FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Farmacia y Bioquímica
BIOQUÍMICA I Semestre 2020-I
SEMANA 12 ACTIVIDAD 8: SESIÓN PRÁCTICA DE BIOQUÍMICA I
o Docente: Q.F. Wilfredo Oswaldo Gutiérrez Alvarado
o Fecha: Semana del 21 de Setiembre del 2020
o Horario: G1: 13 a 15 hr.
o Tema: Determinación de glucosa en sangre. Factor de calibración de
glucosa. Influencia de la dieta sobre la formación y almacenamiento de
glucógeno hepático.
o Alumno (Apellidos y Nombres): Medina Torres Angela Dafna
Iquitos – Perú
2020
1. Describa el fundamento del método utilizado para la determinación de la glicemia.
Realice las reacciones químicas producidas.
Para la realización de esta práctica se llevó a cabo tres procedimientos:
Primero se realizó la preparación y estabilidad del reactivo de trabajo, luego se hizo
las respectivas ecuaciones para calcular la cantidad de H 2O, 4-AF, Fenol y enzima a
utilizar.
Después, se realizó la obtención de la muestra de sangre extraído a dos alumnos
voluntarios previamente desinfectados para luego ser centrifugada y obtener así el
suero.
Por último, se realizó la mezcla del suero de sangre a las muestras asignadas para
luego leer sus densidades óptimas con un equipo espectrofotómetro.
Realizado la práctica se llegó a la conclusión de que la glicemia debe mantenerse
constante ya que en condiciones normales, es el principal combustible utilizado por
el cerebro y el resto de los tejidos. La glucosa es la principal fuente de energía que
cruza la barrera hematoencefálica a una velocidad suficiente como para mantener el
funcionamiento del tejido cerebral. Un adulto requiere 190 g de glucosa por día, de
las cuales 150 g (80%) son consumidos por el cerebro, mientras que el resto es
utilizado por tejidos. Algunos tejidos sólo pueden captar glucosa de la sangre en
presencia de insulina, si sus niveles sanguíneos son bajos y no existe insulina, estos
tejidos no pueden disponer de glucosa y tienen que recurrir a la utilización de
derivados grasos para obtener energía. El páncreas genera insulina cuando los
niveles de glucosa son elevados, lo que origina un descenso de los niveles de glucosa
en la sangre.
Método de la glucosa oxidasa
La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD; D- glucosa
oxígeno l-óxidorreductasa; a ácido Glucónico y agua oxigenada); el agua oxigenada
en presencia de peroxidasa (POD; donador: hidrógeno-peróxido óxidorreductasa);
produce la copulación oxidativa del fenol con la 4-amino-antipirina (4-amino
fenazona (4-AF)) dando lugar a la formación de un cromógeno rojo-cereza con
absorbancia máxima a 500 nm. Es decir la determinación enzimática de glucosa se
da de acuerdo a las siguientes reacciones:
2. Con los siguientes valores de absorbancia: Muestra: 0.428; Stándar: 0.357
a) Encuentre el valor de la glicemia.
[GLUCOSA] mg/dl = D.O Muestra desconocida x 100 mg/dl
D.O Estándar
[GLUCOSA] mg/dl = 0,428 X 100 mg/dl
0,357
[GLUCOSA] = 119,88 mg/dl
b) Cuál sería su probable diagnóstico, explique.
Los valores normales de glucosa en la sangre se mantienen de 70 a 99 mg/dl
Se considera prediabetes a un nivel de glucosa sanguínea en ayunas entre
100 y 125 mg/dl
El resultado obtenido corresponde a un valor elevado de concentración de
glucosa en la sangre, lo que indica una hiperglicemia o prediabetes.
Se puede dar muchas razones de el por qué se obtuvo ese valor:
o Si el análisis fue elaborado de la manera correcta entonces esto indicaría de
que tiene algún problema con la secreción de insulina de parte de las células
beta del páncreas.
o Otra de las razones es de que probablemente la persona no ayunó o consumió
algún tipo de alimento antes de la prueba.
3. Respecto a la extracción de glucógeno hepático, explique qué acción cumple cada
reactivo utilizado en cada uno de los tubos (I y II)
El KOH fue empleado para hidrolizar moléculas complejas como lípidos y proteínas,
no siendo así con el glucógeno, está reacción se hizo en presencia de calor utilizando
baño de maría para que fuera más eficaz, con todo esto se logró que la digestión del
tejido hepático pudiera ocurrir permitiendo el aislamiento del glucógeno. El posterior
centrifugado se realizó con el fin de eliminar los restos del tejido no digerido.
La utilización de Na2SO4, etanol y exposición a bajas temperaturas utilizando hielo,
tuvo la finalidad de provocar la precipitación del glucógeno extraído. Al glucógeno
ya sedimentado se le añadió el H 2SO4 5N porque este cumplió la función de
hidrolizar dicha molécula cortando los enlaces glucosídicos de la misma.
4. En la cuantificación del glucógeno por el método colorimétrico, para que usamos el
fenol al 80%, y el H2SO4 concentrado.
El fenol se usa para dar cambio de color en la muestra, quiere decir que va
reaccionar.
El H2SO4 usamos para la identificación de la glucosa dando una reacción de
reducción causando que la glucosa se deshidrate perdiendo moléculas de OH.
El agua oxigenada (producida por la reacción de la glucosa con la glucosa oxidasa)
va provocar la reacción oxidativa con la 4-aminofenazona y el fenol dando una
coloración cromógeno rojo-cereza.
