AGAR MITIS SALIVARIUS Composición Se parte disolviendo la solución en agua destilada y se
esterilizó a 121ºC durante 15 minutos, posterior a ello, se
añadió 1ml de solución de Bacitracina con una concentra-
Descripción: S. mitis, S. salivarius y las especies de entero- Composición (g / l): Digerido pancreático de caseína 6,0 ción de 200U/ul, además se agregó solución de telurito de
cocos son normales en la flora microbiana humana sin Peptona proteosa N°3 9,0 Peptona proteosa 5,0 Dextrosa potasio al 1%. Con el objeto de que el medio sea más se-
embargo, los estreptococos pueden causar cariogénesis, 1,0 Sacarosa 50,0 Fosfato dipotasio 4,0 Azul tripan 0,075 lectivo se agregó sacarosa al 15%. Todos los volúmenes
endocarditis infecciosa y bacteriemias. Mientras que las Cristal violeta 0,0008 Agar bacteriológico 15,0 Suplemento presentados están ajustados para la preparación de 1 Litro
especies de enterococos causan infecciones del tracto (ml): Solución de telurito de K 1%: 1,0 pH final del medio de Agar Mitis Salivarius .
urinario, infecciones en heridas y bacteriemia. Estos orga- de cultivo listo para su uso: 7,0 ± 0,2.
nismos se encuentran usualmente en la piel y en membra-
Preparado: Según especificaciones del fabricante y según Se coloca la distribución del medio del agar mitis salivarius
nas mucosas. Este medio facilita el aislamiento de S. mitis
norma ISO 11133:2014. en las cajas petri para su almacenamiento y posterior
(Streptococcus viridans), S. salivarius (estreptococos no
siembra con el Streptococcus mutans .
hemolíticos) y enterococos desde muestras mixtas. En Conservación: Conservar en un lugar fresco y seco de 8 a
Almacenamiento: Para la preparación del medio de pre-
este medio las peptonas son la fuente de carbón, nitró- 12 °C hasta la fecha de vencimiento. No congelar.
servación de las cepas se utilizó caldo cerebro-corazón y
geno, vitaminas y minerales. La dextrosa y sacarosa pro-
Control de calidad: Según especificaciones del Standard se le adicionó el glicerol, con una concentración final del
porcionan los carbohidratos, mientras que el cristal violeta ISO 11133:2014. Resultados esperados de 18 a 48 horas 20%
y el telurito de potasio inhiben la mayoría de los bacilos de incubación a 35 ± 2 °C en ambiente con 5-10% CO2. Recolección de la muestra: sin desayuno, sin cepillado
Gram (-) y bacterias Gram (+) con excepción de los estrep-
dental y sin el uso de enjuague bucal, debido a que los
tococos.
niveles más altos de microorganismos se consiguen por lo
Composición (g / l): Digerido pancreático de caseína 6,0 Croma: general en las mañanas , justo después de despertar y
Peptona proteosa N°3 9,0 Peptona proteosa 5,0 Dextrosa
antes de cepillarse los dientes (durante el sueño disminu-
1,0 Sacarosa 50,0 Fosfato dipotasio 4,0 Azul tripan 0,075
ye el flujo salival y aumenta la concentración de microor-
Cristal violeta 0,0008 Agar bacteriológico 15,0 Suplemento
ganismo ), se recomienda no tomar las muestras luego del
(ml): Solución de telurito de K 1%: 1,0 pH final del medio
cepillado dental o justo después de la comida.
de cultivo listo para su uso: 7,0 ± 0,2.
Es necesario un 1ml de saliva .
Se colocan las muestras en cooler para su transporte, se
comprueva que los frascos se encuentren bien cerrados y
se procede a envolverlos en papel de toalla absorbente,
Preparado: Según especificaciones del fabricante y según transporte se realiza a temperatura ambiente con un ran-
norma ISO 11133:2014. go de tiempo de 4 + 1h.
Conservación: Conservar en un lugar fresco y seco de 8 a Recepción de muestras y con una pipeta se siembra 1ml
12 °C hasta la fecha de vencimiento. No congelar. de la muestra de saliva en el Agar Mitis Salivarius enrique-
cido (Bacitracina + Telurito.+ Sacarosa)
Control de calidad: Según especificaciones del Standard
Rotulado del medio y posteriormente se incubaron las
ISO 11133:2014. Resultados esperados de 18 a 48 horas
muestras en una atmósfera de CO2 a 37º C, por 48 horas
de incubación a 35 ± 2 °C en ambiente con 5-10% CO2.
las cajas Petri f son analizadas mediante visualización di- Se usa la técnica para observar la inhibición In Vitro de S. Mu-
recta y se basó en la morfología de las colonias, observán- tans en medios que contengan Edulcorantes Xilitol, Sorbitol,
dose colonias convexas, azules, opacas con un centro de Sucralosa y combinaciones.
color oscuro, firmes muy adherentes al medio de culti- Cada solución de edulcorante es descontaminado con un fil-
vo . tro de 0,45um para su posterior uso.
Luego de ser identificadas se procede a la confirmación
mediante tinción GRAM para la identificación morfológica, Se realiza un medio para el ensayo con edulcorantes, el cual
y se observan cocos GRAM positivos en cadenas. 30 La contenía proteosa - peptona (2,25g), cysteína (0,1g) y extrac-
prueba de la catalasa resultó negativa para las 35 mues- to de levadura (0,5g), en un volumen final de 100ml. Se esteri-
tras. Se procede con las pruebas de fermentación de Ma- lizó por 15 min a 120ºC
nitol y Sorbitol, las cuales son positivas mediante una Se dispensan 5 mL del medio estéril en tubos de 10ml, se
reacción colorimétrica. agregó cada edulcorante al 5% y 100 μL de suspensión bacte-
riana .
Se incuba a 37º en condiciones de anaerobiosis, realizándose
mediciones con el espectrofotómetro Eppendorf BioPhoto- AGAR MITIS
meter® D30 con filtro de 600nm a las 48 horas .
SALIVARIUS
Eliminación de muestras: Los residuos tanto líquidos como
sólidos generados durante la experimentación en los labora-
torios deberán descontaminarse antes de su eliminación. Los
residuos de las muestras se depositarán en contenedores con
lejía o hipoclorito sódico al 5% por lo menos 2h para la inacti-
vación de los agentes biológicos contaminantes. El tratamien-
to de los desechos infecciosos consistirá en la inactivación de
la carga bacteriana.
Almacenamiento de Streptococcus mutans: Una vez iden-
Todos aquellos materiales utilizados durante la fase de labo-
tificadas las cepas de Streptococcus mus se almacenan en
ratorio, para este fin las muestras son sometidas a esteriliza-
el caldo de preservación (BHI+GLICEROL) a una tempera-
ción mediante autoclave para poder ser reutilizado, en el caso
tura de -80ºC
de material no reutilizable se colocará en fundas rojas para
ser desechados con la adecuada gestión ambiental.
Bibliografía:
Orellana García, R. C. (2016). Inhibición del streptococcus mu-
tans aislado de la saliva de niños (as) de 6 a 7 años de la Uni-
dad Educativa Milenio Bicentenario, en medios que contengan
edulcorantes artificiales xilitol, sorbitol y sucralosa. Estudio in
vitro (Master's thesis, Quito: UCE).
