FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA
PRÁCTICA Nro. 02
Laboratorio de:
Microbiología y Parasitología
Temática :
Crecimiento microbiano: generalidades. Control del crecimiento microbiano: desinfección,
esterilización y antisepsia. Agentes microbicidas y microbiostáticos. Acción de los agentes físicos y
químicos sobre los microorganismos
Antimicrobianos: Quimioterápicos y antibióticos. Mecanismos de acción de los
antimicrobianos. Resistencia antimicrobiana. Antibiograma y espectro antibiótico
Sesión: 2 Capacidad:
Explica el crecimiento y control microbiano
en los procesos de desinfección,
esterilización y antisepsia
Estudiante: Tiempo desarrollo de la guía:
IV Ciclo de la Escuela Profesional de Enfermería 150 minutos
I. INTRODUCCIÓN
El crecimiento microbiano requiere energía para la formación de proteínas, ácidos
nucleicos, polisacáridos y lípidos a partir de elementos preformados en el medio de
crecimiento o ser sintetizados por la propia célula, donde cada especie microbiana tiene
un tamaño más o menos estable. Cuando se siembran microorganismos en un medio de
cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando los
nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "producir" nuevos microorganismos. Este
proceso continúa hasta que algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato
limitante) y el crecimiento se detiene. También puede detenerse el crecimiento por
acumulación de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos.
No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental.
Así, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie, y en cambio ser
neutras o beneficiosas para otra. Entre los factores ambientales se encuentran factores
físicos (temperatura desecación, radiaciones, ondas sonoras, presión hidrostática, presión
osmótica) y químicos (pH, salinidad). Así mismo, el crecimiento microbiano se ve
influenciado por la presencia de sustancias químicas en el ambiente, las cuales pueden ser
perjudiciales para su crecimiento, y que, en muchas ocasiones estas sustancias se utilizan
como agentes desinfectantes o antisépticos.
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La resistencia a los antimicrobianos es un fenómeno biológico que ocurre de manera
natural, pero que se ha incrementado enormemente debido al uso inapropiado y
negligente de estos fármacos. Los ensayos de susceptibilidad están indicados para apoyar
la quimioterapia antimicrobiana de tratamiento en procesos infecciosos por bacterias en
las que la identidad del microorganismo no es suficiente para predecir en forma confiable
su susceptibilidad. Estos ensayos son a menudo indicados cuando se piensa que el
organismo causante pertenece a una especie capaz de mostrar resistencia a los agentes
antimicrobianos más comúnmente usados. Los mecanismos de resistencia incluyen la
producción de enzimas inactivantes del antibiótico, que alteran el objetivo, o alteran la
acción.
El método que actualmente recomienda el CLSI está basado en el método originalmente
descrito por Bauer et al., (método de Kirby-Bauer). Este es el método de difusión en disco
en que se han desarrollado estándares para su interpretación y está apoyado por datos
clínicos y de laboratorio. Las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos se han
convertido en procedimientos de rutina en la práctica clínica y la información generada a
partir de ellas es fundamental para la vigilancia de los perfiles de sensibilidad y la
detección de nuevos patrones de resistencia por el laboratorio. Existen vanos métodos
para probar la susceptibilidad de los microorganismos a los antibióticos siendo la difusión
en disco el más utilizado. Se realiza en un medio transparente y simple como el agar de
Mueller Hinton. Se fundamenta en la liberación del antibiótico al medio e inhibición del
crecimiento bacteriano en áreas concéntricas a la del disco
II. CONOCIMIENTOS PREVIOS:
¿Qué es crecimiento microbiano?
¿Todos los microorganismos crecen de la misma manera?
¿Cómo se puede medir el crecimiento microbiano?
¿Qué es un desinfectante?
¿Qué es un antiséptico?
¿Qué es el antibiograma?
¿Para qué sirve el antibiograma?
¿Cómo se interpreta el antibiograma?
III. MATERIAL
Videos e imágenes de atlas virtuales de Microbiología y Parasitología
IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Actividad 1. Crecimiento microbiano
Crecimiento bacteriano: recuento de placa
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A partir de una muestra líquida se añade 0.1mL en la superficie del placas de Petri
conteniendo PCA (Plate Count Agar: Agar Cuenta Gérmenes), posteriormente la muestra
se extiende utilizando el asa de Drigalsky. Finalmente se incuba a 37°C por 24 horas, y
posteriormente se cuenta las colonias que desarrollan.
Añadir 0.1 mL Extender Contar las colonias
1 PUNTO
PLACA NÚMERO DE COLONIAS DILUCIÓN RECUENTO (ufc/mL)
1
Crecimiento fúngico: medición del crecimiento lineal
A partir de un cultivo puro de un hongo se siembra por puntura en la parte central del Agar
Sabouraud, luego se incuba a 25°C por 3 a 5 días. El crecimiento radial se registra a partir del
segundo día, y se mide cada 24 horas, hasta que el hongo haya crecido en toda la superficie
del medio de cultivo.
