EL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO El PA requiere que cada una de las operaciones unitarias

Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial involucradas sean validadas independientemente y esta
Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente validación deberá confirmarse en conjunto. Solamente deberá
proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de ser aplicado a aquellos productos que no resistan la ET. El
mayo y hasta el 30 de junio de 2015, lo analicen, evalúen y NAE proporcionado por el PA depende principalmente de
envíen sus observaciones o comentarios en idioma español y dos factores: la tecnología empleada y el personal que lleva a
con el sustento técnico suficiente ante la CPFEUM, sito en cabo el proceso.
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ESTERILIZACIÓN TERMINAL
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Consiste en someter un producto que ya se encuentra en su
envase primario, y que se ha llenado en un ambiente
ESTERILIZACIÓN controlado a fin de disminuir la biocarga y partículas, a un
proceso de esterilización, el cual puede llevarse a cabo
mediante la exposición a:
GENERALIDADES
 Calor húmedo.
Este capítulo aplica a los procesos que podrán emplearse, sin
 Radiación ionizante.
ser limitativo, en la obtención de materiales, componentes,
 Gases esterilizantes.
materias primas, dispositivos médicos y productos far-
macéuticos que requieran ser estériles, incluyendo los Para estos tres procesos, los factores más importantes son los
artículos necesarios para llevar a cabo las pruebas analíticas. siguientes:
Asimismo, se presentarán las operaciones unitarias para la 1. Control de la biocarga en el producto que ingresa al
obtención de los productos que deban ser estériles. Los proceso de ET. Incluye también la demostración de la
procesos de fabricación deberán seguir las Buenas Prácticas ausencia de microorganismos resistentes en la flora
de Fabricación vigentes en nuestro país. propia del proceso de fabricación hasta el envase
primario; y para el caso de las preparaciones
Entendemos por esterilidad la ausencia de todo organismo
parenterales, la ausencia de endotoxinas bacteria-
viable de cualquier índole, en un producto que ostenta la
nas, así como de las bacterias que las producen.
cualidad de ser estéril. Esta es una condición absoluta.
2. Desarrollo de los ciclos de ET adecuados para la
Cuando hablamos de la probabilidad estadística que cada
obtención del producto estéril, y su correspondiente
unidad tiene de serlo de un lote de producto estéril, entonces
validación, de acuerdo a los criterios que se presen-
hablamos del Nivel de Aseguramiento de la Esterilidad
tarán más adelante en la sección correspondiente a
(NAE) del proceso.
cada proceso de ET.
Actualmente, los productos estériles pueden obtenerse a
Estos procesos deben ser capaces de proporcionar un NAE
través de dos metodologías básicas: Esterilización Terminal
≥ 1 x 10-6, valores menores a éste deberán ser justificados;
(ET) y Procesamiento Aséptico (PA). Cada una de estas dos
además, no producir ningún daño al producto, ya sea en su
metodologías tiene sus propios caminos para llegar al
envase primario o en cualquiera de sus características de
objetivo común de la obtención de un producto libre de
calidad, incluida la estabilidad del mismo.
contaminantes viables.
Dado que la esterilidad de un producto no puede garantizarse
mediante pruebas, esta debe asegurarse por medio de la PROCESO ASÉPTICO (PA)
aplicación de un proceso de producción correctamente
validado. Es indispensable investigar a fondo el efecto del La ET es el procedimiento de elección para el logro de la
método de esterilización seleccionado sobre el producto, esterilidad de los productos que deben ser estériles, pero no
incluyendo su envase primario, para asegurar su efectividad, todos ellos resisten las condiciones de ésta. Debido a esta
así como también la integridad del producto. El situación se ha desarrollado el Procesamiento Aséptico, cuya
procedimiento de esterilización deberá validarse antes de ser finalidad es lograr y mantener la esterilidad de este grupo de
implementado para la producción comercial. La ET deberá productos. Éste implica una cantidad mucho mayor de
ser el método de elección en aquellos casos en los que el variables que deben ser controladas, a fin de asegurar su
producto involucrado lo resista. El proceso de ET que deberá efectividad, razón por la cual, también lleva implícita una
estar validado y mantenido bajo control, nos permite mayor cantidad de riesgos, por lo que se requiere un control de
alcanzar el NAE que sea requerido con base en un análisis de proceso mucho más estricto aún que la ET. El PA solo puede
riesgo. aplicarse a productos que no resistan la ET.

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Este se compone de varias etapas que deben llevarse a cabo mayor presión positiva en los cuartos y zonas de
bajo condiciones asépticas, las cuales aseguren que la posible procesamiento aséptico; empleo de flujo de aire unidireccional
contaminación microbiana y/o de partículas no viables que en las zonas en las que el producto o cualquiera de sus
pudiera ingresar al producto y/o sus componentes, incluyendo componentes se expongan al ambiente; cumpliendo con lo
su envase primario, estén bajo estricto control y, por establecido en la monografía de HVAC, y un programa
consiguiente impidan su ingreso por cualquier vía. correctamente documentado de limpieza y sanitización. Se
Desde el diseño del PA, deben aplicarse los principios de debe emprender el entrenamiento adecuado del personal en el
gestión de riesgos, con la finalidad de asegurar que se ha manejo de técnicas asépticas, incluyendo el proceso de
conseguido un NAE aceptable. vestimenta para que, por ejemplo, los overoles, batas, guantes
Las pruebas de esterilidad aplicadas a los productos y otras protecciones para el cuerpo cubran sustancialmente
fabricados con la tecnología actual de PA no pueden todas las superficies de piel y mucosas expuestas.
proporcionar una evaluación suficiente. El método de
monitoreo de unidades individuales usado actualmente para TECNOLOGÍAS ASÉPTICAS ACTUALES PARA PA
las simulaciones de proceso no ha mostrado una correlación Otras tecnologías adecuadamente operadas y validadas, las
directa con productos terminados contaminados. Las pruebas cuales han sido diseñadas para mitigar o eliminar la
destructivas de esterilidad para producto terminado se intervención humana, principal factor de contaminación en
pueden aplicar solamente al examen de un porcentaje muy el PA, tales como los Sistemas de Barreras de Acceso
pequeño de un lote y, por tanto, sólo son capaces de detectar Restringido (RABS), formado-llenado-sellado, soplado-
lotes con un número muy alto de unidades contaminadas. llenado-sellado, y la tecnología de aisladores pueden proveer
Esta sección proporciona una revisión de los principios que ambientes mejorados en los cuales el PA puede ser
deben aplicarse para la producción de artículos procesados realizado. El uso de aisladores y procesos altamente
asépticamente a fin de presentar un riesgo mínimo de automatizados con intervenciones muy poco frecuentes
contaminación microbiana en cada lote de producto terminado. durante el proceso, mitigan el riesgo de contaminación y
Los productos procesados asépticamente se fabrican partiendo permiten una mayor flexibilidad en el diseño de la
de componentes que han sido esterilizados mediante uno de Simulación del Procesamiento Aséptico (SPA) por lo que
los procesos descritos anteriormente en este capítulo. Por respecta, por ejemplo, al número de viales necesarios para la
ejemplo, el producto a granel, si es un líquido filtrable, puede simulación del llenado, su duración, y la representación para
haber sido esterilizado por filtración. Los envases primarios cambios múltiples de turnos, entre otros. El riesgo relativo y
vacíos probablemente estén esterilizados por calor o por gases, los aspectos propios de estas tecnologías, deben ser tomados
los viales de vidrio por calor seco y los tapones de caucho por en consideración cuando se evalúa el diseño de los estudios
calor húmedo. de SPA. La validación de los “sistemas de barrera” o de los
Los requisitos de diseño, validación y mantenimiento “sistemas abiertos de barrera de acceso restringido” no están
adecuados para una instalación de PA tienen como objetivo considerados aquí y deben estar validados, al igual que todo
principal: (1) la provisión de personal operativo calificado proceso, con base en la gestión de los riesgos que presentan.
principalmente en las técnicas de trabajo bajo condiciones
asépticas, y con el equipo y ropa apropiados. (2) un medio SISTEMAS DE BARRERA DE ACCESO
ambiente con aire adecuadamente controlado por lo que RESTRINGIDO (RABS)
respecta a partículas viables y no viables, temperatura y Estos sistemas limitan el acceso del personal y los materiales
humedad relativa, diseñado adecuadamente y que permita, al ambiente crítico mediante sistemas mecánicos y de
además, el mantenimiento eficaz de las unidades de barrera. Estos tienen como finalidad principal reducir de
suministro de aire. manera sustancial la contaminación transportada por el
El ambiente deseado se puede lograr gracias al alto nivel de elemento humano al ambiente aséptico. Estos sistemas son
tecnología de filtración de aire, lo que contribuye al aporte sujetos de una desinfección profunda antes de su uso. Los
de este elemento con la calidad microbiológica y de partículas sistemas RABS cerrados a menudo pueden descontaminarse
requerida. Las instalaciones incluyen sistemas de barreras y operarse de manera esencialmente idéntica a los aisladores.
primarias (en las cercanías del artículo expuesto) y secundarias
en las que se lleva a cabo el procesamiento aséptico. FORMADO-LLENADO-SELLADO (FFS) Y
Para el diseño adecuado de una instalación de procesamiento SOPLADO-LLENADO-SELLADO (BFS)
aséptico se deben considerar características tales como El PA llevado a cabo en tecnologías FFS y BFS implica
acabados sanitarios y servicios auxiliares ocultos; esclusas de algunas condiciones únicas del proceso, las cuales deben
cambio de vestimenta con espacio suficiente para el personal considerarse para su validación. En estos casos, las considera-
y almacenamiento de vestimenta estéril; separación adecuada ciones para la simulación del PA deben incluir, al menos:
entre las áreas donde el personal se prepara, y las áreas de  La posibilidad de detectar la contaminación en los
procesamiento aséptico final, con disponibilidad, donde sea contenedores de plástico opacos o transparentes.
necesario, de dispositivos tales como esclusas de aire y duchas  Las intervenciones que impliquen manipulaciones
de aire, diferenciales de presión adecuadas entre salas con manuales en las áreas de formado, cortado y

