Universidad de
Córdoba,
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
Comprometida
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE REGENCIA DE FARMACIA con el Desarrollo
Regional.
ASIGNATURA: Fundamentos de microbiología
CÓDIGO: 502127
COMPONENTE: Práctico
UBICACIÓN: II Semestre
REQUISITOS: Fundamentos de biología
CRÉDITOS: 3
TOTAL DE HORAS SEMANALES: 2
DOCENTES: Renata Parodi – Gloria Vergara – Cristian Hernández
PRACTICA № 4
COCOS GRAM POSITIVOS
OBJETIVO
• Identificar cocos gran positivos a partir de muestras faríngeas y óticas.
• Conocer las características microbiológicas generales de los generos
Staphylococcus y Streptococcus.
INTRODUCCION
Los microorganismos de esta familia se caracterizan por dividirse en más de un
plano en forma de paquetes o racimos, miden de 0,5 a 4 micras de diámetro y son
Gram positivos; pueden ser móviles o inmóviles, anaerobios facultativos, catalasa
positivos; producen ácido sin gas a partir de la glucosa. Sus requerimientos
nutricionales son variables, todas las cepas crecen en presencia de NaCl 5% y
muchos crecen en concentraciones de 10 a 15%.
GENERO STAPHYLOCOCCUS
Son cocos que se agrupan en pares o racimos y cuyas células individuales
muestran variaciones de tamaño y grampositividad. No móviles no esporógenos.
Aerobios y facultativamente anaerobios. Catalasa positivos y oxidasa negativos.
Atacan los carbohidratos por fermentación. Crecen en presencia de NaCl al 10% y
a temperaturas desde los 18 a los 40 ºC.
Forman parte de la flora normal de la piel y mucosas del hombre ocasionando
diversos procesos infecciosos en pacientes que presenten algún factor
predisponente. Dentro del enorme número de especies estafilocócicas solamente
tres tienen tendencia a asociarse con le enfermedad humana: S. aureus, S.
epidermidis y S. saprophyticus.
Los estafilococos resistentes a la meticilina son un grupo de estafilococos muy
resistentes a los antibióticos y que constituyen un serio problema a nivel
hospitalario.
La especie de este género con mayor importancia clínica es Staphylococcus
aureus.
Cultivo
Los estafilococos crecen rápidamente en casi todos los medios bacteriológicos
bajo condiciones aerobias o microaerofílicas y son catalasas y coagulasa positivo
para el Estafilococo aureus. Las muestras clínicas principalmente se cultivan en
medios de agar enriquecidos con sangre de carnero y salado manitol a 37ºC de 18
a 24 horas.
GÉNERO STREPTOCOCCUS
es un grupo de bacterias formado por cocos gram positivos. Estas bacterias
crecen en cadenas de longitud variable. Los estreptococos son oxidasa y catalasa
negativos.
Para clasificar el genero Streptococcus se tiene en cuenta varias consideraciones,
siendo una de ellas la capacidad que tienen para producir hemolisis alrededor de
sus colonias sobre el agar sangre o chocolate. Y se clasifican en
Gamma hemolíticos: son llamados Streptococcus no hemolíticos, ya que no van a
producir ningun tipo de modificación en la periferia de sus colonias. No producen
hemolisis.
Beta hemolíticos:: Son Streptococcus hemolíticos y van a corresponder a aquellos
que producirán una destrucción total de los globulos rojos próximos a su colonia,
produciendo halos de transparencia generalmente grandes en torno a su colonia.
Alfa hemolíticos Son Streptococcus que producirán una destrucción parcial de los
globulos rojos próximos a su colonia, produciendo halos de coloración parda
verdosa en torno a su colonia.
CLASIFICACIÓN DE GENERO STREPTOCOCCUS LANCEFIELD
Nombre Lancefield Hemolisis
S. pyogenes Grupo A β (beta)
S. agalactiae Grupo B Β (beta)
S. dysagalactiae Grupo C, G α,β, γ (afa, beta,
gama)
S. bovis Grupo D γ (gama)
S. angynosus Grupo C,G α,β, γ (afa, beta,
gama)
S. viridans Ninguno αγ (alfa, gama)
S. pneumoniae Ninguno α (alfa)
Enterococcus faecalis Ninguno αγ (alfa, gama)
MATERIALES
• Guantes, bata tapa bocas.
