INFORME DE LABORATORIO 4:
PARED CELULAR PROCARIOTAS
ELABORADO POR:
MAYRA ALEJANDRA URIBE PORTILLO - CÓDIGO: 20171021
EQUIPO DE TRABAJO DE LABORATORIO
DARLY ALEJANDRA ZÚÑIGA MARTÍNEZ - CÓDIGO 20171005
BRITNEY DAYANA GONZÁLEZ SOLANO - CÓDIGO: 20171038
DOCENTE:
ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA
BIÓLOGA QUÍMICA
UNIVERSIDAD DE SANTANDER UDES CÚCUTA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO
CÚCUTA 26, 09, 2020
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
TABLA DE CONTENIDO
Resumen…………………………………………………………………………………….
Introducción………………………………………………………………………………....
Objetivos…………………………………………………………………………………….
Marco Teórico………………………………………………………………………………
Procedimiento o Metodología…………………………………………………………….
Conclusión………………………………………………………………………………….
Referencias………………………………………………………………………………………...
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
RESUMEN
La pared celular es una capa resistente y rígida que soporta las fuerzas osmóticas
y el crecimiento, y se localiza en el exterior de la membrana plasmática en las
células de plantas, hongos, algas, bacterias y arqueas. La pared celular de celulosa
y proteínas, además de cloroplastos para la clorofila destinada a la fotosíntesis,
presentan una vacuola central grande, que le otorga a la célula su forma.
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de
la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias
que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas.
Están formadas por una pared más fina formada por menos capas de
peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram),
al microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un
gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram,
dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +. Para
hacer una tinción de gram debemos:
● Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un hisopo (bastón estéril
de algodón).
● Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
● Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
● Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un
minuto.
● Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador de violeta de genciana
(Lugol). El Lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en
agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
● Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante
unos segundos.
● Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para
distinguir las gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar
de incoloras) con un tono rosado o rojo. Lavar con agua.
● Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de
color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
INTRODUCCIÓN
La mayor parte de los procariotas posee una pared celular está rígida rodeando al
protoplasto. Las excepciones son los micoplasmas (dentro del dominio Bacteria) y
algunas arqueas, como Thermoplasma.
En un microscopio electrónico se puede observar en íntimo contacto con la
membrana citoplásmica, con un espesor que oscila entre 10 y 80 nm (según
especies) -frente a los 8 nm de la membrana celular- , y con una estructura más o
menos compleja, según los tipos bacterianos.
Las paredes celulares más frecuentes en eubacterias comparten un componente
común: paredes de tipo Grampositivo o de tipo Gramnegativo.
Unas pocas eubacterias (como las del gen. Planctomyces) poseen paredes a base
de proteínas.
Las Arqueas poseen paredes diferentes a las de eubacterias y se pueden agrupar
en diversos tipos.
El grueso de este capítulo está dedicado al estudio de las paredes Grampositivas y
Gramnegativas, con sus principales variantes, pero finalizamos con una alusión a
los principales modelos de paredes arqueanas.
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
OBJETIVOS
● Reconocer los aspectos de la pared celular de las bacterias
● Establecer la importancia y fundamento de la Tinción de Gram.
● Adquirir destreza en técnicas de tinción.
● Clasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas.
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
MARCO TEÓRICO
1. Investigue y explique la relación existente entre la estructura de la pared celular
bacteriana y la tinción de Gram.
La pared celular es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la
Tinción de Gram . La propiedad de teñirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o
Gram negativas) por esta coloración es un criterio de clasificación importante
correlacionable con otras propiedades bacterianas. Unos pocos organismos son
Gram-variables.
Tanto las Grampositivas como las Gram-negativas captan la misma cantidad de
cristal violeta (CV) e iodo (I). El complejo CV-I sin embargo es atrapado dentro de
la célula Gram positiva por la deshidratación y la reducción del tamaño de los poros
de la pared resultante del proceso de lavado con solvente. En contraste en las Gram
negativas la fina (y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la
extracción por el solvente del complejo.