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 ajuste/remoción, área de exposición de las boquillas de  La integridad del sistema envase-cierre para asegurar la
llenado, conexiones asépticas, y manipulaciones conservación de la esterilidad del producto una vez
posteriores a la filtración. liberado.
 Afectación de la operación de eliminación de los  La calificación de todo el personal que ingresa al área
sobrantes del envase en la generación de fugas después crítica, incluyendo tanto al personal de base, como al
del llenado. personal que ingresa en forma eventual, como pueden
 Características de formación de espuma del medio de ser los mecánicos, inspectores, microbiólogos, etc., en
cultivo que podría afectar el sellado de los cuanto a su técnica de vestido, el comportamiento
contenedores. dentro del área, y el manejo aséptico de los materiales.
 Los volúmenes de llenado, incluyendo volúmenes Este punto, por ser uno de los más importantes, se trata
menores al normal, que pueden afectar la formación del en la siguiente sección.
contenedor.
 El efecto en el medio de cultivo de la exposición al PERSONAL
calor y tiempo de duración del contenedor abierto. Como se ha mencionado anteriormente un elemento
 El efecto sobre la integridad del envase posterior al importante para el éxito del procesamiento aséptico es el
llenado al separar las unidades. personal, por ser una posible fuente de contaminación para el
producto. De allí la necesidad de establecer medidas de
AISLADORES control específicas para este, las cuales van desde el
Los aisladores eliminan el acceso directo del personal al establecimiento de indumentaria y equipos de protección
ambiente crítico mediante sistemas definidos mecánicos y de específicos y el establecimiento de tiempos de permanencia
barrera. Están diseñados para eliminar la contaminación en las áreas de procesamiento aséptico, hasta la necesidad de
transportada por el elemento humano hacia el medio aséptico que todo el personal involucrado esté capacitado, entrenado
en donde el producto estéril, los contenedores, los cierres y el y calificado.
equipo están expuestos. Los aisladores se descontaminan y el El personal que labore en las áreas de fabricación de PA
ingreso del material se lleva a cabo mediante el empleo de debe recibir capacitación específica en los procedimientos
sistemas de transporte validados. Debe considerarse la que empleará en sus actividades, entrenamiento detallado
operación de estos sistemas al diseñar la simulación del llenado. para realizar sus funciones específicas y, posteriormente, ser
calificado a fin de contar con evidencia documental que
OPERACIONES UNITARIAS IMPLICADAS EN EL PA demuestre que es capaz de llevar a cabo sus funciones.
Dado que el PA se compone de la integración de múltiples Para las operaciones asépticas, la capacitación y entrena-
elementos que, en su conjunto, tienen como finalidad mitigar miento debe incluir técnicas de vestido y desvestido,
o eliminar la posible contaminación que puede ingresar tanto operaciones en áreas limpias, entrenamiento básico en
al ambiente crítico, como al producto, cada una de las microbiología y operaciones específicas para las áreas
siguientes operaciones debe estar previamente validada, limpias, capacitación para las intervenciones en áreas
antes de iniciar el PA: limpias, Buenas Prácticas de Fabricación, procedimientos
 El área, incluyendo los acabados sanitarios, las para el desempeño o comportamiento dentro de las áreas de
condiciones ambientales “as-built”, estática y dinámica fabricación, técnicas asépticas, así como las funciones
de la misma, los materiales de construcción, los específicas que realicen tales como filtración, armado y
recubrimientos, la colocación de la maquinaria dentro desarmado de maquinaria y equipo, ajustes, reparaciones,
del área, sus materiales de construcción, las mantenimiento, limpieza, sanitización, operación, manipula-
instalaciones, los servicios, etc. ción aséptica de los componentes y del producto, la
 El Sistema HVAC, incluyendo los módulos de flujo transferencia, el muestreo, el monitoreo y otras
unidireccional cuya validación se describe en la sección intervenciones inherentes al PA, incluidos los trabajos de
correspondiente de este capítulo. mantenimiento correctivo y/o preventivo.
 Los sistemas críticos involucrados en el PA (por Para el entrenamiento inicial del personal, el ingreso a las
ejemplo: agua, aire comprimido, nitrógeno). áreas de fabricación debe ser estrechamente supervisado y
siempre deben estar acompañados de otra persona que tenga
 La esterilización del producto y demás componentes,
incluyendo el envase primario, procesos que deben su calificación vigente, así mismo, se debe evitar que su
ingreso se efectue durante las etapas críticas del PA.
validarse de acuerdo a la sección correspondiente en
Una vez efectuada la capacitación y entrenamiento
este mismo capítulo. En el caso de esterilización
satisfactoriamente debe efectuarse la calificación del
llevada a cabo por terceros, la responsabilidad de su
personal. Los requisitos para la calificación del personal de
validación es del fabricante del producto, así como de
las áreas asépticas deben estar escritos en un procedimiento
la conservación de la misma durante el transporte de las
instalaciones del tercero hasta el ingreso al ambiente y deben contar con registros de los resultados que avalen la
calificación del mismo.
crítico del fabricante.