• Marcador de vidrio
• Agar sangre con alfa y beta hemolisis.
• Asas redondas
• Bajalenguas
• Escobillones esteriles
• Portaobjetos
• Plasma sanguíneo
• Coloración de Gram
• Peróxido de hidrogeno
• Incubadora
• oxidasa.
PROCEDIMIENTO
1. Con los escobillones estriles tomar una muestra de secreción faríngea
2. Hacer una coloración de gram de la misma muestra y reportar lo
observado.
3. Sembrar la muestra (faríngea u ótica) en agar sangre, por agotamiento.
4. Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
5. Evaluar las colonias y la hemolisis.
6. Realizar la prueba de la catalasa.
7. Realizar la prueba de la coagulasa.
8. Realizar el informe.
PRUEBAS DE IDENTIFICACION
• COLORACION DE GRAM: Realizar una coloración de Gram a los frotis.
• PRUEBA DE LA CATALASA: La prueba de la catalasa es una prueba
usada para determinar la presencia de catalasa en microrganismos, que
usualmente se usa para diferenciar los estafilococos (catalasa positiva) de los
estreptococos (catalasa negativa)
el radical hidroxilo y el peróxido de hidrogeno se forman durante la reducción del
dioxigeno en agua.
Agregamos una gota de peróxido de hidrógeno al 3% a un lamina portaobjetos a
continuación tomamos una muestra de la cepa del microorganismo a estudiar y la
ponemos en contacto con el peróxido y debemos observar la reacción de esta.
La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de oxígeno.
Resultados:
(+) Staphylococcus aureus ( - ) Streptococcus spp.
• PRUEBA DE LA COAGULASA
PRUEBA DE LA COAGULASA EN LAMINA: Hacer una suspensión abundante en
una colonia en 0.1 ml de agua destilada sobre un a lamina portaobjetos; agregar
una gota de plasma, mezclar perfectamente. Observar si hay formación de
coágulos en 10 segundos. La prueba debe leerse inmediatamente pues pueden
ocurrir resultados positivos en un tiempo mayor.
PRUEBA DE LA COGULASA EN TUBO: Hacer una suspensión de varias colonias
de un cultivo que tenga de 24 a 48 horas de incubación; en 0.5 ml de plasma
fresco citratado e incubar a 37ºC. Observar a partir de 2 horas la formación de
coágulos.
• PRUEBA DE LA OXIDASA.
El disco se moja con unas cuatro asadas de agua desionizada y con el asa
bacteriológica se transfiere una gran masa de bacteria pura al disco.
Se observa el disco por tres minutos, en ese tiempo el área de inoculación debe
pasar entre azul oscuro y granate o incluso negro, entonces los resultados son
positivos. Si no hay cambio en esos tres minutos, la prueba es negativa.
Determina si una bacteria produce alguna de las citocromo c oxidasas. El reactivo
pasa de azul oscuro a granate al ser oxidado, y se vuelve transparente al ser
reducido.
Taller
1. Que prueba utilizaría como indicadora de virulencia o patogenicidad en el
género Staphylococcus?
2. Indique algunos de los medios de cultivo y sus características en los cuales
los Staphylococcus sean capaces de crecer.
3. En qué consiste la actividad hemolítica de los estafilococos sobre los
glóbulos rojos.
4. Hacer un esquema de identificación del genero Staphylococcus y
estreptococcus.
5. Enuncie tres pruebas que permitan la identificación plena de S. aureus.
BIBLIOGRAFIA
BROCK, Thomas – MADIGAN, Michael. Microbiología. Prentice Hall
Hispanoamericana. S. A. México. 6ª edición.
PUMAROLA y Cols. Microbiología y Parasitología Médica, segunda edición,
editorial Reverte. España
KONEMAN y cols. Diagnostico Microbiológico, Texto y Atlas Color. Editorial
Médica Panamericana. 3ª. Edición.
