Curso: QUÍMICA ORGANICA III

PÉPTIDOS

Profesor: Jean Paul Miranda Paredes

IDENTIFICACIÓN DE
AMINOÁCIDOS
 Método del N-formol

Para formar la imina y bloquear el grupo amino

H H
C O + H2N CH COOH C N CH COOH
H R H
R

Desaparece el carácter anfótero del aminoácido y puede valorarse

con NaOH y fenolftaleina.

Este método de valoración de aminoácidos libres totales se emplea

para valorarlos, hidrolizados de proteínas y líquidos biológicos
 Método de la ninhidrina
Hidrato de triceto hidrindeno
Los aminoácidos dan color azul-violeta con la ninhidrina

Cualquier
aminoácido al
reaccionar
origina el mismo
producto de
reducción de la
ninhidrina
 Método de la Ninhidrina
Hidrato de triceto hidrindeno
Los aminoácidos dan color azul-violeta con la ninhidrina

Cualquier aminoácido da el
aducto azul violeta

Cualquier aminoácido al reaccionar origina el mismo

producto de reducción de la ninhidrina
En resumen:
COLORACIONES EN C.C.F. CON NINHIDRINA
 VIOLETA GRIS:Phe, Tyr, Trp y His
 VIOLETA AZULADO: Gly, Ala,Val, leu Ile, lis, Arg, Cys, Met, Ser,
glu, Thr y asp
 AMARILLO: prolina
REACCIÓN DE LOS
AMINOÁCIDOS
[Link]ón:
Requiere de un exceso de alcohol y catálisis en medio ácido. Los ésteres
son usados como protección. La hidrólisis acida regenera el ácido después
de hacer síntesis para desproteger.
Esteres metílicos y etílicos
Se utiliza con frecuencia como catalizador al HCl gaseoso. El éster se
aísla por cristalización como clorhidrato.
Esteres bencílicos
Alcohol bencílico con bencenosulfonato o tosilato como catalizador.
El agua se elimina por destilación azeotrópica
2. Acilación del grupo amino: formación de amidas
El grupo amino se convierte en una amida por acción del cloruro de
ácido, típicamente se usa cloroformato de bencilo por que mas
adelante puede removerse con facilidad en caso de proteger.
PÉPTIDOS
 PÉPTIDOS
• Los péptidos son estructuras intermedias entre los AA y las proteínas.
Sus propiedades físicas y químicas suelen reflejar en mayor o menor
medida las de los AA que lo componen.
• Los péptidos presentan a menudo ciertas peculiaridades estructurales
que no aparecen en las proteínas. Los grupos NH2 y COOH terminales
pueden encontrarse bloqueados.
 EL ENLACE PEPTÍDICO
Es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un
aa y el grupo amino del siguiente, dando lugar al desprendimiento de
una molécula de agua. Estructura que fue esclarecida por el científico
Emil Fischer.
Formación de enlaces peptídicos: dos formas de unir alanina y
serina. Ala-Ser es diferente de Ser-Ala. El orden del factor importa.
Formación de enlaces peptídicos: extremos N terminal y C terminal

El aminoacido con grupo amino libre (–NH3+) es N-terminal y se escribe a

la izquierda.

El aminoacido con grupo carboxilato libre (–COO−) es C-terminal y se

escribe a la derecha.
 NOMENCLATURA DEL ENLACE PEPTÍDICO
• Se empieza a nombrar por el amino terminal y se le hace terminar
en IL al nombre del aminoácido.
 EL ENLACE PEPTÍDICO
• Cada aminoácido en una molécula se llama UNIDAD o RESIDUO.

CLASIFICACIÓN
• Dependiendo del número de aminoácidos da lugar a un péptido:

2 aa Dipéptido
3 aa Tripéptido
de 4 a 10 aa Oligopéptido
de 10 a 100 aa Polipéptido
más de 100 aa Proteína
 Análisis de Péptidos
1. Hidrólisis

HCl 6N a 105ºC (no bases por racemización)

Triptofano se destruye en la hidrólisis

Glutamina y asparragina dan amoniaco y ácidos glutámico y aspártico

Análisis: básicos (pH=5,3),neutros (pH=4,25), ácidos (pH=3,25),

2. Degradación en una etapa

Se identifica el NH2 terminal ó el COOH terminal con un grupo identificable

y no hidrolizable.

Se hidroliza el péptido marcado

Se identifica el aminoácido terminal

Degradación en una etapa
Reactivos para identificar NH2 terminales
2,4-dinitrofluorbenceno FDNB Sanger
COOH
NO2 Después de la hidrólisis NO2
R C
Amarillo, se extrae con cloroformo NO2 NH H
NO2 F
(los demás productos de hidrólisis
ionizados no se extraen)

Cloruro de dimetilaminonaftalen-5-sulfonilo DNS-Cl

Cloruro de dansilo
CH 3 Después de la hidrólisis CH3 COOH
N N
CH3 O CH 3 O R C
S Cl S NH H
Análogo a FDNB pero fluorescente
O O
(detecta cantidades mínimas)
 Degradación en una etapa
Reactivos para identificar COOH terminales

Reducción con borohidruro de litio BH4Li

Después de la hidrólisis
CH2OH
BH4Li Se separa el amino-alcohol en medio R C
básico (los demás ionizados y él no) H
NH2

