94575
28-may B 20 9 1,30103 0,954243 0,733452
28-may B 20 13 1,30103 1,113943 0,856201
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may B 20 6 1,30103 0,778151 0,598104
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622

Se advierte en la gráfica de abajo que existe, para el grupo de datos del analista A, un valor discrepante (20 UFC).

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Boxplot of A (CFU). B (CFU)

20,0

17,5

15,0
Data

12,5

10,0

7,5

5,0

A (CFU) B (CFU)

La tabla depurada queda

Fecha de Valor esperado Recuento obtenido Valor esperado Recuento obtenido R Promedio
Analista
siembra (CFU) (CFU) (LogCFU) (LogCFU) (Recuperación) de Recuperación

28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482 0,77144651

28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622

28-may A 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may A 20 9 1,30103 0,954243 0,733452
28-may A 20 13 1,30103 1,113943 0,856201
28-may A 20 5 1,30103 0,69897 0,537244
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may A 20 14 1,30103 1,146128 0,880939
28-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may B 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may B 20 9 1,30103 0,954243 0,733452
28-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may B 20 6 1,30103 0,778151 0,598104
28-may B 20 11 1,30103 1,041393 0,800437
28-may B 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
28-may B 20 18 1,30103 1,255273 0,96483
28-may B 20 17 1,30103 1,230449 0,94575
28-may B 20 9 1,30103 0,954243 0,733452
28-may B 20 13 1,30103 1,113943 0,856201
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may B 20 6 1,30103 0,778151 0,598104
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622

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Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad para valores de R (Recuperación).

Probability Plot of R Analista A Probability Plot of R Analista B

Normal Normal
99 99
Mean 0,7706 Mean 0,7722
StDev 0,08811 StDev 0,1061
95 N 14 95 N 15
AD 0,656 AD 0,257
90 90
P-Value 0,068 P-Value 0,669
80 80
70 70
Percent

Percent
60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0
R Analista A R Analista B

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas - Repetibilidad

𝑠repetibilidad.coliblue.r.L = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,01098 = 0,0105

𝑠repetibilidad.coliblue.r.L 0,0105
𝑠repetibilidad.coliblue.r.L.relativa = = = 0,136
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,771

Precisión entre analistas - Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.coliblue.r.L = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,001402 = 0,0374

𝑠reproducibilidad.coliblue.r.L 0,0374
𝑠reproducibilidad.coliblue.r.L.relativa = = = 0,04856
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,771

Nota 4: Puede advertirse, que contrariamente a lo esperado, el valor del promedio de los cuadrados entre grupos
(varianza entre analistas) es numéricamente menor al valor del promedio de los cuadrados dentro de grupos
(varianza intra analistas). Sin embargo desde el propio contraste del Análisis de Varianzas de un factor (ANOVA)
cuyos estadísticos se muestran en la tabla anterior es posible observar que no existen diferencias significativas entre
las varianzas antes mencionadas.

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 0,001402 1 0,001402 0,127663 0,723547 4,195972
Dentro de los grupos 0,307518 28 0,010983

Total 0,30892 29

13.2.2.2 MEDIO M ENDO

13.2.2.2.1 SERIE 1. RECUENTOS ALTOS.

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

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Fecha de Valor esperado Recuento obtenido Valor esperado Recuento obtenido R Promedio (Log
Analista
siembra (CFU) (CFU) (LogCFU) (LogCFU) (Recuperación) CFU)

27-may A 200 124 2,30103 2,093422 0,909776 0,92463007

27-may A 200 84 2,30103 1,924279 0,836269

27-may A 200 88 2,30103 1,944483 0,845049
27-may A 200 136 2,30103 2,133539 0,92721
27-may A 200 112 2,30103 2,049218 0,890566
27-may A 200 144 2,30103 2,158362 0,937998
27-may A 200 120 2,30103 2,079181 0,903587
27-may A 200 112 2,30103 2,049218 0,890566
27-may A 200 148 2,30103 2,170262 0,94317
27-may A 200 148 2,30103 2,170262 0,94317
27-may B 200 144 2,30103 2,158362 0,937998
27-may B 200 148 2,30103 2,170262 0,94317
27-may B 200 144 2,30103 2,158362 0,937998
27-may B 200 160 2,30103 2,20412 0,957884
27-may B 200 152 2,30103 2,181844 0,948203
27-may B 200 148 2,30103 2,170262 0,94317
27-may B 200 156 2,30103 2,193125 0,953106
27-may B 200 148 2,30103 2,170262 0,94317
27-may B 200 164 2,30103 2,214844 0,962545
27-may B 200 144 2,30103 2,158362 0,937998

Boxplot of A (CFU). B (CFU)

170

160

150

140

130
Data

120

110

100

90

80
A (CFU) B (CFU)

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad para valores de R (Recuperación).

