OPTIMIZACIÓN DE UN ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA CON LLAMA.
OBJETIVO
Conocer el manejo de un espectrofotómetro de absorción atómica y la obtención de lecturas en
absorbancia o energía de emisión para determinar la concentración del elemento metálico a analizar.
El procedimiento que se va a indicar es válido de forma independiente a la marca del instrumento.
GENERALIDADES
La espectroscopia de Absorción atómica es una técnica analítica que permite la cuantificación de 67
elementos metálicos presentes como contaminantes o constituyentes en muestras de diverso origen,
como son, fármacos, fluidos y tejidos biológicos, muestras industriales, ambientales y en alimentos
principalmente. En esta técnica la solución que contiene el elemento a cuantificar es introducida a la
llama como un vapor atómico a través del cual pasa radiación electromagnética de longitud de onda
(línea de resonancia), característica del elemento metálico a cuantificar. Los átomos presentes en la
llama absorben una determinada cantidad de radiación de acuerdo a la ley de Beer.
PRÁCTICAS DE SEGURIDAD BÁSICAS
El manejo del Espectrofotómetro de Absorción Atómica involucra materiales que representan un
riesgo latente. Dentro de estos materiales tenemos:
* Gases comprimidos.
* Fluidos corrosivos.
* Líquidos inflamables.
* Llama.
* Generación de calor, vapores y humos, (sistema de extracción eficiente).
Los gases que usualmente se emplean en esta técnica son aire como oxidante y acetileno como
combustible, se recomienda que los reguladores y los ductos sean los adecuados. Para el suministro
de acetileno, nunca se debe emplear tubería o conexiones metálicas que contengan más del 65% de
cobre, ya que con este metal se forman acetiluros de cobre explosivos. Nunca se deben engrasar las
conexiones para acetileno.
QUEMADORES
* 5 cm de longitud: mezcla de óxido nitroso-acetileno, o para aire-acetileno.
* 10 cm de longitud: exclusivamente para la mezcla de aire acetileno. Nunca para la mezcla de óxido
nitroso-acetileno.
REVISIÓN DE SEGURIDAD
* Área de trabajo limpia.
* Sistema de extracción funcionando correctamente.
* Instalación correcta del quemador y la cámara de mezclado.
* La trampa de líquidos debe estar llenada correctamente con el disolvente apropiado.
* La instalación de los cilindros de gas y de los reguladores, así como la presión de salida debe ser
de acuerdo con las especificaciones del Manual de Procedimientos del instrumento.
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
Mediciones analíticas en Absorción Atómica.
a) Cerrar todas las válvulas de gas.
b) Presionar el botón POWER.
c) Instalar la lámpara de cátodo hueco para el metal que se va a cuantificar, seleccionar la corriente
de trabajo para la lámpara de acuerdo a lo especificado por el fabricante y descrito en el marbete.
d) Ajustar la longitud de onda de la línea de resonancia para el metal que se va a cuantificar.
e) Seleccionar el ancho de banda para el monocromador.
f) Ajustar la posición horizontal y vertical de la lámpara de cátodo hueco a un máximo en la ganancia
del indicador de energía.
g) La expansión de escala, se recomienda 1X, considere que a mayor escala mayor ruido.
h) Se recomienda un periodo de integración de 3 segundos.
i) Abrir los gases, ajustar la presión de salida recomendada y encender la llama de acuerdo al
manual de operación del instrumento.
j) Para lecturas de absorbancia, aspirar agua desionizada y ajustar a cero. Repetir con el blanco de
reactivos ajustando a un valor de cero y continuar con las preparaciones de estándar de
concentración conocida del analito a ser cuantificado. Registrar las lecturas.
k) Ajustar a cero aspirando el blanco de reactivos de la muestra y continuar con las muestras de
concentración desconocida. Registrar las lecturas de absorbancia.
l) Construir la curva de calibración con cero al origen (excepto adición de estándar), e interpolar los
valores obtenidos para cada una de las muestras.
m) Realizar el cálculo correspondiente, considerando el factor de dilución.
Mediciones analíticas para Emisión Atómica.
a) Seleccionar el modo de operación “EMISION”, encender la llama.
b) Aspirar el blanco de agua desionizada y ajustar a cero, continuar con las preparaciones de
estándar que contenga el valor más alto de concentración del analito y ajustar con el botón de
ganancia del detector a un valor aproximado de 0.800 de energía de emisión.
c) Nuevamente aspirar el blanco de agua desionizada y ajustar nuevamente a cero, continuar con la
lectura para el blanco analítico y ajustar a cero, obtener las lecturas para las preparaciones de
estándar anotando los valores de energía de emisión. Continuar aspirando las muestras de
concentración desconocida.
d) Construir la curva de calibración con cero al origen, e interpolar los valores obtenidos para cada
una de las muestras.
e) Realizar el cálculo correspondiente, considerando el factor de dilución.
Al terminar la práctica, con la llama encendida aspire agua desionizada o el disolvente orgánico
empleado durante 10 minutos, posteriormente proceda a apagar la llama y el equipo en la forma
usual. Eliminar los desechos acumulados
Cuestionario de Fluorometria
1.-Explique el fenómeno de fluorescencia
2.- ¿Qué tipos de compuestos presentan fluorescencia y por qué?
3.- ¿Cómo afecta la concentración de las especies en solución a la intensidad de la fluorescencia?
4.-Dibuje el diagrama de los componentes del espectrofluorometro y explique cada una de ellas
5.- ¿Qué tipos de lámpara utilizan los espectrofotómetros?
6.- ¿Qué factores afectan la fluorescencia?
7.- ¿Qué es fosforescencia?
8.- Filtros a utilizar
Nota: Para la riboflavina buscar λex, λem , el método será adición de estándar
Refractometría
1.-Fundamento del Método
2.-¿Qué es el Índice de Refracción Relativo?
3.-¿Qué es el Índice de Refracción Absoluto?
4.-Enuncie la ley de Snell
5.-Escriba que significa cada uno de los términos y sus unidades
sen i
ntλ = λ= n=
sen r
i=
r=
6.-Mencione al menos tres usos que se da a la refractometría
7.- Realice y explique brevemente los componentes de un refractómetro
8.- Mencione como se lleva a cabo la calibración del refractómetro y los cuidados que
debe tener
9.- ¿Qué es el prisma de Amici?