Avala lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con lisozima
bacterias Gram positivas, se ve que los protoplastos siguen teñidos, pero pierden el
colorante si se los trata con alcohol. Esto indica que el colorante es fijado a nivel del
protoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram positivas es la que impide
la extracción del colorante. Corroborando esta suposición se observa que cuando
Bacillus subtilis emerge de su espora su pared celular está "inmadura" y se
comporta como Gram negativa. Cuando la pared celular adquiere su estructura final
pasa a ser Gram positiva.
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
2.¿Cuál es la función de los colorantes empleados en la tinción de Gram? ¿Qué tiñe
cada uno de ellos? Investigue y explique.
El cristal violeta: es un colorante orgánico, sintético y alcalino de triamino-
trifenilmetano. Se encuentra como un polvo con brillo metálico verde oscuro. Recibe
varios nombres, entre los cuales se puede mencionar cloruro de hexametil
pararosanilina o violeta de metilo, violeta de anilina, violeta de genciana, etc.
El Lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de
potasio) y El (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan
de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared
de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en
solución acuosa con el cristal violeta.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas,
mientras que las gram positivas permanecen violetas.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con
un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad
el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de gram
positivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gram
negativos. Basándonos en la reacción gram, podemos clasificar a los
microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los
que mejores resultados dan en la coloración gram. Los representantes más usados
de este grupo son violetas de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad,
violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
3.¿Señale las ventajas que presenta a nivel clínico el uso de la tinción de Gram?
Investigue y explique.?
La tinción de Gram es de gran utilidad para realizar el examen directo de muestras
clínicas, porque permite determinar la calidad de ellas, la respuesta inflamatoria, la
naturaleza y cantidad de microorganismos presentes y el germen predominante en
una infección mixta o con muestras contaminadas con biota normal.
Adicionalmente, se puede correlacionar el resultado del examen directo con el
resultado de los cultivos y de esta manera, disponer de un adecuado control de
calidad. Este examen tiene valor diagnóstico y es de informe inmediato en muestras
de líquido cefalorraquídeo y líquidos corporales, esputo, sangre, orina, abscesos, y
secreciones (uretral, cervical y vaginal). No tiene valor diagnóstico en muestras
faríngeas y nasofaríngeas ya que la biota observada hace parte de la flora normal
de estos sitios anatómicos. Es de uso limitado en muestras de materia fecal (el
diagnóstico presuntivo de infecciones por Campylobacter sp.
La tinción de Gram constituye una herramienta de gran utilidad en el diagnóstico
etiológico; sin embargo, la sensibilidad de esta técnica es variable según el tipo de
muestra y la carga bacteriana presente en ella. La concentración de la muestra,
como un paso previo a su tinción mejora el rendimiento, por lo que es recomendable
su uso de rutina.
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
CONCLUSIÓN
La célula es la unidad estructural de los organismos, existen dos clases eucariota y
procariota, que se diferencian principalmente porque la eucariota posee organelos
y la otra no, y el tamaño de la procariota es menor al de la eucariota y además la
procariota no tiene núcleo definido.
En el laboratorio se comprobó que todos los organismos vivos están formados por
células eucariotas, como el ser humano.
Se reconocieron en el microscopio, las diferencias morfológicas fundamentales de
células eucariotas
El empleo de colorantes en la observación de células representa una gran ventaja
ya que permite identificar con mayor facilidad las estructuras básicas de la misma,
siempre y cuando se empleen concentraciones bajas, de lo contrario se convierte
en problema porque si el colorante es muy concentrado no deja diferenciar nada en
la célula.
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
REFERENCIAS
● https://www.greenfacts.org/es/glosario/mno/membrana-
celular.htm#:~:text=Definici%C3%B3n%3A,l%C3%ADpidos%20que%20encierran%20las%2
0prote%C3%ADnas
● https://www.monografias.com/trabajos95/celulas-procariotas/celulas-procariotas.shtml
● http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema04.html#:~:text=Plantas%2C%20algas%
20y%20hongos%20poseen,previene%20de%20la%20presi%C3%B3n%20osm%C3%B3tica.
&text=Por%20ejemplo%2C%20la%20pared%20celular,como%20la%20celulosa%20y%20p
ectina.
● https://es.wikipedia.org/wiki/Pared_celular
FORMATO REVISADO POR: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA –2017A