Hidrazinolisis NH2-NH2

Después de la hidrólisis COOH

CO NH NH2
NH2-NH2 R C
R C
NH 2 H
NH 2 H El terminal queda libre y los demás
como hidracidas
3. Degradación Secuencial a partir de N terminal

Permiten la identificación sucesiva de los aminoácidos, utilizando una

sola muestra de péptido

El método más utilizado es el de Edman

Identifica un amino terminal y deja el resto del péptido intacto para repetir
el proceso

Un péptido se trata con isotiocianato de fenilo, seguido por una

hidrólisis ácida. Los productos son la cadena de péptido acortada y un
derivado heterocíclico del aminoácido N-terminal llamado
feniltiohidantoína.
 SÍNTESIS DE PÉPTIDOS
La síntesis de péptidos requiere de la formación de enlaces de amida
entre los aminoácidos apropiados en la secuencia apropiada. Con ácidos
y aminas sencillos formaríamos un enlace amida simplemente
convirtiendo el ácido a un derivado activado (como un haluro de acilo o
anhídrido) y adicionando la amina.
 Método en disolución
La síntesis de péptidos en disolucióncomienza en el N terminal y finaliza
en el C terminal, o de izquierda a derecha conforme dibujamos el péptido.

Ejemplo: Considere la estructura de la alanilvalilfenilalanina, un

tripéptido
Paso. 1 El primer paso principal es el acoplamiento del grupo carboxilo de la
alanina al grupo amino de la valina. Esto no puede realizarse simplemente
activando el grupo carboxilo de la alanina y adicionando la valina. Si activamos el
grupo carboxilo de la alanina, reaccionaría con otra molécula de la misma
alanina.
Para prevenir las reacciones secundarias, el grupo amino de la alanina debe
protegerse para hacerlo no nucleofílico.

Debe protegerse con cloroformiato de bencilo (también llamado cloruro de

benciloxicarbonilo) para formar un uretano, o un éster de carbamato, que se
elimina con facilidad al final de la síntesis. Se le llama también grupo
benciloxicarbonilo, grupo carbobenzoxi(Cbz, por sus siglas en inglés) o sólo grupo
Z(abreviado Z).
Paso 2. El grupo carboxilo puede activarse sin reaccionar con el grupo
amino protegido. Cuando se trata con cloroformiato de etilo convierte al
grupo carboxilo en un anhídrido mixto del aminoácido y el ácido carbónico.
Está muy activado hacia el ataque nucleofílico.
Paso 3. Cuando se adiciona el segundo aminoácido (valina) al
aminoácido protegido, la alanina activada, el grupo amino nucleofílico de
la valina ataca al grupo carbonilo activado de la alanina, desplazando al
anhídrido y formando un enlace peptídico. (Algunos procedimientos usan
un éster del nuevo aminoácido para evitar reacciones que compitan a
partir de su grupo carboxilato).
Paso 4. La fenilalanina debe adicionarse al C terminal para completar el
tripéptido Ala-Val-Fen. La activación del grupo carboxilo de la valina,
seguida por la adición de la fenilalanina, forma el tripéptido protegido.
 RECUERDA: Para preparar un péptido más grande, repita estos dos
pasos en la adición de cada residuo de aminoácido:
1. Activar el C terminal del péptido en crecimiento por medio de la
reacción con cloroformiato de etilo.
2. 2. Acoplar el siguiente aminoácido.

PASO 5. El paso final en la síntesis en disolución es desproteger el N

terminal del péptido completado.
El enlace de amida del N-terminal debe romperse sin romper ninguno
de los enlaces peptídicos en el producto.
El grupo benciloxicarbonilo es en parte una amida y en parte un éster
bencílico, y la hidrogenólisis del éster bencílico se lleva a cabo en
condiciones moderadas que no rompen los enlaces peptídicos
PASO 5. El paso final en la síntesis en disolución es desproteger el N
terminal del péptido completado.
El enlace de amida del N-terminal debe romperse sin romper ninguno
de los enlaces peptídicos en el producto.
El grupo benciloxicarbonilo es en parte una amida y en parte un éster
bencílico, y la hidrogenólisis del éster bencílico se lleva a cabo en
condiciones moderadas que no rompen los enlaces peptídicos
Síntesis en Fase Sólida
En 1962, Robert Bruce Merrifield de la Rockefeller University desarrolló un
método para la síntesis de péptidos en fase sólida

La mayor diferencia entre la síntesis de péptidos en disolución y en fase

sólida es que la síntesis en fase sólida se realiza en la dirección opuesta:
comenzando con el C terminal y yendo hacia el N terminal, de derecha a
izquierda como escribimos el péptido. El primer paso es unir el último
aminoácido (el C terminal) al soporte sólido.
El soporte sólido es una perla de poliestireno especial en la que algunos
de los anillos aromáticos tienen el grupo clorometilo. Este polímero, con
frecuencia llamado resina de Merrifield, se prepara por medio de la
copolimerización del estireno con un bajo porcentaje de p-
(clorometil)estireno.
Recuerda que la síntesis de péptidos en fase sólida:

1. Va de C : N. Unir el C terminal protegido con Boc (ter –Butiloxicarbonilo)

a la primera perla.
2. Acoplar cada aminoácido eliminando con TFA (ácido trifluoroacético) el
grupo Boc del N terminal, después adicionar el siguiente aminoácido
protegido con Boc con la DCC (N,N”-diciclohexilcarbodiimida).

3. Romper (con HF) el péptido finalizado con la perla del polímero.

¡Muchas gracias!