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Probability Plot of R Analista A Probability Plot of R Analista B

Normal Normal
99 99
Mean 0,9027 Mean 0,9465
StDev 0,03830 StDev 0,008716
95 N 10 95 N 10
AD 0,419 AD 0,521
90 90
P-Value 0,262 P-Value 0,138
80 80
70 70

Percent
Percent

60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 0,93 0,94 0,95 0,96 0,97
R Analista A R Analista B

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas - Repetibilidad

𝑠repetibilidad.endo.r.H = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,0007716 = 0,0278

𝑠repetibilidad.endo.r.H 0,0278
𝑠repetibilidad.endo.r.H.relativa = = = 0,0300
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,925

Precisión entre analistas – Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.endo.r.H = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,009587 = 0,09791

𝑠reproducibilidad.endo.r.H 0,09791
𝑠reproducibilidad.endo.r.H.relativa = = = 0,1059
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,925

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 0,009587 1 0,009587 12,42548 0,002419 4,413873
Dentro de los grupos 0,013888 18 0,000772

Total 0,023475 19

13.2.2.2.2 SERIE 2. RECUENTOS BAJOS.

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

Fecha de Valor esperado Recuento obtenido Valor esperado Recuento obtenido R Promedio (Log
Analista
siembra (CFU) (CFU) (LogCFU) (LogCFU) (Recuperación) CFU)

29-may A 20 13 1,30103 1,113943 0,856201 0,84788171

29-may A 20 7 1,30103 0,845098 0,649561

29-may A 20 8 1,30103 0,90309 0,694135
29-may A 20 9 1,30103 0,954243 0,733452

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Microbiológicos” Julio – Agosto de 2015. 18 de 37

29-may A 20 14 1,30103 1,146128 0,880939

29-may A 20 18 1,30103 1,255273 0,96483
29-may A 20 14 1,30103 1,146128 0,880939
29-may A 20 17 1,30103 1,230449 0,94575
29-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
29-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
29-may A 20 18 1,30103 1,255273 0,96483
29-may A 20 20 1,30103 1,30103 1
29-may A 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
29-may A 20 15 1,30103 1,176091 0,903969
29-may A 20 16 1,30103 1,20412 0,925513
29-may B 20 15 1,30103 1,176091 0,903969
29-may B 20 16 1,30103 1,20412 0,925513
29-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
29-may B 20 7 1,30103 0,845098 0,649561
29-may B 20 19 1,30103 1,278754 0,982878
29-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
29-may B 20 11 1,30103 1,041393 0,800437
29-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
29-may B 20 16 1,30103 1,20412 0,925513
29-may B 20 18 1,30103 1,255273 0,96483
29-may B 20 11 1,30103 1,041393 0,800437
29-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
29-may B 20 11 1,30103 1,041393 0,800437
29-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
29-may B 20 10 1,30103 1 0,768622

Boxplot of A (CFU). B (CFU)

20

18

16

14
Data

12

10

6
A (CFU) B (CFU)

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad para valores de R (Recuperación).

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Probability Plot of R Analista A Probability Plot of R Analista B

Normal Normal
99 99
Mean 0,8592 Mean 0,8365
StDev 0,1023 StDev 0,08909
95 N 15 95 N 15
AD 0,396 AD 0,472
90 90
P-Value 0,325 P-Value 0,208

80 80

70 70

Percent
Percent

60 60
50 50
40 40
30 30

20 20

10 10

5 5

1
1
0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1
R Analista A R Analista B

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas – Repetibilidad

𝑠repetibilidad.endo.r.L = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,009206 = 0,0959

𝑠repetibilidad.endo.r.L 0,0959
𝑠repetibilidad.endo.r.L.relativa = = = 0,113
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,8479

Precisión entre analistas – Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.endo.r.L = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,003869 = 0,0622

𝑠reproducibilidad.endo.r.L 0,0622
𝑠reproducibilidad.endo.r.L.relativa = = = 0,07336
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,8479

Nota 5: Puede advertirse, que contrariamente a lo esperado, el valor del promedio de los cuadrados entre grupos
(varianza entre analistas) es numéricamente menor al valor del promedio de los cuadrados dentro de grupos
(varianza intra analistas). Sin embargo desde el propio contraste del Análisis de Varianzas de un factor (ANOVA)
cuyos estadísticos se muestran en la tabla anterior es posible observar que no existen diferencias significativas entre
las varianzas antes mencionadas.

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 0,003869 1 0,003869 0,420258 0,52209 4,195972
Dentro de los grupos 0,257756 28 0,009206

Total 0,261624 29

13.2.2.3 MEDIO PLATE COUNT

13.2.2.3.1 SERIE 2. RECUENTOS ALTOS

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

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Fecha de Valor esperado Recuento obtenido Valor esperado Recuento obtenido R Promedio (Log
Analista
siembra (CFU) (CFU) (LogCFU) (LogCFU) (Recuperación) CFU)