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La calificación inicial del personal que labore en las áreas de correctivas significativas y eficaces. Es responsabilidad del
PA debe incluir pruebas para demostrar su dominio de la fabricante desarrollar, iniciar, implementar y documentar tal
técnica aséptica, vestido/desvestido que debe evidenciarse al programa de control ambiental microbiológico.
realizar con éxito una prueba de manipulación y movimientos Aunque se analizan las recomendaciones generales para
dentro de las áreas limpias, que por decisión del establecimiento programa de control ambiental, es imperativo ajustarlo a las
podrá ser grabada a fin de observar el comportamiento y instalaciones y condiciones específicas.
movimientos durante las operaciones. La demostración final El control de partículas totales en ambientes controlados,
del éxito de la capacitación y el otorgamiento de la califica- incluso mediante el uso continuo de instrumentos electrónicos,
ción al personal será el haber participado exitosamente en no suministra información acerca del contenido microbiológico
una SPA realizando la mismas funciones o actividades que del ambiente. La limitación básica de los contadores de partícu-
van a efectuar durante la producción real. las es que miden partículas de 0.5 micras o mayores. Si bien
Partiendo de dicha premisa únicamente podrán ingresar y los microorganismos del aire no son células individuales o
laborar en áreas asépticas el personal que haya cumplido que flotan libremente, con frecuencia se asocian a partículas de
satisfactoriamente su calificación. El personal debe ser 10 a 20 micras. Los conteos de partículas así como los conteos
evaluado en técnicas asépticas por lo menos una vez al año, microbianos dentro de ambientes controlados varían según la
mediante su participación en un estudio de SPA. localización del muestreo y las actividades que se desarrollan
El estado calificado del personal se pierde si presenta uno o durante el muestreo. El control de partículas no viables y de
más de los siguientes puntos: microorganismos en el ambiente es una función de control
 Si al efectuar la evaluación de técnica aséptica como importante para satisfacer los requisitos de cuartos limpios.
parte del estudio de llenado simulado existe falla Los programas de control microbiano en ambientes
inherente a su desempeño. controlados deben evaluar la eficacia de las prácticas de
 Si llevan a cabo operaciones o trabajos que se consideren limpieza y desinfección realizadas por el personal que
inaceptables en las áreas de PA. podrían afectar la biocarga del ambiente controlado. El
 Si falla en las pruebas de ejecución de técnicas de vestido control microbiano independientemente del diseño del
y desvestido. sistema, no requiere forzosamente identificar y cuantificar
 Si su tendencia de resultados microbiológicos es ascendente. todos los microorganismos presentes en los ambientes
El personal que pierda el estado calificado no podrá ingresar controlados. Sin embargo, el control ambiental de rutina,
nuevamente a las áreas asépticas hasta ser reentrenado e debe proporcionar información suficiente para determinar
implementar las acciones correctivas necesarias para su que el ambiente controlado se encuentra dentro de control de
reincorporación al PA. acuerdo a especificaciones.
Todo el personal que labore en las áreas de PA, aun cuando ya El control microbiológico ambiental y el análisis de datos
esté calificado debe encontrarse bajo un programa integral de por parte del personal calificado, permite mantener un estado
capacitación y adiestramiento continuo, dichas actividades de control en cuartos limpios y ambientes controlados. Debe
deben encontrarse establecidas en procedimientos y deben realizarse un muestreo del ambiente durante la operación
incluir entre otros: conceptos básicos de microbiología, técnicas normal para recopilar datos significativos. El monitoreo
de vestido, reglas de higiene y otros temas específicos a sus microbiológico debe realizarse cuando se encuentre el perso-
actividades. nal operativo completo, los materiales estén en la zona de
Como parte del estudio de llenado simulado debe efectuarse trabajo y se estén desarrollando las actividades de proceso.
monitoreo del personal de su uniforme y guantes en uso, El control microbiológico de cuartos limpios y algunos otros
también podrán efectuarse monitoreos adicionales como ambientes controlados, cuando corresponda, debe incluir moni-
parte de la calificación del personal, las particularidades de toreo de: aire ambiental, aire comprimido que se emplea en
dicha actividad son abordadas en la sección de monitoreo. la zona crítica, superficies, equipos, recipientes de desinfección,
El personal que labora en áreas asépticas debe ser monitoreado pisos, paredes y la vestimenta del personal (por ejemplo:
al menos cada seis meses para infecciones de piel y mucosas. guantes, overoles). El objetivo del programa de control
Además, debe ser adiestrado para dar aviso cuando padece ambiental es obtener estimaciones representativas de la biocarga
alguna enfermedad de esta naturaleza y deberá ser retirado del del ambiente. Cuando se tengan los datos recopilados y analiza-
área aséptica en cuanto informe de su condición hasta que se dos, el personal capacitado debe evaluar las tendencias. Si
demuestre que se ha recuperado completamente del padeci- bien es importante revisar los resultados ambientales con la
miento. Para este fin, el personal involucrado en el PA debe frecuencia recomendada y especificada, también hay que
incluir en su entrenamiento el dar aviso a su supervisor de cual- revisar los resultados durante periodos prolongados para
quier padecimiento en cuanto lo perciba o le sea detectado. determinar tendencias. Las tendencias pueden visualizarse
mediante la construcción de gráficas de control estadístico que
CONTROL AMBIENTAL incluyen niveles de alerta y de acción. El control micro-
Un programa de control ambiental debe ser capaz de detectar biológico de ambientes controlados puede evaluarse en parte
oportunamente una desviación adversa de las condiciones mediante estos datos de tendencias. Deben emitirse informes
microbiológicas de modo tal que permita tomar acciones o resúmenes periódicos para alertar al gerente responsable.

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 Cuando se exceda el nivel microbiano especificado de un Después de la investigación, entre las acciones a tomar
ambiente controlado, debe revisarse la documentación y podrían incluirse el refuerzo de capacitación del personal
hacer una investigación. para enfatizar el control microbiano del ambiente; muestreos
 Definir el alcance del problema, causas y acciones de adicionales y más frecuentes, desinfecciones adicionales,
acuerdo al sistema de calidad análisis adicionales de los productos, identificación del
 Recopilar la información de datos históricos contaminante microbiano y su probable origen y determinar
 Evaluar el impacto en el producto o impacto en control la necesidad de reevaluar los procedimientos normalizados
ambiental. de operación vigentes y si fuera necesario revalidarlos.
 Evaluar necesidad de dejar el producto en cuarentena La revisión de los resultados de la investigación y de las
 Evaluar la necesidad de muestreos adicionales y planes pruebas permite determinar la importancia del nivel
de acción. microbiano excedido y la aceptabilidad de las operaciones o
 Notificación al personal responsable productos procesados en tal condición. Las investigaciones y
Los detalles de la investigación podrían ser distintos según el las razones relacionadas al curso de acción se deben
tipo de producto y proceso. La investigación debe incluir una documentar e incluir como parte del sistema general de
revisión de la documentación de mantenimiento de la zona, gestión de calidad.
documentación de desinfección, parámetros físicos u Debe existir un programa de monitoreo ambiental de aire,
operativos inherentes tales como cambios de temperatura y superficies y personal descrito en un PNO, incluyendo:
humedad relativa y la capacitación del personal involucrado.  Los métodos deben ser adecuados a los requisitos de la
Cuando se exceden los niveles de alerta debe realizarse una clase a evaluar.
investigación dependiendo del sitio de muestreo que se  Procedimiento de muestreo por cada clase de área y
encuentra fuera de especificación. tipo de muestreo (aire pasivo, aire activo, superficies,
personal).
Aire Revisar el nivel de actividad del personal  Frecuencia de muestreo (duración, turnos, etc)
Revisar el desempeño de patrones de flujo de aire y  Representación gráfica de los sitios de muestreo.
pruebas de humo, cambios de aire.  Métodos de prueba: medios a emplear, equipo a usar.
Revisar las técnicas de asepsia del personal.  Formatos de reporte
Revisar los requerimientos de vestimenta de acuerdo al área.
 Metodología para el análisis de tendencia
Inspeccionar los filtros de aire en búsqueda de perforacio-
nes y la presión diferencial a través del filtro.  Debe realizarse un control gráfico para evaluar la
Revisar los procesos de desinfección/sanitización, intervalos y tendencia del monitoreo ambiental.
eficacia de desinfectantes  Tipo de monitoreo dinámico o estático
Verificar las presiones diferenciales particularmente respecto  Procedimiento de contingencia en caso de resultados
a la última sanitización. fuera de nivel
Evaluar el equipo mecánico como posible fuente de
contaminación.
Los sitios de muestreo deben ser seleccionados con una
Evaluar la integridad de las superficies del cuarto (techo,
paredes, piso).
justificación basada en un análisis de riesgo, así como en los
Revisión de método y técnica de muestreo, resultados de la calificación del sistema HVAC.
Superficies Investigar las superficies como posibles fuentes de Es esencial realizar pruebas adecuadas y optimizar las
contaminación. características físicas del cuarto limpio o del ambiente
Revisar los registros de limpieza para evaluar la controlado antes de completar la validación del programa de
sanitización/desinfección. Selección de agentes de control microbiológico. Asegurar que el ambiente controlado
limpieza, programa de sanitización funciona bien y según sus especificaciones de ingeniería
Revisar eventos inusuales durante la manufactura. ayuda a garantizar que la biocarga del ambiente cumple los
Examine las áreas durante su uso. requisitos para el procesamiento aséptico. Dichas pruebas
Verifique la falta de algún control.
Determine la sensibilidad de los microorganismos aislados
deben repetirse durante la el control de rutina del cuarto
al desinfectante empleado limpio o del ambiente controlado y siempre que se realicen
Revise si detecta el microorganismo aislado en otras pruebas cambios importantes en el funcionamiento, proceso, flujo de
Revisión de método y técnica de muestreo personal, operación, flujo de materiales, sistemas de manejo
Personal Revise si detecta el microorganismo aislado en otras pruebas. de aire o distribución de equipos.
Verifique el estado de salud del personal involucrado en el
proceso. FACTORES CRÍTICOS EN EL DISEÑO E
Verifique el entrenamiento del personal IMPLEMENTACIÓN DE UN PROGRAMA DE
Revisar capacitación adicional sobre prácticas de uso de CONTROL AMBIENTAL MICROBIOLÓGICO.
vestimenta
El tipo de medio, líquido o sólido usado para el muestreo o
Revisión de método y técnica de muestreo, Revisión de las
tendencias de todos los resultados de todas las revisiones plaqueo de microorganismos depende del procedimiento y
mencionadas en esta tabla, los cuales deberán documentarse. equipos usados. Se debe evaluar la aptitud de todos los

