UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE
HUAMANGA
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALURGÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
PRACTICA N° 07
Numeración de Microorganismos aerobios viables
ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL (BI-341)
DOCENTE DE PRACTICA: Mg. ANDIA AYME, Vidalina
ALUMNOS:
NOMBRE
CARDENAS GOMEZ, Dante Maggiber
GOMEZ GALVEZ, Yohel
OCHOA CUYA, Hasser Rodny
RODRIGUEZ HUACCACHI, Pool Pavel
VARGAS ARANGO, Cesar
DIA Y HORA DE PRÁCTICA: miércoles (10:00 -1:00 pm)
AYACUCHO – PERÚ
2020
FUNDAMENTO
Este método se basa en que cada célula bacteriana presente en la muestra de alimento,
puede desarrollar en un medio de cultivo sólido formando colonias. El número de
bacterias aerobias mesófitas presente en los alimentos, es uno de los indicadores
microbianos de calidad de los mismos; no es válido para alimentos fermentados como
quesos, leches fermentadas, ciertos embutidos, productos madurados, yogurt,
mantequilla.
Este indicador es útil para:
Verificar la eficacia de los sistemas de limpieza y desinfección y averiguar la
temperatura a que fueron mantenidos los alimentos durante los procesos de
tratamiento industrial, transporte y almacenamiento.
Tener una idea sobre la alteración insuficiente de los alimentos, de su probable
vida útil, de la descongelación no controlada de los alimentos congelados y de
los usos de temperatura de refrigeración inadecuados en alimentos refrigerados.
Evidenciar las causas de contaminación en el proceso de elaboración de los
alimentos.
II. MATERIALES
Los materiales necesarios para la preparación y dilución de la muestra.
Agar de Recuento.
Placas petri estériles.
Pipetas bacteriológicas estériles de 1 ml., 5 ml., y 10 ml.
Baño María
Incubadora
Contador de colonias.
III. PROCEDIMIENTO:
Preparar y hacer las diluciones necesarias de la muestra.
Trasvasar mediante una pipeta estéril 1 ml. de cada dilución 10-1 , 10-2 , 10-3 , 10-
4
y 10-5 , por duplicado a placas estériles.
Incorporación más o menos 15 ml. de agar fundido a temperatura de 45°C a cada
placa dentro de los 10 minutos de preparado la dilución.
Mezclar en forma inmediata con movimientos de vaivén y rotación de la placa.
Una vez solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a temperatura de 37
°C. por 24 a 48 horas.
Incubar a 37°C POR 24 A 48 HORAS
Luego hacer el recuento.
IV. RESULTADOS:
Contar las UFC en cada placa de dilución 10-7
85+83+75/3 = 81 x 107 UFC/g.
94+86+67= 82 x 107 UFC/g.
84+81+76= 80 x 107 UFC/g.
Reportar en UFC/g o ml
Problemas
1. Calcule el número de UFC/mL de una muestra si al hacer diluciones y sembrar en placa 500 l
de cada una se obtienen los siguientes resultados.
Dilución 10-6: 1021 – 1003 – 899 = (1021+1003+899)/3 = 97x10-6 UFC/ml
Dilución 10-7: 88 – 91 – 75 = (88+91+75)/3 =85x10-8 UFC/ml
Dilución 10-8: 10 - 24 – 7 = (10+24+7)/3 =17x10-8 UFC/ml
2.- Calcule el número de UFC/mL de un cultivo de Escherichia coli, incubado durante 24 horas
en medio TSB si al hacer diluciones y sembrar en placa 200 l de cada una de las diluciones en
tres placas por dilución, se obtienen los siguientes resultados.
dilución Colonias contadas Colonias contadas Colonias contadas
En placa 1 En placa 2 En placa 3
10-5 923 1256 857
10-5 75 95 102
10-7 6 11 9
10-8 2 1 0
Dilución 1, con los tres placas.
923+1256+857 /3 =10x10-5 UFC/ml
Dilución 2, con los tres placas.
75+95+102 /3 = 91x10-6 UFC/ml
Dilución 3, con los tres placas.
6+11+9 /3 =9x10-8 UFC/ml
Dilución 4, con los tres placas.
2+1+0 /3 = 1x10-8 UFC/ml
Referencias sobre el tema.
[Link]
Preparación y dilución de las muestras de leche cruda El análisis de las muestras se realizó lo
más pronto posible después de la llegada al laboratorio, por lo contrario, se refrigeraron a 4
±1°C si es que no pudo ser estudiada inmediatamente. Se agregó 50 mL de leche cruda a un
frasco de vidrio estéril y vacío, luego se adicionó 450 mL de agua peptonada, de este modo
obtuvimos la dilución 10-1. Se homogeneizó la mezcla y se procedió a realizar las diluciones.
Medimos 1mL de la dilución 10-1 evitando la formación de espuma y pasamos a uno de los
blancos de dilución conteniendo 9 mL de agua peptonada. Agitamos la dilución y las siguientes
enérgicamente 25 veces en un arco de 30 cm con ayuda de un agitador de tipo vórtex.
Repetimos esta operación utilizando las diluciones progresivamente más elevadas para
preparar las diluciones 10-1 ,10-2, 10-3 , 10-4 , 10-5 .
1.2. Método de cálculo para recuento bajo: caso en el que una placa (muestra para
análisis o suspensión inicial o primera dilución) contiene menos de 10 colonias
Si la placa contiene menos de 10 colonias, pero como mínimo 4, el resultado se
calcula siguiendo el caso general y se expresa como: “el número estimado de
microorganismos x por mililitro (productos líquidos) o por gramo (resto de
productos)”.
Si el resultado total oscila entre 1 y 3, la precisión del análisis es demasiado baja y
el resultado debe expresarse como: “hay microorganismos presentes, pero a un
nivel inferior a (4xd) por gramo o ml”.
Ejemplo: Si la dilución inoculada es 10-1: Hay microorganismos presentes,
pero a un nivel inferior a 40 UFC/g ó ml
1.3. Método de cálculo para el caso en el que la placa (muestra para análisis,
suspensión inicial o primera dilución) no contiene colonias
Si la placa que contiene la muestra para análisis (productos líquidos) o la suspensión
inicial (resto de productos), o la primera dilución inoculada o escogida no contiene
colonias, el resultado se expresa de la siguiente manera:
“Menos de 1/d microorganismos por mililitro” (productos líquidos) o “menos de 1/d
microorganismos por gramo” (resto de los productos).
Donde d es el factor de dilución de la suspensión inicial, o la primera dilución inoculada
o escogida (d = 100 = 1 cuando se inocula directamente la muestra para análisis).
Ejemplo: - Si la dilución más concentrada sembrada fue: 10-1 < 10 UFC /ml o g
Microorganismos aerobios mesófilos 19 - Si la dilución más concentrada sembrada fue:
10-2 < 100 UFC /ml o g
1.4. Método de cálculo para el caso en el que la placa (muestra para análisis,
suspensión inicial o primera dilución) contiene más de 300 colonias
Si el recuento de colonias en todas las placas de todas las diluciones es incontable,
mayor a 300, el resultado se expresa de la siguiente manera: “Más de 300/d
microorganismos /g ó ml” Donde d es la dilución correspondiente a la última dilución
escogida.
Ejemplo: - Si la última dilución (más diluida) sembrada fue: 10-3 > 300.000
microorganismos / ml o g > 3x105 UFC/ml o g