Actividad 2. Acción de los desinfectantes sobre las bacterias
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Se realiza a mediante el método de Kirby Bauer modificado, para lo cual, a partir de una
suspensión bacteriana (concentración aproximada a 1,5x108 cel. /mL), utilizando un hisopo estéril,
se siembra por superficie en placas con Agar Mueller Hinton, luego se lleva a secar a la estufa por
10 minutos aproximadamente. Posteriormente se coloca, equidistantemente, discos embebidos
con diferentes soluciones de desinfectantes (alcohol yodado, lejía al 2%, fenol al 1% y formol al
10%) en la superficie del Agar Mueller Hinton contenido en las placas de Petri, y luego se incubó a
37º C por 24 horas. Finalmente se mide el halo de inhibición de crecimiento
1 PUNTO
DESINFECTANTE HALO DE INHIBICIÓN DE INTERPRETACIÓN
CRECIMIENTO (mm)
ALCOHOL YODADO
LEJÍA (2%)
FENOL (1%)
FORMOL (10%)
Actividad 3. Acción de la temperatura sobre las bacterias
A partir de un cultivo puro de una bacteria, se siembra en 4 tubos conteniendo Caldo Nutritivo, a
continuación se colocan, 3 de los tubos sembrados, en baño María a 100°C, durante 5; 10 y 15
minutos respectivamente; el cuarto tubo no se somete a la temperatura de 100°C, con la
finalidad de utilizarlo de control. Posteriormente los 4 tubos se incuban a 37°C por 24 horas.
Finalmente se observa si hay o no crecimiento.
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1 PUNTO
BACTERIA 0 5 10 15
Staphylococcus aureus
Bacillus sp.
Actividad 4. Antibiograma
Se realiza a mediante el método de Kirby Bauer modificado, para lo cual, a partir de una
suspensión bacteriana (concentración aproximada a 1,5 cél. /mL), utilizando un hisopo
estéril, se siembra por superficie en placas con Agar Mueller Hinton, luego se lleva a secar
a la estufa por 10 minutos aproximadamente. Posteriormente se coloca,
equidistantemente, discos de antibióticos, en la superficie del Agar Mueller Hinton
contenido en las placas de Petri, y luego se incuba a 37º C por 24 horas. Finalmente se
mide el halo de inhibición de crecimiento.
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2 PUNTOS
BACTERIA ANTIBIÓTICO HALO DE INTERPRETACIÓN
INHIBICIÓN DE
CRECIMIENTO (mm)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Actividad 5. Espectro antibiótico
Se coloca en el centro de una placa con Agar Mueller Hinton un disco de antibiótico,
posteriormente se siembra, por estría, 4 especies bacterianas (2 Gram positivas y 2
Gramnegativas) desde el borde del disco del antibiótico hacia el borde de la placa y luego
se incuba a 37º C por 24 horas.
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1 PUNTO
ANTIBIÓTICO INTERPRETACIÓN
V. CONCLUSIONES (1 PUNTO)
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VI. EVALUACIÓN
1. Mencione 4 formas de medición del crecimiento microbiano (1 PUNTO)
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2. Teniendo en cuenta los resultados de acción de los desinfectantes sobre las bacterias,
¿Cuál o cuáles de los desinfectantes recomendaría usted para desinfectar los ambientes
hospitalarios? Fundamente su respuesta. (2 PUNTOS)
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3. Explique los resultados obtenidos de acción de la temperatura sobre las bacterias. (2
PUNTOS)
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4. ¿QUÉ SE EVALÚA EN EL ANTIBIOGRAMA? (1 PUNTO)
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5. ¿QUÉ SE EVALÚA EN EL ESPECTRO ANTIBIÓTICO? (1 PUNTO)
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3. UNA VEZ QUE SE TIENE LAS MEDIDAS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DE CRECIMIENTO DE
LAS BACTERIAS, ¿CÓMO SE DETERMINA SI DICHAS BACTERIAS SON SENSIBLES O
RESISTENTES A LOS ANTIBIÓTICOS UTILIZADOS? (2 PUNTOS)
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2. MENCIONE 2 CAUSAS DE LA APARICIÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIBIÓTICOS.
FUNDAMENTE SUS RESPUESTAS (1 PUNTO)
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VII. BIBLIOGRAFÍA (4 PUNTOS)
Código de LIBROS/REVISTAS/ARTÍCULOS/TESIS/PÁGINAS [Link]
biblioteca
616.01 / M95c Murray P, Rosenthal K, Pfaller M. Microbiología Médica. 6ta. ed. Madrid: Elsevier
España; 2009.
579.1788 / M14A Madigan M, Martinko J, Parker J. Biología de los Microorganismos de Brock. 12ava ed.
Madrid: Pearson; 2009.
616.01 / K74A Koneman E et al. Diagnóstico Microbiológico Texto y Atlas. 6ta ed. Argentina: Médica
Panamericana S.A; 2008.
Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, Turck M. Antibiotic susceptibility testing by a
standardized single disc method. Am. J. Clin. Pathol. 1966, 45: 493
Zwietering M, Jongenburger I, Rombouts F, Van'T Riet K. Modeling of the Bacterial
Growth Curve. Applied and Environmental Microbiology. 1990; 56 (6): 1875–1881