27-may A 200 112 2,30103 2,049218 0,890566 0,91111033

27-may A 200 168 2,30103 2,225309 0,967093

27-may A 200 96 2,30103 1,982271 0,861471
27-may A 200 136 2,30103 2,133539 0,92721
27-may A 200 92 2,30103 1,963788 0,853439
27-may A 200 136 2,30103 2,133539 0,92721
27-may A 200 128 2,30103 2,10721 0,915768
27-may A 200 132 2,30103 2,120574 0,921576
27-may A 200 96 2,30103 1,982271 0,861471
27-may A 200 108 2,30103 2,033424 0,883702
27-may B 200 124 2,30103 2,093422 0,909776
27-may B 200 108 2,30103 2,033424 0,883702
27-may B 200 116 2,30103 2,064458 0,897189
27-may B 200 124 2,30103 2,093422 0,909776
27-may B 200 140 2,30103 2,146128 0,932681
27-may B 200 156 2,30103 2,193125 0,953106
27-may B 200 132 2,30103 2,120574 0,921576
27-may B 200 156 2,30103 2,193125 0,953106
27-may B 200 120 2,30103 2,079181 0,903587
27-may B 200 152 2,30103 2,181844 0,948203

Boxplot of A (CFU). B (CFU)

170

160

150

140
Data

130

120

110

100

90
A (CFU) B (CFU)

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad para valores de R (Recuperación).

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Probability Plot of R Analista A Probability Plot of R Analista B

Normal Normal
99 99
Mean 0,9010 Mean 0,9213
StDev 0,03679 StDev 0,02461
95 N 10 95 N 10
AD 0,330 AD 0,320
90 90
P-Value 0,445 P-Value 0,471
80 80
70 70
Percent

Percent
60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 0,850 0,875 0,900 0,925 0,950 0,975
R Analista A R Analista B

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas – Repetibilidad

𝑠repetibilidad.pcount.r.H = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,000979 = 0,0313

𝑠repetibilidad.pcount.r.H 0,0313
𝑠repetibilidad.pcount.r.H.relativa = = = 0,0343
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,911

Precisión entre analistas – Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.pcount.r.H = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,002064 = 0,0454

𝑠reproducibilidad.pcount.r.H 0,0454
𝑠reproducibilidad.pcount.r.H.relativa = = = 0,0499
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,911

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 0,002064 1 0,002064 2,10776 0,163761 4,413873
Dentro de los grupos 0,01763 18 0,000979

Total 0,019694 19

13.2.2.3.2 SERIE 2. RECUENTOS BAJOS

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

Fecha de Valor esperado Recuento obtenido Valor esperado Recuento obtenido R Promedio (Log
Analista
siembra (CFU) (CFU) (LogCFU) (LogCFU) (Recuperación) CFU)

28-may A 20 20 1,30103 1,30103 1 0,94442777

28-may A 20 11 1,30103 1,041393 0,800437

28-may A 20 36 1,30103 1,556303 1,196208
28-may A 20 16 1,30103 1,20412 0,925513
28-may A 20 22 1,30103 1,342423 1,031815
28-may A 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may A 20 11 1,30103 1,041393 0,800437
28-may A 20 20 1,30103 1,30103 1
28-may A 20 19 1,30103 1,278754 0,982878

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28-may A 20 26 1,30103 1,414973 1,087579

28-may A 20 15 1,30103 1,176091 0,903969
28-may A 20 23 1,30103 1,361728 1,046654
28-may A 20 26 1,30103 1,414973 1,087579
28-may A 20 28 1,30103 1,447158 1,112317
28-may A 20 24 1,30103 1,380211 1,06086
28-may B 20 13 1,30103 1,113943 0,856201
28-may B 20 17 1,30103 1,230449 0,94575
28-may B 20 14 1,30103 1,146128 0,880939
28-may B 20 15 1,30103 1,176091 0,903969
28-may B 20 14 1,30103 1,146128 0,880939
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may B 20 18 1,30103 1,255273 0,96483
28-may B 20 10 1,30103 1 0,768622
28-may B 20 16 1,30103 1,20412 0,925513
28-may B 20 22 1,30103 1,342423 1,031815
28-may B 20 14 1,30103 1,146128 0,880939
28-may B 20 16 1,30103 1,20412 0,925513
28-may B 20 12 1,30103 1,079181 0,829482
28-may B 20 20 1,30103 1,30103 1
28-may B 20 18 1,30103 1,255273 0,96483

Boxplot of A (CFU). B (CFU)

35

30

25
Data

20

15

10

A (CFU) B (CFU)

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad para valores de R (Recuperación).

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Probability Plot of R Analista A Probability Plot of R Analista B

Normal Normal
99 99
Mean 0,9870 Mean 0,9019
StDev 0,1251 StDev 0,07636
95 N 15 95 N 15
AD 0,384 AD 0,211
90 90
P-Value 0,349 P-Value 0,826
80 80
70 70
Percent

Percent
60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10
5 5

1 1
0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1
R Analista A R Analista B

Desde la tabla de abajo se obtiene

Precisión intra analistas – Repetibilidad

𝑠repetibilidad.endo.r.L = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,010739 = 0,10363

𝑠repetibilidad.endo.r.L 0,10363
𝑠repetibilidad.endo.r.L.relativa = = = 0,1097
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,9444

Precisión entre analistas – Reproducibilidad

𝑠reproducibilidad.endo.r.L = √𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜𝑠 = √0,05435 = 0,233