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medios utilizados según el propósito previsto. El medio de con inoculaciones de menos de 100 unidades formadoras de
crecimiento microbiológico solidos multipropósito más colonias (UFC) de los microorganismos de reto.
común es el agar soya tripticaseína. Los procesos de esterilización de los medios de cultivo
Los medios de cultivo recomendados pueden ser adicionados deben estar validados.
con aditivos para reducir o minimizar los efectos de agentes Un programa de control ambiental adecuado, debe incluir la
desinfectantes o de antibióticos o de cualquier otra sustancia identificación y la evaluación de lugares de muestreo y la
que pueda inhibir el crecimiento al estar presente en los validación de métodos para el muestreo microbiológico del
sitios de muestreo. ambiente.
Los métodos usados para la identificación de microorganis-
mos aislados deben verificarse usando microorganismos
Monitoreo Tipo de medio Periodo de incubación
indicadores.
Para monitoreo de rutina No se debe introducir contaminación a un cuarto limpio de
fabricación como resultado del uso de medios o equipo de
Superficies Agar de soya 30-35 °C por 3 días cuando
Placas de tripticaseína sólo se emplee para bacterias ó muestreo contaminados. El uso de medios preparados
sedimentación De 30-35 °C por 2 días cuando asépticamente representa una preocupación especial.
Muestreo lo emplee tanto para bacterias Siempre que sea posible, se deben esterilizar terminalmente
cuantitativo de aire como para hongos seguido los medios de muestreo y sus envolturas por calor húmedo,
Monitoreo de 20-25 °C por 3 días radiación u otros medios adecuados.
manos Cuando se deban usar medios preparados asépticamente, los
Para monitoreo específico para hongos analistas deberán llevar a cabo una preincubación e
Monitoreo Agar dextrosa 20-25 °C por 5 días inspección visual de todos los medios de muestreo antes de
empleando Sabouraud, introducirlos en el cuarto limpio.
cualquier técnica Agar dextrosa
Sabouraud ESTABLECIMIENTO DE PLANES Y SITIOS DE
modificado MUESTREO.
Para monitoreo específico para anaerobios Resulta necesario determinar ubicaciones específicas para el
Monitoreo Agar de soya 30-35 °C por 5 días bajo muestreo de aire y de superficies durante el inicio o la puesta
empleando tripticaseína o condiciones de anaerobiosis en en servicio de un cuarto limpio u otro ambiente controlado.
cualquier técnica cualquier otro jarra o algún otro método. Entre las ubicaciones consideradas se deben incluir aquellas
media en la proximidad del producto, envases, cierres y superficies
adecuado para de contacto expuestos. Durante el procesamiento aséptico, al
anaerobios área en la que los envases cierres y producto están expuestos
a menudo se le denomina zona crítica-la zona crítica siempre
Pueden emplearse otros medios de cultivo y diluyentes es un ambiente ISO 5. Para operaciones asépticas, toda la
usados para muestreo o cuantificación de microorganismos: zona crítica debe tratarse como un campo estéril. Ningún
a) Medios líquidos: solución salina triptonada, agua objeto no estéril, incluyendo las manos enguantadas del
peptonada, solución salina amortiguada, gelatina personal del cuarto limpio o un guante para RABS/aislador,
amortiguada, gelatina amortiguada enriquecida, infusión debe entrar en contacto con un producto estéril, cierre de
cerebro corazón, caldo de soya tripticaseína. envase, estación de llenado o equipo de transporte o durante
b) Medios sólidos: agar nutritivo, agar extracto glucosado operaciones de procesamiento aséptico. Los operadores y el
de triptona, agar lecitina, agar infusión cerebro corazón, personal de monitoreo ambiental nunca deben tocar partes
agar para placa de contacto. estériles de transportadores, agujas de llenado, tolvas o
cualquier otro equipo que este dentro de la ruta de descarga
En general, las pruebas para anaerobios estrictos no son de del producto. Esto significa que es mejor realizar el
rutina. Sin embargo, si las condiciones o investigación lo monitoreo de estas superficies al final de las operaciones de
justifican, como por ejemplo, la identificación de tales producción.
organismos en instalaciones de prueba de esterilidad La frecuencia del muestreo depende del proceso de
justificaría realizar monitoreo frecuente para anaerobios. fabricación que se lleve a cabo dentro de un ambiente. Los
Debe evaluarse la capacidad de promover crecimiento de ambientes clasificados que se usan solo para proporcionar un
cualquiera de los medios de cultivo para detectar y nivel general de biocarga menor en las áreas de fabricación
cuantificar los microorganismos que se desean encontrar. de productos no estériles requieren monitoreo ambiental de
Además, para la prueba de promoción de crecimiento, puede menor frecuencia. Los ambientes clasificados en los que se
emplearse la microflora representativa aislada del ambiente o llevan a cabo operaciones cerradas de fabricación, entre las
las cepas ATCC preparadas a partir de esos aislamientos. que se incluyen fermentación, procesamiento estéril de un
Los medios deben ser capaces de promover el crecimiento ingrediente farmacéutico activo y procesos químicos,
requieren un número menor de sitios de monitoreo, así como

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monitoreo menos frecuente debido a que el riesgo de
contaminación microbiana del entorno es comparativamente Área o punto de muestreo Frecuencia de monitoreo
bajo. El monitoreo microbiológico de ambientes en donde
los productos se llenan antes de la esterilización terminal a Cuarto limpio/RABS
menudo es menos crítico que el monitoreo en las áreas de Zona crítica (ISO 5 o mejor)
procesamiento aséptico. La cantidad de monitoreo requerido Monitoreo activo de aire Por turno operativo
en las operaciones de llenado para esterilización terminal
Monitoreo de superficies Al final de la operación
depende de la susceptibilidad de supervivencia en el
producto y del potencial de proliferación de contaminación Área aséptica adyacente a la zona crítica
microbiana. La identificación y el número estimado de Todos los puntos Cada turno operativo
microorganismos resistentes a la esterilización posterior Otras áreas asépticas no adyacentes
pueden ser más críticos que l monitoreo ambiental
Todos los muestreos Una vez por día
microbiológico de los ambientes de fabricación circundantes.
No es posible recomendar niveles de control microbianos Aisladores
para cada tipo de ambiente de fabricación. Por ejemplo, los Zona crítica (ISO 5 o mejor)
niveles establecidos para un ambiente clase ISO 7 pueden ser Monitoreo activo de aire Una vez por día
inapropiados para otro ambiente de la misma clase,
Monitoreo de superficies Al final de la campaña
dependiendo de las actividades de producción que se lleven a
cabo en cada ambiente. El usuario debe llevar a cabo un Área aséptica adyacente al aislador
análisis de riesgos y desarrollar una justificación para las Todos los puntos Mensualmente
ubicaciones y frecuencias de muestreo para cada ambiente
controlado. La clasificación de un cuarto limpio ayuda a SELECCIÓN DE SITIOS DE MUESTREO DENTRO
establecer niveles de control, pero no implica que todos los DE CUARTOS LIMPIOS Y ÁREAS DE
cuartos con la misma clasificación deban tener los mismos PROCESAMIENTO ASÉPTICO.
niveles de control ni la misma frecuencia de monitoreo. El La norma ISO 14644 sugiere una metodología de cuadrícula
monitoreo debe reflejar los requisitos de control (grid approach) para la clasificación de partículas del aire
microbiológico de las actividades de fabricación o totales en cuartos limpios. Esta metodología es adecuada
procesamiento. Las técnicas formales de evaluación de para certificar el desempeño de la calidad del aire en relación
riesgos pueden conllevar a la formación de un programa de a las partículas totales en función del objetivo de su diseño.
control de contaminación científicamente válido. Asimismo, las cuadrículas pueden tener un gran valor para el
La siguiente tabla sugiere frecuencias de muestreo en orden análisis de riesgos por contaminación microbiana, aunque,
decreciente de frecuencia y según loa criticidad o el riesgo en general las cuadriculas que no presentan actividad por
para el producto del área muestreada. Esta tabla distingue parte del personal propenden a bajos niveles de contaminación.
entre el procesamiento aséptico en el que el personal está La contaminación microbiana está profundamente relacionada
sujeto al uso aséptico de vestimentas y aquel en el que con el personal, por lo que el monitoreo microbiológico en
resulta apropiado un menor uso de vestimentas. Los planes ambiente sin personal tiene un valor limitado.
de muestreo para monitoreo ambiental deben ser flexibles Para seleccionar de la mejor manera los sitios de muestreo se
con respecto a las frecuencias del monitoreo; asimismo, las deben tomar en cuenta la actividad humana durante
ubicaciones del plan de muestreo se deben ajustar basándose operaciones de fabricación. La observación y el mapeo
en la tasa observada de contaminación y en los análisis de cuidadosos del cuarto limpio durante la fase de calificación
riesgos continuos. Los fabricantes, basándose en pueden proporcionar información útil relacionada con el
observaciones de largo plazo, pueden incrementar o movimiento y la ubicación del personal. Semejante
disminuir el muestreo en una ubicación dada o liminar una observación puede generar también información importante
ubicación de muestreo. El muestreo en exceso pude ser sobre las manipulaciones e intervenciones más frecuentes.
perjudicial para el control de contaminación al igual que la La ubicación y movimiento de personal dentro del cuarto
falta de muestreo, por lo que considerar cuidadosamente los limpio se correlacionan con el riesgo de contaminación para
riesgos y las fuentes de contaminación pude ayudar a el ambiente y para los procesos que se llevan a cabo dentro
determinar la intensidad del muestreo de dicho ambiente. Los sitios de muestreo deben
La siguiente tabla muestra la frecuencia de muestreo (los seleccionarse de tal manera que evalúen el impacto del
operadores son vestidos asépticamente en estos ambientes movimiento y el trabajo del personal dentro del área, en
con excepción de ambiente adyacente a aisladores). Esta particular las intervenciones y manipulaciones dentro de la
recomendación no aplica a las áreas de producción de zona critica.
productos no estériles u otros ambientes no clasificados en La vía más probable de contaminación es a través del aire,
cuales el vestido aséptico no se realiza): por lo que las muestra más críticas para evaluación de
riesgos son aquellas relacionadas con la contaminación
transmitida por el aire cerca de materiales estériles