𝑠reproducibilidad.endo.r.L 0,233
𝑠reproducibilidad.endo.r.L.relativa = = = 0,2470
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑅𝑒𝑐 0,9444

ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las Suma de Grados de Promedio de los Valor crítico
variaciones cuadrados libertad cuadrados F Probabilidad para F
Entre grupos 0,05435 1 0,05435 5,060847 0,03252 4,195972
Dentro de los grupos 0,300698 28 0,010739

Total 0,355048 29

13.2.3 RESUMEN DE PRECISIÓN EN DOMINIO LOGARÍTMICO DECIMAL

Repetibilidad (s) Reproducibilidad (s) Repetibilidad (RSD) Reproducibilidad (RSD)

Fuentes de datos Medios Nivel de recuentos

M Coliblue Medio 0,0688 0,0831 0,03698 0,0447

Serie 1 (Duplicados) M Endo Medio 0,07415 0,04599 0,04044 0,025
Plate Count Medio 0,08549 0,2194 0,0454 0,1177

Altos 0,0225 0,04257 0,024 0,046

M Coliblue
Bajos 0,0105 0,0374 0,136 0,0486
Altos 0,0278 0,09791 0,03 0,1059
Serie 2 (Recuperación) M Endo
Bajos 0,0959 0,0622 0,113 0,0734
Altos 0,0313 0,0454 0,034 0,0499
Plate Count
Bajos 0,10363 0,233 0,1097 0,24

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13.2.4 CONDICIONES DE ACEPTACION

13.2.4.1 No disponibles en los métodos estándar.
13.2.4.2 Se decide internamente obtener variaciones en el orden a las predichas por la dispersión estadística
de Poisson

1
𝑅𝑆𝐷 ≅ √
𝑧

Donde
z: recuentos en UFC

Tabla
RSD
UFC
Poisson
5 0,447
30 0,183
100 0,100
150 0,082
200 0,071

13.2.5 CONCLUSIÓN
Para los métodos de ensayo evaluados los resultados obtenidos de precisión relativa (RSD) tanto en condiciones de
repetibilidad (intra analistas) como de reproducibilidad (entre analistas) se encuentran en el orden de los valores
predichos por la dispersión estadística de Poisson (13.2.4). Por lo tanto se cumple la condición de aceptación.

13.3 LÍMITES INFERIORES

13.3.1 LIMITE DE DETECCION

13.3.1.1 DESARROLLO

Se define límite de detección como el número de partículas x (por porción analítica) donde la probabilidad p0 de un
resultado negativo es igual al 5%.

La probabilidad de un resultado positivo es p(+) = 1 – p0.

Se calcula x a través de distribución binomial negativa donde u2 es la sobredispersión. En este caso se asume,
aunque se sobredimensione, que el parámetro sobredispersión toma valores semejantes a los de reproducibilidad.
2 2 2
[𝑝0−𝑢 − 1] 0,05𝑢 − 1 20−𝑢 − 1
𝑥= = =
𝑢2 𝑢2 𝑢2

Empleando los valores de reproducibilidad en la ecuación anterior (Equivalencia de Myrberg (3.4)) de 13.2.3 se
obtiene:

Nivel de Límite
recuentos de detección

M Coliblue Medio 3,03

Serie 1
(Duplicados) M Endo Medio 3,01
Plate Count Medio 3,22

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Altos 3,00
M Coliblue
Bajos 3,00

Serie 2 Altos 3,04

(Recuperación) M Endo
Bajos 3,01
Altos 3,01
Plate Count
Bajos 3,25

Por tanto el valor de x en el límite de detección es de aproximadamente 3 UFC.

13.3.1.2 CONDICIONES DE ACEPTACION
No disponibles

13.3.1.3 CONCLUSIÓN
No aplica

13.3.2 LIMITE DE CUANTIFICACION

Se determinó el límite de cuantificación (LC) del método utilizando la información de precisión en condiciones de
repetibilidad (13.2.3) para niveles superiores al LC sospechado (nivel medio). Se empleó la siguiente definición:

"La más pequeña cantidad de analito (que es el más bajo número real de organismos), los cuales pueden ser
medidos y cuantificados con precisión y exactitud definidas bajo las condiciones experimentales para el método bajo
validación".
AOAC define el límite de cuantificación para métodos cuantitativos como LC = 10s 0; esto es equivalente a decir que
es necesario que un coeficiente de variación sea mejor (menor) que el 10%.

13.3.3 MEDIO M COLIBLUE

Precisión en condiciones de repetibilidad: 0,136 (13.2.3)
LogLC= 10*0,0688= 0,688
LC = 5 UFC

13.3.4 MEDIO M ENDO

Precisión en condiciones de repetibilidad: 0,113 (13.2.3)
LogLC= 10*0,07415= 0,7415
LC = 6 UFC

13.3.5 MEDIO PLATE COUNT

Precisión en condiciones de repetibilidad: 0,113 (13.2.3)
LogLC= 10*0,08549= 0,8549
LC = 8 UFC

13.3.6 CONDICIÓN DE ACEPTACIÓN

No disponible.