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expuestos. Otras áreas de preocupación son los puntos de intervalo de + 0.5 log 10. Los estudios sobre muestreadores
ingreso donde los equipos y materiales se mueven desde de aire microbiológicos activos indican que es posible una
áreas con clasificaciones más bajas hacia áreas con variabilidad mayor a diez veces de los dispositivos de
clasificaciones más altas. El esquema de monitoreo debe muestreo comúnmente usados. Como resultado de esta
incluir las áreas dentro y alrededor de las puertas y esclusas variabilidad inherente y del error de muestreo
de aire. Se acostumbra también muestrear paredes y pisos: indeterminado, la supuesta diferencia entre, por ejemplo, un
de hecho, el muestreo en estas ubicaciones puede proveer nivel de alerta de 1 UFC y un nivel de acción de 3 UFC no
información sobre la efectividad del programa de son analíticamente significativos. Desde el punto de vista
sanitización. El muestreo de estas ubicaciones puede llevarse científico, no es válido tratar las diferencias que se
a cabo relativamente con poca frecuencia, debido a que es encuentran dentro de los intervalos esperados, y por tanto
poco probable que la contaminación afecte al producto. Los normales, como numéricamente diferentes.
operadores nunca deben tocar los suelos ni paredes y, por Debido a la exactitud y precisión limitadas de los ensayos de
consiguiente, no debería presentarse la transmisión mecánica crecimiento y recuperación microbiana, los analistas pueden
de contaminación de estas superficies a las áreas críticas considerar la frecuencia con la que se detecta contaminación
donde se encuentra expuesto el producto. en lugar de números absolutos de UFC detectadas en una
Los fabricantes generalmente deben monitorear las sola muestra. Asimismo, una UFC no es una enumeración
superficies dentro de zonas críticas, aunque dicho control directa de miroorganismos presentes, sino una medición de
debe realizarse únicamente al final de las operaciones. Se la contaminación que pudiera haberse originado de un grupo
deben evitar residuos de medios o diluyentes de hisopos de organismos.
húmedos sobre las superficies, debido a que pueden Se deben determinar las tasas de recuperación de
ocasionar la proliferación de microorganismos. Además, la contaminación promedio para cada ambiente de cuarto
limpieza de superficies para eliminar diluyentes o medios limpio, mientras que los cambios en las tasas de
requiere la intervención y movimientos de personal, lo que recuperación de contaminación en un sitio determinado o
puede resultar en la liberación de contaminación microbiana dentro de un cuarto determinado pueden indicar la necesidad
dentro de la zona crítica y puede perturbar el flujo de aire. de acciones correctivas. Dentro de la zona ISO 5, los
Ejemplos de selección de sitios de muestreo: métodos actuales pueden permitir la consecución de tasas de
recuperación del aire y de superficies de 1 % o menores. Las
Sistema Sitio tasas de recuperación de contaminación para RABS cerrados
y sistemas de aisladores deben ser significativamente
Aire ambiental (línea Cerca de contenedores abiertos o llenos menores y se puede esperar que sean <0.1 %, basándose en
de llenado) los resultados de monitoreo publicados.
Aire de Cuarto Cerca al área de trabajo, cerca de La contaminación observada en múltiples sitios en un
extracción, donde hay mayor circulación ambiente dentro de un solo periodo de muestreo puede
del personal. indicar un aumento en los riesgos para el producto y se debe
Superficies Manijas de puertas, paredes, cortinas evaluar cuidadosamente. Asimismo, la aparición de
(instalación) contaminación casi de manera simultánea en múltiple sitios
Superficies (equipo) Línea de llenado, tableros de control, puede ser generada por una técnica de muestreo deficiente,
tapas, etc. por lo que se requiere una cuidadosa revisión antes de
formular conclusiones sobre la potencial pérdida de control.
Áreas de Cerca de la fuente de vacío Volver a muestrear un ambiente varios días después de la
microbiología contaminación ofrece poco valor, debido a que las
(manifold)
condiciones durante un muestreo pueden ser difíciles de
Operadores de línea Impresión de dedos como mínimo, sobre duplicar con exactitud durante otro muestreo.
de llenado la vestimenta orientado a axilas, boca, Las muestras de superficies también se pueden tomar de
etc. vestimentas para cuartos limpios. Se debe enfatizar el
Flujos laminares Cerca de la zona de trabajo, donde existe muestreo de personal durante la validación, el cual se debe
mayor cantidad de movimientos, etc. llevar a cabo una vez terminado el trabajo de producción a
fin de evitar la contaminación adventicia de las vestimentas.
PARÁMETROS DE CONTROL MICROBIOLÓGICO En este caso, el promedio también debe ser <1 % para estos
EN CUARTOS LIMPIOS, AISLADORES Y RABS. sitios de muestreo. Los guantes en RABS y aisladores
Desde principios de 1980, los fabricantes han establecido cerrados deben cumplir con la expectativa más rigurosa para
niveles de alerta y acción para monitoreo ambiental. En años tasas de recuperación de contaminación de <0.1 %.
recientes, se ha reducido en buena medida la diferencia entre Debido a la variabilidad inherente de los métodos de
los niveles de alerta y acción, especialmente en ambientes muestreo microbiano, las tasas de recuperación de
ISO 5. El crecimiento y la recuperación en valoraciones contaminación representan una medición más útil de los
microbiológicas presentan una variabilidad normal en el resultados de tendencias que enfocarse en el número de

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colonias recuperadas de una muestra determinada. La dos semanas previas al incidente de cuenta anormalmente
siguiente tabla proporciona las tasas de recuperación alta, de modo que se revise si existen cuentas que indiquen
recomendadas para ambientes de procesamiento aséptico. La un patrón inusual. Asimismo, se deben considerar todas las
tasa de incidencia de 1% significa que únicamente el 1 % de cuentas microbianas incluyendo aquellas que se encuentran
las muestras tomadas presentan contaminación, independien- en el intervalo común de 1-5 UFC. La identificación de los
temente del número de colonias. En otras palabras, 99 % de microorganismos encontrados es un factor importante para
las muestras tomadas están completamente exentas de llevar a cabo esta investigación.
contaminación. Las tasas de recuperación de contaminación En el caso de un solo valor atípico aislado, el estableci-
que son más altas que las recomendadas en la tabla siguiente miento de una causa definitiva probablemente no sea
pueden ser aceptables en cuartos con clasificaciones simi- posible, por lo que solo podrán considerarse medidas
lares que se usan para actividades de bajo riesgo. Las acciones correctivas generales. Resulta inapropiado sugerir una causa
se vuelven necesarias cuando la tasa de recuperación de raíz para la que no se cuenta con una evidencia científica
contaminación presenta tendencias superiores a estas sólida. Además se debe ser consciente de la variabilidad del
recomendaciones durante un periodo significativo. análisis microbiológico. Desde una perspectiva realista, no
existen razones científicas para tratar una recuperación de
Impresión 25 UFC como estadísticamente diferente de una recu-
Muestreo Sedimentación Placas de peración de 15 UFC. Un valor de 15 UFC no debe
de guantes
de aire en placa (9 cm) contacto
Clase de cuarto o considerarse significativo en términos de control de proceso,
activo 4 horas de o hisopo
(%) exposición (%) (%)
vestimenta debido a que en realidad, no existe diferencia entre una
(%) recuperación de 14 UFC y una de 15 UFC. Los
Aislador/RABS microbiólogos deben usar un razonamiento científico
cerrado (ISO5 o <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 práctico en sus metodologías para evaluar desviaciones.
mejor)
ISO 5 <1 <1 <1 <1 METODOLOGÍA E INSTRUMENTAL PARA
MUESTREO MICROBIOLÓGICO DEL AIRE EN
ISO 6 <3 <3 <3 <3 AMBIENTES CONTROLADOS.
ISO 7 <5 <5 <5 <5 Los científicos en general aceptan que los organismos
transportados por el aire, en ambientes controlados, pueden
ISO 8 <10 <10 <10 <10 influir sobre la calidad microbiológica de los productos
intermedios y terminados fabricados. También se acepta que
La frecuencia de detección se debe basar en datos de la estimación de esos instrumentos y procedimientos usados
monitoreo reales y se debe basar en datos de monitoreo para realizar estos análisis. Por lo tanto, cuando se usen otros
reales y se debe retabular mensualmente. Los niveles de acción métodos o equipos, debe determinarse la equivalencia
deben basarse en la capacidad empírica del proceso. Si las general de los resultados obtenidos. Se espera que los
frecuencias de detección exceden las recomendaciones de la avances tecnológicos brinden innovaciones que mejoren la
tabla anterior o son mayores que la capacidad establecida del precisión y sensibilidad con respecto a la metodología actual
proceso, entonces deben tomarse acciones correctivas. y que puedan justificar un cambio en los números absolutos
Las variaciones superiores a aproximadamente 15 UFC de organismos que se detectan.
recuperadas de una sola muestra ISO 5, derivadas del aire, de En la actualidad, los muestreadores más usados en la
superficies o del personal, deben ocurrir con la menor frecuen- industria farmacéutica y de dispositivos médicos son los
cia posible. La ocurrencia de semejantes variaciones en ISO muestreadores centrífugos y por impacto. Existen dos tipos
5 puede ser indicativa de una pérdida importante de control de muestreo de aire: el semicuantitativo por sedimentación
cuando éstas se presentan dentro de la zona crítica ISO 5 con en placa y el muestreo cuantitativo que requiere definir el
estrecha proximidad al producto y a los componentes. Por volumen de muestreo, algunos ejemplos de estos son: Sieve
consiguiente, cualquier variación en muestras ISO 5>15 UFC impactor, Slit-to agar Sampler, Gelatine Filter sample,
requiere una investigación cuidadosa y minuciosa. Centrifugal sampler, entre otros.
Una consideración clave para un número anormalmente alto A continuación se detallan algunos equipos disponibles en el
de microrganismos recuperados radica en si el incidente es mercado, sin embargo el usuario tiene la responsabilidad de
aislado o si se correlaciona con otras recuperaciones. Se determinar la selección, conveniencia e idoneidad de cada
debe revisar la tendencia de cuenta microbiana de al menos muestreador.

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 Método/equipo Ventaja Desventaja
Sedimentación Método sencillo, económico, prácticamente Las cuentas microbianas no pueden ser correlacio-
Este método se basa en la exposición de puede ser empleado cualquier medio de nadas con un volumen de aire, la disposición de
placas de agar abiertas en el ambiente a cultivo, pueden ser colocadas en cualquier las partículas es afectada por el tamaño de
ser muestreado. Detecta la contaminación sitio, permite muestreo de largos periodos partículas, temperatura, y flujo/volumen de aire
por sedimentación por gravedad. de tiempo con cambios de placas, no pasando a través de su superficie, el medio puede
requiere fuentes de poder secarse en largos periodos de tiempo. No
cuantitativo (por volumen de aire). El tiempo de
monitoreo es largo 4 – 5 horas
Se diseña con posiciones fijas
Muestreador centrífugo. En inglés Se puede muestrear desde 40, 100, 1000 Un solo proveedor de tiras de cultivo, no es
Reuter Centrifugal sampler litros de aire por minuto tiene opción de posible la calibración directa del volumen de
La unidad consiste en una hélice o turbina equipo a prueba de explosión, con piezas muestreo, hay riesgo de manipulación de las
que aspira un volumen conocido de aire autoclaveables, conveniente, velocidad de tiras al insertar y remover la tira de la cabeza
hacia el interior de la unidad y luego muestreo, es portable, la fuente de poder es del muestreador, puede provocar disturbios del
impulsa el aire al exterior hacia una tira de por baterías, el flujo de aire puede ser flujo laminar por turbulencia del aire de entrada
agar nutritivo dispuesta tangencialmente calibrado y salida, el muestreo es selectivo para partículas
sobre una base plástica flexible. grandes por lo que puede dar cuentas más altas.
Impactador de tamiz. En inglés Sieve Con orificios centrales que reducen el escape Requiere alto tiempo de muestreo, deben
impactor. de partículas viables, se limpia y desinfecta, evaluarse varios metros cúbicos de aire para
El aparato consiste en un recipiente hay autoclaveables, puede ser conectado a PC lograr resultados de razonable exactitud y
diseñado para alojar una placa de Petri alcanza un volumen de muestreo de 25, 1 500, precisión, lo cual no es práctico
con agar nutritivo. La cubierta de la 5 000 litros, pueden emplearse diferentes
unidad tiene perforaciones de un tamaño tamaños de placas y filtros.
predeterminado. Una bomba de vacío Adecuada velocidad de muestreo, es portable,
extrae un volumen conocido de aire a la fuente de poder es por baterías, el flujo de
través de la cubierta y las partículas del aire puede ser calibrado.
aire que contienen microorganismos Algunos muestreadores están disponibles con
chocan sobre el medio de agar de la placa una serie de recipientes en cascada, con
Petri perforaciones de tamaño decreciente. Estas
unidades permiten determinar la distribución
de tamaño de las partículas que contienen
microorganismos viables, basada en el tamaño
de las perforaciones que dejan pasar las
partículas a las placas de agar.
Filtración Se pueden medir grandes volúmenes de La membrana del muestreo debe ser colocada
La unidad está formada por una bomba de aire, se pueden escoger diferentes tipos de en medio de cultivo para la cuantificación de
vacío con una manguera de extensión que filtros y tamaños de poro, el uso de microorganismos, el equipo no es fácilmente
termina en un portafiltros que puede ubicarse membrana de gelatina es útil para evitar la portable.
lejos, en el especio crítico. El filtro está desecación de microorganismos, el sistema Se debe determinar si la tubería adicional altera
constituido por fibras de gelatina dispuestas de filtración es esterilizable, es usado en el recuento viable del aire. Este efecto debe
al azar, capaces de retener los microorganismos aisladores, el flujo de aire puede ser eliminarse o, si no es posible debe introducirse
transportados por el aire. Después de un calibrado un factor de corrección en el informe de los
tiempo de exposición especificado, se retira resultados.
asépticamente el filtro y se disuelve en un
diluyente adecuado; luego se realiza la
siembra sobre un medio de agar adecuado
para estimar su contenido microbiano
Muestreador de aire de ranura-agar. Se pueden medir grandes volúmenes de El equipo no es portable, la tubería puede tener
En inglés Slit to agar sample (STA) aire, se tiene disponibilidad del tiempo- un efecto en la cuenta viable, algunos equipos
El instrumento está impulsado por una concentración, se puede realizar muestreo no son esterilizables, algunos equipos requieren
fuente acoplada de vacío controlable. La remoto, puede emplearse para el muestreo placas de 150 mm.
toma de aire se hace a través de una de gas comprimido. Tienen generalmente una capacidad de muestreo de
ranura estandarizada debajo de la cual se 80 L/min. Si se analiza un metro cúbico de aire,
coloca una placa de Petri que gira entonces se requiere un tiempo de exposición de 15
lentamente y que contiene agar nutritivo min. Podría ser necesario usar tiempos superiores a
15 min para obtener una muestra representativa.