13.3.7 CONCLUSIÓN
No aplica. El valor de límite de cuantificación obtenido establece el límite inferior del rango de trabajo para cada
método.

13.4 VERACIDAD (RECUPERACION RELATIVA)

Se verificó la trazabilidad de las determinaciones empleando la técnica de recuperación relativa (3.5) empleando los
datos de 7.4 .Ello permitiría asegurar resultados veraces.

13.4.1 CONDICIÓN DE ACEPTACIÓN

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Se establece como condición de aceptación que RECUPERACIÓN = 1 (100%)

Se postularon las siguientes hipótesis para la suma de recuentos paralelos respecto de los correspondientes
volúmenes sucesivos de muestra empleados en las diluciones:

H0: El % de recuperacion medio no difiere significativamente de 1.

H1: El % de recuperacion medio si difiere significativamente de 1.

Se plantea:

El test paramétrico a dos colas denominado "Prueba T para una Muestra de Resultados" cuyo estadístico se calcula
de acuerdo a la ecuación de abajo. A fin de que la suposición de normalidad de los resultados sea razonablemente
valida, previo al cálculo del estadístico t se transformaron los datos de recuentos a logaritmo decimal

𝟏 − 𝑹𝒑𝒓𝒐𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐
𝒕=
𝒔 ⁄√ 𝒏

Donde:

Rpromedio: % de recuperación promedio

s: Desvío estándar asociado con Rpromedio

13.4.2 MEDIO M-COLIBLUE

Se advierten en la gráfica de abajo que existen dos resultados posiblemente discrepantes para el conjunto de datos
“Controles Negativos Adicionados”

Tabla

Fecha de Control Negativo Muestra Log Control Negativo Log Muestra

Analista R Rpromedio 0,957345
siembra Adicionado Adicionada Adicionado Adicionada

28-may A 15 14 1,176091259 1,14612804 0,974523046 s 0,124922

28-may A 18 12 1,255272505 1,07918125 0,8597187 n 8

29-may A 14 10 1,146128036 1 0,87250287

29-may A 14 10 1,146128036 1 0,87250287

28-may B 9 15 0,954242509 1,17609126 1,23248676

28-may B 14 14 1,146128036 1,14612804 1

29-may B 14 10 1,146128036 1 0,87250287

28-may B 15 14 1,176091259 1,14612804 0,974523046

Gráfica

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Boxplot of Control Negativo Adicionado. Muestra Adicionada

18

16

14
Data

12

10

Control Negativo Adicionado Muestra Adicionada

Se aplica la prueba Q y se confirma que puede rechazarse el valor “9”

𝑽𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒔𝒐𝒔𝒑𝒆𝒄𝒉𝒐𝒔𝒐 − 𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒎á𝒔 𝒑𝒓ó𝒙𝒊𝒎𝒐

𝑸=
𝑹𝒂𝒏𝒈𝒐 𝒅𝒆 𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓𝒆𝒔

Q Qcrítico (n=8; P = 0,05)

Valor 18 0,333333333 0,524

Valor 9 0,555555556 0,524

La tabla depurada queda:

Tabla

Fecha de Control Negativo Muestra Log Control Negativo Log Muestra

Analista R relativa Rmedio 0,918039
siembra Adicionado Adicionada Adicionado Adicionada

28-may A 15 14 1,176091259 1,14612804 0,974523046 s 0,061536

28-may A 18 12 1,255272505 1,07918125 0,8597187 n 7

29-may A 14 10 1,146128036 1 0,87250287

29-may A 14 10 1,146128036 1 0,87250287

28-may B 14 14 1,146128036 1,14612804 1

28-may B 14 10 1,146128036 1 0,87250287

29-may B 15 14 1,176091259 1,14612804 0,974523046

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados de recuperación
relativa presentan desviaciones significativas de la normalidad.

Gráfica

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Probability Plot of R relativa

Normal
99
Mean 0,9180
StDev 0,06154
95 N 7
AD 0,809
90
P-Value 0,018
80
70
Percent

60
50
40
30
20

10

1
0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 1,05 1,10
R relativa

De acuerdo a ello se aplica la prueba no paramétrica de Wilcoxon para los resultados de Recuperación Relativa
(asumiendo variable continua y población simétrica).

Wilcoxon Signed Rank Test: R relativa

Test of median = 1,000 versus median not = 1,000

N for Wilcoxon Estimated

N Test Statistic P Median
R relativa 7 6 0,0 0,036 0,9235

Se rechaza H0. Esto indica que se evidencia la existencia de un sesgo significativo.

13.4.3 MEDIO M ENDO

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

Tabla

Fecha de Control Negativo Muestra Log Control Negativo Log Muestra

Analista R Rmedio 1,000706
siembra Adicionado Adicionada Adicionado Adicionada

28-may A 14 16 1,146128036 1,20411998 1,05059814 s 0,182851

28-may A 16 17 1,204119983 1,23044892 1,02186571 n 8

29-may A 10 12 1 1,07918125 1,079181246

29-may A 12 7 1,079181246 0,84509804 0,783091851

28-may B 8 17 0,903089987 1,23044892 1,362487614

28-may B 13 8 1,113943352 0,90308999 0,810714463

29-may B 12 12 1,079181246 1,07918125 1

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28-may B 13 10 1,113943352 1 0,897711718

Boxplot of Control Negativo Adicionado. Muestra Adicionada

18

16

14
Data

12

10

6
Control Negativo Adicionado Muestra Adicionada

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad.