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 Método/equipo Ventaja Desventaja
Atrio microbiológico esterilizable Con orificios centrales que reducen el escape Requiere alto tiempo de muestreo, deben
La unidad es una variante del impactador de partículas viables, se limpia y desinfecta, evaluarse varios metros cúbicos de aire para
de tamiz de una sola etapa. La cubierta de hay autoclaveables, puede ser conectado a lograr resultados de razonable exactitud y
la unidad contiene orificios PC alcanza un volumen de muestreo de 25, precisión, lo cual no es práctico
uniformemente espaciados de un tamaño 1 500, 5 000 litros, pueden emplearse
aproximadamente 6.35 mm (o 0.25 diferentes tamaños de placas y filtros.
pulgadas). La base de la unidad aloja una Adecuada velocidad de muestreo, es
placa Petri que contiene agar nutritivo. portable, la fuente de poder es por baterías,
Una bomba de vacío controla el el flujo de aire puede ser calibrado.
movimiento de aire a través de la unidad y Algunos muestreadores están disponibles
se encuentran disponibles un centro de con una serie de recipientes en cascada, con
control de unidades múltiples y una sonda perforaciones de tamaño decreciente. Estas
de muestreo remoto. unidades permiten determinar la
distribución de tamaño de las partículas que
contienen microorganismos viables, basada
en el tamaño de las perforaciones que dejan
pasar las partículas a las placas de agar.
Muestreador por sistema de aire en Se pueden medir grandes volúmenes de El equipo no es portable, la tubería puede tener
superficie (Muestreador SAS por sus aire, se tiene disponibilidad del tiempo- un efecto en la cuenta viable, algunos equipos
siglas en inglés) Esta unidad integrada concentración, se puede realizar muestreo no son esterilizables. Tienen generalmente una
está formada por una sección de ingreso remoto, puede emplearse para el muestreo capacidad de muestreo de 80 L/min. Si se
que aloja una placa de contacto de agar. de gas comprimido. analiza un metro cúbico de aire, entonces se
Inmediatamente detrás de la placa de requiere un tiempo de exposición de 15 min.
contacto hay un motor y una turbina que Podría ser necesario usar tiempos superiores a
aspira aire a través de la cubierta 15 min para obtener una muestra representativa.
perforada de la unidad hacia la placa de
contacto de agar adecuada para estimar su
contenido microbiano.

METODOLOGÍA PARA MUESTREO contaminadas. La muestra puede ser filtrada o

MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES EN colocada en agar. El área por donde se pasa el
AMBIENTES CONTROLADOS. hisopo se define con una plantilla estéril de tamaño
Otro componente del programa de control microbiano en adecuado. En general es entre 24 y 30 cm2. El
ambientes controlados es el muestreo de las superficies de resultado se reporta UFC por hisopo o superficie
equipos, instalaciones e indumentaria personal usados en muestreada. La técnica de análisis y el muestreo
esos ambientes. La estandarización de métodos y puede afectar el resultado.
procedimientos de muestreo de superficies no se ha tratado  Enjuague: Empleado para muestreo de grandes
en la industria farmacéutica tan ampliamente como la superficies, como tanques, trenes, etc. El agua es
estandarización de los procedimientos de muestreo de aire. generalmente la solución de enjuague, después es
Para minimizar los trastornos en las operaciones críticas, el tratada.
muestreo de superficie se realiza al finalizar las actividades.  Placas de contacto/placa flexible: Generalmente se
Muestreo de personal: se busca la detección de emplean placas de 55 mm de diámetro. Se presiona
contaminantes viables en guantes y ropa mediante: el medio suavemente contra la superficie, se incuba
Impresión de los dedos con guante sobre la placa de agar, directamente. Se tiene que remover residuos del
uso de placas de contacto en antebrazo o al frente del cuerpo, medio por ejemplo con hisopo impregnado de
se realiza durante validación y entrenamiento así como en alcohol. Se emplea solo en superficies planas.
rutina, lo mejor es realizarlo cuando el personal va saliendo Puede usarse directamente agar selectivo para la
del área y debe estar definido en el procedimiento. cuantificación específica de hongos, esporas, etc.
Muestreo de superficies, existen 3 tipos de muestreo: La humedad del medio puede provocar confluencia
 Hisopo: La muestra se toma con hisopos de colonias. Se reporta UFC por placa de contacto o
humedecidos con agua estéril o solución salina o superficie muestreada.
cualquier otro diluyente adecuado. Es el mejor El monitoreo de superficies se usa como una herramienta de
método para superficies irregulares. Se dispersa en evaluación ambiental en todos los tipos de ambientes
un diluyente para realizar la cuenta. Los hisopos clasificados. En los ambientes ISO 5 para procesamiento
pueden ser de alginato de calcio, algodón o dacron. aséptico, el monitoreo se lleva por lo general cerca de áreas
Recomendable para superficies altamente y superficies críticas. Las tolvas y rampas de alimentación

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que entran en contacto con superficies en cierres y agujas de VALIDACIÓN DEL PA
llenado pueden ser analizadas para detectar contaminación La etapa final de la validación del PA se lleva a cabo mediante
microbiana. A menudo, en los cuartos limpios conven- una serie de pruebas de simulación del Procesamiento Aséptico
cionales con personal, estas superficies de contacto con (SPA) en cantidad suficiente, en las cuales el producto se
productos se esterilizan con vapor y se ensamblan sustituye por un medio de cultivo, el cual detectará la posible
asépticamente. La capacidad de los operadores para realizar contaminación microbiológica que ingresa al producto
manipulaciones asépticas se evalúa durante simulaciones del cuando las condiciones del PA no son las adecuadas, y estas
proceso o llenados de medios, aunque no es posible realizar unidades son incubadas bajo condiciones que promueven el
de esta manera una validación verdadera de la técnica del crecimiento de microorganismos, en el caso de encontrarse
operador. El monitoreo de superficies que se realiza en estos presentes en cada unidad de producto.
superficies que entran en contacto directo con partes o Las pruebas de llenado simulado normalmente incluyen
productos estériles se debe llevar a cabo únicamente después exposición del medio de cultivo microbiológico a las
de haber completado las operaciones de producción. El superficies de contacto del producto con el equipo, sistemas
muestreo de superficies no es una prueba de esterilidad y no cierre contenedor, ambientes críticos y manipulaciones que
debe considerarse un criterio para la liberación o rechazo de simulen lo más cercano posible las mismas condiciones de
producto. Debido a que el personal debe tomar estas exposición del producto real en la fabricación comercial.
muestras asépticamente, resulta difícil establecer con certeza si Los recipientes cerrados llenados con medio de cultivo son
la contaminación recuperada está relacionada con el producto. incubados para detectar contaminación microbiológica.
Después los resultados se evalúan e interpretan para
IDENTIFICACIÓN DE AISLAMIENTOS DE determinar el riesgo potencial de que alguna unidad del
MICROORGANISMOS DEL PROGRAMA DE producto fabricado se contamine durante el proceso de
CONTROL AMBIENTAL. fabricación normal del producto, como por ejemplo, en:
El programa de control ambiental incluye una adecuada adiciones de ingredientes, conexiones asépticas, llenado,
identificación de la flora obtenida del muestreo periódico y cierre o taponado.
mantenida en un cepario de manera adecuada. Si se conoce Los datos de monitoreo ambiental durante el proceso de
la flora habitual de los ambientes controlados, esto ayuda a llenado simulado proveen información importante para la
identificar la flora microbiana encontrada en la instalación evaluación del proceso.
que se está controlando, y permite evaluar la eficacia de los
procedimientos, métodos y agentes de limpieza y desinfec- SIMULACIÓN DEL PROCESAMIENTO ASÉPTICO
ción así como los métodos de recuperación. La información (SPA)
reunida mediante un programa de identificación también a) Diseño del estudio
puede resultar útil para investigar la fuente de contamina- Debe establecerse un programa de pruebas de llenado
ción, especialmente cuando se exceden los niveles de acción. simulado, las cuales deben incorporar los factores de
La identificación de microorganismos aislados de las zonas riesgo de contaminación microbiológica que puedan
críticas y lugares inmediatos a ellas debe tener prioridad sobre ocurrir en la línea de fabricación. Las pruebas de llenado
la identificación de microorganismos de zonas no críticas: simulado deben semejar el PA real lo mejor posible
 Áreas de procesos asépticos (puntos críticos): área incorporando actividades y condiciones del “peor caso”
de llenado, filtración estéril, Procesamiento Aséptico que sean retadoras para las operaciones asépticas.
guantes y ropa: En general clase ISO 5, ISO 6.
 Otras zonas controladas (seleccionadas para revelar b) Frecuencia y cantidad de corridas de llenado
tendencias y organismos objetables). Aunque no simulado
necesariamente identificación, puede ser sólo Para nuevas instalaciones o procesos de fabricación, las
morfología microscópica y colonial. pruebas de simulación de procesos deben hacerse como
 Control en proceso, prefiltración muestras de biocarga. parte de las actividades de validación. Las pruebas
Es necesario verificar los métodos de identificación y iniciales de simulación de procesos son llevadas a cabo
evaluar los equipos listos para usar según su propósito. después de completar las siguientes actividades:
 Debe existir un PNO escrito para la caracterización Calificación de equipo, Calificación del sistema de
e identificación de microorganismos incluyendo HVAC, Calificación del sistema de agua, validación del
frecuencia de caracterización y métodos. sistema de esterilización, implementación del sistema de
 La caracterización puede incluir: morfología, gram, monitoreo y control ambiental, calificación del personal
identificación manual o automatizada (Biomeriux que incluya técnicas de vestido y comportamiento en
vitek, MIDI, Biolog PE Applied Biosystems, áreas críticas, y establecimiento de procedimientos
Qualicom, etc.). normalizados de operación.

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 Cuando una línea de proceso se califica de manera inicial contaminación microbiológica potencial. Ver
deberán hacerse corridas de llenado simulado las veces recomendación en la tabla siguiente:
que sean necesarias hasta asegurar que los resultados
satisfactorios sean consistentes y significativos y se logre Tamaño
una operación en estado de control. Deberán hacerse un mínimo del
Tamaño
mínimo de tres 3 corridas consecutivas y separadas con Descripció lote de SPA
del lote
resultados satisfactorios. n del lote
de
(no. De
Recomendaciones
Las corridas subsecuentes de rutina, en cantidad de contenedore
Producci
suficiente y determinada con base en la valoración de producción s llenos con
ón
riesgo inherente al proceso, deberán hacerse, al menos, medio de
cultivo)
cada 6 meses para cada línea de proceso a fin de evaluar
el estado de control del PA. Debe diseñarse un programa Pequeña ≤5 000 ≤5 000 El tamaño de lote para la
en el cual deben incorporarse las actividades e escala SPA debe ser, al menos,
intervenciones representativas de cada turno. del mismo tamaño del
lote de producción.
Todos los cambios de productos y de líneas de proceso
deben ser evaluados a través del sistema de control de Escala 5 000 a 5 000 a El tamaño del lote para
cambios que incluya un análisis de riesgos de calidad. media 10 000 10 000 SPA debe ser
Cualquier cambio o evento que pueda afectar la unidades unidades comparable al del lote de
producción. Para llenado
capacidad del PA para fabricar producto estéril debe
de alta velocidad o con
manejarse con las correspondientes pruebas de llenado lotes de producción de
simulado. tamaño máximo, es
Por ejemplo, modificaciones de instalaciones, equipo, y adecuado llenar más
líneas de proceso, cambios significativos en el personal, piezas a fin de dar cabida
resultados anómalos en resultados del control ambiental, a las manipulaciones
cambios en el sistema contenedor/cierre, paros de asépticas, intervenciones
actividad prolongados, resultados adversos de la prueba y una simulación realista
de esterilidad en producto terminado que muestren del proceso.
contaminación microbiológica deberá hacerse un una Gran escala >10 000 >10 000 Ver enfoques en esta
investigación de la o las causas raíz de los problemas y unidades unidades. sección
pueden causar la revalidación del sistema de PA. Pueden
emplearse una
variedad de
c) Duración de las corridas.
aproximacione
La duración y tamaño ideal de las corridas de llenado s, según se
simulado son las mismas de la duración y tamaño de la plantea.
fabricación de un lote comercial, pues de esta manera se
Llenado Cualquier Mismo El tamaño de lote para la
simulan mejor las operaciones normales de la
Manual cantidad tamaño del SPA debe ser, al menos,
fabricación. Como lo anterior no siempre es posible, la lote de del mismo tamaño del
duración de las corridas deberá definirse con base en producción lote de producción. La
una valoración de los riesgos representados en cada uno operación completa de
de los distintos tipos de procesos que se lleven a cabo en llenado manual
cada línea, y teniendo en cuanta todas las variables que representa una
determinen la mayor criticidad por lo que respecta al intervención que debe
tiempo de duración. ser capturada.
En el caso de operaciones de liofilización es necesario
que los recipientes no cerrados sean expuestos a la
evacuación parcial de la cámara de manera que simule e) Velocidad de la línea
el proceso. Los viales no deben ser congelados y deben El programa de SPA debe considerar el rango de
tomarse precauciones para asegurar que el medio de velocidades usadas en la producción comercial. Cada
cultivo se mantenga en estado aeróbico para evitar corrida de llenado simulado se debe evaluar una
inhibición potencial del crecimiento de probables velocidad determinada de la línea y la velocidad debe
microorganismos. ser justificada. Por ejemplo una alta velocidad de la
línea es apropiada cuando se evalúa un proceso que se
d) Tamaño de la corridas caracteriza por intervenciones frecuentes. El uso de la
Los tamaños de las corridas de llenado de proceso prueba a baja velocidad es generalmente apropiado para
simulado se deben hacer de manera que se reproduzcan evaluar procesos con exposición prolongada de producto
las condiciones y se determinen con exactitud la estéril y contenedores y/tapones en el área aséptica.

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 La(s) velocidad(es) a evaluar deben determinarse con reconciliarse con el tiempo aproximado y la actividad
base en el análisis de los riesgos del PA. durante la corrida. La grabación en video de la corrida
de llenado simulado puede ser útil para lentificar las
f) Condiciones ambientales prácticas del personal que pudieran afectar
Las condiciones ambientales, tanto por lo que respecta a negativamente el PA.
partículas totales, como a partículas viables, debe ser Cualquier unidad contaminada debe considerarse
monitoreada a lo largo de toda la SPA. Para mayor objetable y ser investigada. Los microorganismos deben
detalle, referirse a la sección anterior de monitoero ser investigados hasta la especie. Deben investigarse las
ambiental. posibles causas raíz de la contaminación.
El criterio de aceptación para las pruebas de llenado
g) Medio de cultivo simulado son las siguientes:
Los medios de cultivo seleccionados para las pruebas de  Llenado menor de 5 000 unidades: ninguna unidad
llenado simulado deben demostrar la promoción del contaminada
crecimiento de bacterias Gram positivas, bacterias Gram o Una unidad contaminada:
negativas, hongos y levaduras, aerobios y anaerobios.  Investigación de causa raíz
Las unidades de la prueba de promoción de crecimiento  Revalidación.
deben llevarse a cabo con estos mismos  Llenado entre 5 000 y 10 000 unidades:
microorganismos. o una unidad contaminada
El proceso de fabricación debe ser simulado con  Investigación de causa raíz.
exactitud usando medios de cultivo y condiciones que o Dos unidades contaminadas:
faciliten la detección de cualquier contaminación  Investigación de causa raíz
microbiológica. Cada unidad debe ser llenada con una  Revalidación.
cantidad de y tipo de medio de cultivo suficiente y, una  Llenado de más de 10 000 unidades:
vez llenadas, rodarlas para que el medio de cultivo entre o Una unidad contaminada:
en contacto con toda la superficie interna del envase.  Investigación de causa raíz
o Dos unidades contaminadas:
h) Incubación y examen de todas las unidades llenadas  Investigación de causa raíz.
con medio de cultivo  Revalidación
Todas las unidades llenadas con medio de cultivo deben
ser incubadas bajo condiciones adecuadas para detectar
microorganismos que de otra forma pudiera ser difícil su
cultivo. Las condiciones de incubación deben
establecerse bajo los siguientes guías generales:
 La temperatura de incubación debe ser
adecuada para recuperar los aislamientos de la
biocarga y del medio ambiente y deben
permanecer en el rango entre de 20 a 35 °C
(grados Celsius). La temperatura debe ser
mantenida dentro de +/- 2.5 °C de la
temperatura definida.
 El tiempo de incubación no debe ser menor de
14 días. Si se utilizan dos temperaturas de incuba-
ción de las unidades, éstas deben ser incubadas
por lo menos 7 días a cada temperatura,
comenzando por la temperatura más baja.
 Cada unidad llenada con medio de cultivo debe
ser examinada por personal calificado con
conocimientos, capacitación y experiencia en
inspección de unidades con medio de cultivo
para detección de contaminación microbiológica.
Todas las unidades con sospecha de
contaminación

i) Interpretación de los resultados

La corrida de llenado simulado debe ser observada por
Control de Calidad y las unidades contaminadas deben

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