Probability Plot of Log Control Negativo Adicionado Probability Plot of Log Muestra Adicionada
Normal Normal
99 99
Mean 1,080 Mean 1,071
StDev 0,09241 StDev 0,1478
95 N 8 95 N 8
AD 0,338 AD 0,328
90 90
P-Value 0,400 P-Value 0,425
80 80
70 70
Percent

Percent

60 60
50 50
40 40
30 30
20 20

10 10

5 5

1 1
0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5
Log Control Negativo Adicionado Log Muestra Adicionada

Desde la tabla anterior se obtiene

Rpromedio = 1,000
SR promedio = 0,183
n=8
t = 0,0109
t(0,05; 7) = 2,36

Se acepta H0. Esto indica que no se puede evidenciar la existencia un sesgo significativo.

13.4.4 MEDIO PLATE COUNT

Se advierte en la gráfica de abajo que no existen datos para rechazar

Tabla

Fecha de Control Negativo Muestra Log Control Negativo Log Muestra

Analista R Rmedio 1,056695
siembra Adicionado Adicionada Adicionado Adicionada

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28-may A 16 26 1,204119983 1,41497335 1,17510993 s 0,185488

28-may A 14 11 1,146128036 1,04139269 0,908618106 n 8

29-may A 14 13 1,146128036 1,11394335 0,971918771

29-may A 7 14 0,84509804 1,14612804 1,356207187

28-may B 21 18 1,322219295 1,25527251 0,949367862

28-may B 16 10 1,204119983 1 0,830482024

29-may B 8 8 0,903089987 0,90308999 1

28-may B 9 16 0,954242509 1,20411998 1,261859507

Boxplot of Control Negativo Adicionado

22,5

20,0
Control Negativo Adicionado

17,5

15,0

12,5

10,0

7,5

5,0
Control Negativo Adicionado Control Negativo Adicionado

Se observa en la gráfica de abajo y desde el estadístico “p-value” inserto en ellas que los resultados transformados
no presentan desviaciones significativas de la normalidad.

Probability Plot of Log Control Negativo Adicionado Probability Plot of Log Muestra Adicionada
Normal Normal
99 99
Mean 1,091 Mean 1,135
StDev 0,1689 StDev 0,1599
95 N 8 95 N 8
AD 0,391 AD 0,126
90 90
P-Value 0,289 P-Value 0,972
80 80

70 70
Percent
Percent

60 60
50 50
40 40
30 30

20 20

10 10

5 5

1 1
0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6
Log Control Negativo Adicionado Log Muestra Adicionada

Desde la tabla anterior se obtiene

Rpromedio = 1,057
SR promedio = 0,185

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n=8
t = 0,864
t(0,05; 7) = 2,36

Se acepta H0. Esto indica que no se puede evidenciar la existencia un sesgo significativo.

13.4.5 CONCLUSIÓN
Si bien la cantidad de datos analizados es pequeña puede concluirse que no se evidencias sesgos significativos para
los medios M ENDO y Plate Count. Sin embargo hay evidencias de sesgo significativo para el medio COLIBLUE.
Estas conclusiones se confirmarán o rectificaran en un futuro con nuevas mediciones planificadas.

13.5 INCERTIDUMBRE

13.5.1 APROXIMACIÓN ISO (3.4)

13.5.1.1 DESARROLLO

Aplica a los medios M Coliblue, M Endo y Plate Count

Formulación del mensurando

𝑧
𝑦=𝐹
𝜈
Donde:
y: Estimación cuantitativa en UFC
F: Factor de dilución nominal o verdadero
z: Número de UFC observadas en la placa
𝜈 : Volumen de muestra
Combinación de las fuentes de incertidumbre

𝑤𝑦 = √𝑤𝑝2 + 𝑤𝑧2 + 𝑤𝜈2 + 𝑤𝑡2 + 𝑤𝐹2

Donde:
wp: Incertidumbre relativa del factor de confirmación
wz: Incertidumbre relativa del número de UFC observadas en la placa
wv: Incertidumbre relativa del volumen de muestra
wt: Incertidumbre relativa de lectura
wF: Incertidumbre relativa del factor de dilución nominal o verdadero

Cuantificación de las fuentes de incertidumbre

wp
En los presentes métodos de ensayo microbiológicos no se dispone de método confirmatorio, por ende el término wp
no puede cuantificarse.

wz
Este término puede evaluarse teóricamente en función de la dispersión estadística de Poisson:

1
𝑤𝑧2 =
𝑧
1
Para un recuento de por ejemplo 30 UFC el término = 0,033
𝑧

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wv
Ya que se filtra un volumen de 100 mL de muestra que es medido en el mismo portafiltro (cuya capacidad es de 300
mL) del cual no se posee una incertidumbre de calibración, asumimos que la incertidumbre expandida recae en la
última cifra (unidad) de las dimensiones nominales especificadas de dicho dispositivo y se toma el valor máximo
posible para el dígito mencionado (valor 9)

Para 100 mL de muestra la altura del líquido alcanzará una altura de 76,3 mm

Dimensiones Valores Valor alcanzados al medir Estimación Estimación

(8.1. Ver especificaciones nominales la muestra de 100 mL incertidumbre incertidumbre
del portafiltro) estándar estándar relativa
Radio, r, (mm) 76 38 ±5 0,13
Altura, h, (mm) 229 76,3 ±5 0,066

Por tanto
𝑣𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎𝑓𝑖𝑙𝑡𝑟𝑜 = 𝜋𝑟 2 ℎ

2
𝑢𝑣𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎𝑓𝑖𝑙𝑡𝑟𝑜 2𝑟 2 ℎ
= √( ) +( ) = √0,132 + 0,0662 = 0,14 = 𝑤𝑣
100 𝑚𝐿 38𝑚𝑚 76,3𝑚𝑚

wt
En razón de que se trabajan con recuentos bajos, este término resulta despreciable o nulo.

wF
Este término tomará un valor distinto de cero en caso de diluir la muestra. Por lo que contendrá términos de
incertidumbre relativa de volumen de muestra y volumen final de la dilución.

Incertidumbre combinada estándar

En la práctica la incertidumbre combinada estándar relativa podrá calcularse empleando la siguiente expresión:

1
𝑤𝑦 = √ + 𝑤𝜈2
𝑧

En base a los datos anteriores, por ejemplo para un recuento de 30 UFC el parámetro toma el siguiente valor:

𝑤𝑦 = √0,033 + 0,142 = 0,22

Puede observarse que a recuentos bajos la componente de incertidumbre más importante es la que aporta la
dispersión estadística de Poisson a pesar de poseer un sistema volumétrico (Portafiltros) de relativa alta
incertidumbre de calibración.

Incertidumbre expandida

Debido a la asimetría de las distribuciones de probabilidad de los recuentos en CFU la incertidumbre de medida
correspondiente no puede expresarse como ± U (3.4). Es usual expresar dicha incertidumbre de medida como
incertidumbre estándar. Ver ejemplo siguiente:

13.5.1.2 EJEMPLO DE REPORTE DE LA INCERTIDUMBRE

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Por ejemplo para un recuento de 30 UFC de coliformes totales y una incertidumbre combinada estándar relativa wy =
0,20.

Multiplicar el valor de UFC obtenido por la incertidumbre combinada estándar relativa

30 UFC ∗ 0,20 = 6

Puede expresarse entonces de la siguiente manera

Coliformes totales: 30 UFC por 100 mL

Incertidumbre estándar: 6 por 100 mL

13.5.2 APROXIMACIÓN EMPLEANDO INFORMACIÓN DE PRECISIÓN A TRAVÉS DE RESULTADOS DE

MUESTRAS DUPLICADAS (3.5)

13.5.2.1 MEDIO M COLIBLUE - RECUENTOS A NIVEL MEDIO

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 1 (Duplicados)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.coliblue.relativa) es 0,045.

13.5.2.2 MEDIO M ENDO - RECUENTOS A NIVEL MEDIO

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 1 (Duplicados)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (srepetibilidad.endo.relativa) es 0,040.

13.5.2.3 MEDIO PLATE COUNT - RECUENTOS A NIVEL MEDIO

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 1 (Duplicados)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.pcount.relativa) es 0,12.

13.5.2.4 INCERTIDUMBRE EXPANDIDA

Debido a la asimetría de las distribuciones de probabilidad de los recuentos en CFU la incertidumbre de medida
correspondiente no puede expresarse como ± U (3.4). Es usual expresar dicha incertidumbre de medida como un
intervalo. Ver ejemplo siguiente:

13.5.2.5 EJEMPLO DE REPORTE DE LA INCERTIDUMBRE

Una vez obtenido el valor en UFC (por ejemplo 30 UFC para coliformes totales) realizar los siguientes pasos
a) Convertir el valor en UFC a su logaritmo decimal: 1,477
b) Multiplicar este valor por la incertidumbre combinada relativa obtenida y por 2 para expandir (Por ejemplo wy
= 0,20): 0,59
c) Sumar y restar este valor. Esto produce los dos extremos del intervalo:
Extremo izquierdo: 1,477 – 0,59 = 0,886
Extremo derecho: 1,477 + 0,59 = 2,068

d) A los valores extremos anteriores aplicarles el antilogaritmo para generar un intervalo en UFC y redondear al
número entero anterior si es extremo izquierdo o próximo si es extremo derecho:
Extremo izquierdo: 10 0,886 = 7,7 UFC (7 UFC)
Extremo derecho: 102,068 = 116,9 UFC (117 UFC)

El resultado del ensayo es por lo tanto: 7 - 117 UFC.

Es posible reportar también la incertidumbre combinada estándar relativa del resultado de la medición como
en 13.5.1.2

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13.5.3 APROXIMACIÓN EMPLEANDO INFORMACIÓN DE PRECISIÓN A TRAVÉS DE RESULTADOS DE

ENSAYOS DE RECUPERACIÓN (3.5)

13.5.3.1 MEDIO M COLIBLUE

13.5.3.1.1 RECUENTOS ALTOS

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 2 (Recuperación)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.coliblue.r.H.relativa) es 0,046.

13.5.3.1.2 RECUENTOS BAJOS

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 2 (Recuperación)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.coliblue.r.L.relativa) es 0,049.

13.5.3.2 MEDIO M ENDO

13.5.3.2.1 RECUENTOS ALTOS

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 2 (Recuperación)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.endo.r.H.relativa) es 0,106.

13.5.3.2.2 RECUENTOS BAJOS

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 2 (Recuperación)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.endo.r.L.relativa) es 0,073.

13.5.3.3 MEDIO PLATE COUNT

13.5.3.3.1 RECUENTOS ALTOS

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 2 (Recuperación)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad.pcount.r.H.relativa) es 0,0454.

13.5.3.3.2 RECUENTOS BAJOS

Empleando los resultados de Reproducibilidad (RSD) de “Serie 2 (Recuperación)” de 13.2.3 se tiene que la
incertidumbre estándar combinada relativa (sreproducibilidad. pcount.r.L.relativa) es 0,247.

13.5.3.4 INCERTIDUMBRE EXPANDIDA

Aplica lo expresado en 13.5.2.5

13.5.3.5 EJEMPLO DE REPORTE DE LA INCERTIDUMBRE

Aplica lo expresado en 13.5.2.5

13.5.4 RESUMEN DE INCERTIDUMBRE DE MEDIDA

Incertidumbre
Aproximación Medios estándar
relativa
M Coliblue
0,22 (30
ISO M Endo
UFC)
Plate Count

Precisión / M Coliblue (R. Medios) 0,045

Duplicados
M Endo (R. Medios) 0,04

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Plate Count (R. Medios) 0,12

M Coliblue (R. Altos) 0,046
M Coliblue (R. Bajos) 0,049

Precisión / M Endo (R. Altos) 0,106

Recuperación M Endo (R. Bajos) 0,073
Plate Count (R. Altos) 0,0454
Plate Count (R. Bajos) 0,247

13.5.5 CONDICIONES DE ACEPTACION

Aplica lo expresado en 13.2.4

13.5.6 CONCLUSION
Aplica lo expresado en 13.2.5

13.6 SENSIBILIDAD

13.6.1 DESARROLLO
Empleando los resultados obtenidos en 7.5 se obtuvo lo siguiente para cepa Klebsiella

Cambio Cambio Cambio

Fecha de color Fecha de color Fecha de color
siembra Analista Fluorescencia siembra Analista Fluorescencia siembra Analista Fluorescencia
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may A + - 28-may A + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -
27-may B + - 28-may B + - 29-may A + -

Puede observarse que, para un número total de determinaciones n=60, la fracción del número total de cultivos
positivos correctamente asignados para coliformes totales es del 100%

Empleando los resultados obtenidos en 7.5 se obtuvo lo siguiente para cepa E Coli

Cambio Cambio Cambio

Fecha de color Fecha de color Fecha de color
siembra Analista Fluorescencia siembra Analista Fluorescencia siembra Analista Fluorescencia

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27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +

27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may A + + 28-may A + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +
27-may B + + 28-may B + + 29-may A + +

13.6.2 CONDICION DE ACEPTACION

No disponible

13.6.3 CONCLUSIONES
La sensibilidad para este ensayo (IE-25) cualitativo resulta óptima.

13.7 ESPECIFICIDAD

13.7.1 DESARROLLO
Empleando los resultados obtenidos en 7.6 se obtuvo lo siguiente:

Cambio Cambio Cambio

Fecha de color Fecha de color Fecha de color
siembra Analista Fluorescencia siembra Analista Fluorescencia siembra Analista Fluorescencia
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may A - - 28-may A - - 29-may A - -
27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -
27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -
27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -

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27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -

27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -
27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -
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27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -
27-may B - - 28-may B - - 29-may A - -

Puede observarse que, para un número total de determinaciones n=60, la fracción del número total de cultivos
negativos correctamente asignados para coliformes totales es del 100%

13.7.2 CONDICION DE ACEPTACION

No disponible

13.7.3 CONCLUSION
La sensibilidad para este ensayo cualitativo resulta óptima.

14. CONCLUSIONES FINALES

De acuerdo a los parámetros de desempeño valorados los métodos de ensayo evaluados se ajustan a propósito.
Tareas para el futuro.

15. CRITERIOS DE REVALIDACIÓN

Se establecen los siguientes criterios para revalidar los métodos de ensayo
 Cambio o ingreso de nuevos analistas.
 Cambio de incubadoras.
 Cambio de fabricante de medios de cultivo.

Docente: Lic. Sergio Chesniuk. [email protected] | Skype: Sergio.chesniuk | www.chesniuk.com