“UNIVERSIDAD NACIONAL

DE TRUJILLO”

“CUALIFICACIÓN DE LA
Í MICROPIPETA”

Alumnos:

 Arias Villanueva Brian Jeanpiere

 Bejarano de la Cruz Anderson José
 Cuaco Serrano Rodrigo Rafael
 Moreno Niquin Eida Katerine

Docente:
III CICLO  Dr. Cruz Monzón, José Alfredo

TRUJILLO - PERÚ
2020
I. OBJETIVOS
 Desarrollar habilidad para manipular y manejar diversos tipos de micropipetas.
 Verificar la precisión y exactitud del volumen aportado por una micropipeta como
una forma de asegurar la calidad de los ensayos realizados que involucren su
utilización.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

2.1. Concepto
La micropipeta es un instrumento de recolección de sustancias, siendo un tipo
de pipeta y destacando por estar diseñada especialmente para la recolección
de muestras pequeñas. La misma se suele fabricar de vidrio, aunque otras
partes que la componen son de plástico y posee una graduación para controlar
el volumen de las sustancias.

La micropipeta está conformada por una jeringa con un pistón accionado con
resorte y otro coaxial para garantizar el hermetismo, con una punta de plástico
removible. Al principio esta punta fue diseñada de teflón, pero luego fue
rediseñada en polipropileno, haciéndola más económica de producir.
Permitiendo que sean fácilmente desechables.
2.1. Partes de una micropipeta
 Empuñadura o cuerpo principal de la micropipeta.
 Émbolo o botón de accionamiento usado para el llenado y dispensado de
los líquidos. Presenta dos topes que indican la presión que debemos
ejercer para absorber (1er tope) y descargar (2º tope) el líquido.
 Rueda o tornillo de ajuste del volumen con el que establecemos el volumen
exacto que queremos dispensar.
 Ventana indicadora del volumen que muestra el volumen seleccionado.
 Botón de eyección o botón expulsor de la punta para desechar las puntas
usadas.
 Cono o soporte de la punta.
 Eje de la micropipeta, que une la empuñadura o cuerpo con el soporte de
la punta. En algunos modelos puede tener acoplado el eyector.
 Bloqueo del ajuste del volumen: la mayoría de micropipetas poseen este
mecanismo para evitar cambios accidentales en la configuración de
volumen seleccionado durante el pipeteo.
 La micropipeta no es un instrumento complicado de utilizar, al contrario; es
bastante intuitivo y es usado por profesionales con experiencia tanto como por
estudiantes del área. Sin embargo, hay unas cuantas cosas a tener en cuenta
sobre todo dependiendo el tipo de líquido que se esté tratando.

 Líquidos normales: Verifica que este se encuentre limpio. Presiona el botón

del extremo superior hasta el primer tope. Sumerge verticalmente en el
líquido la pipeta para tomar la muestra y para botarla presiona hasta el
segundo tope. Para quitar la punta solo presiona el eyector.
 Líquidos viscosos: Luego de verificar que el instrumento está limpio se
presiona el botón superior hasta el segundo tope. Al introducir la punta en
la sustancia, suelta lentamente el botón, asegurándote que la punta haya
recolectado la muestra. Para desechar la solución presiona el botón hasta
el primer tope.
2.3. Conversión a Color en Pipetas
Todas las pipetas de pistón disponen de puntas desechables para minimizar
los riesgos de contaminación. Para facilitar el uso del tipo de punta adecuado
los fabricantes han adoptado un código de color según el volumen a dispensar
y que en las de uso más general coincide con el color de las puntas utilizadas.
 Rango volumen Característico
Micropipeta (μL) de identificación
0,1 μL – 2,5 μL Negro
0,5 μL – 10 μL Gris
2 μL – 20 μL Gris/Amarillo
10 μL – 100 μL Amarillo
50 μL – 200 μL Amarillo
100 μL – 1000 μL Azul

El rango de trabajo de la mayoría de micropipetas es entre el 10 y el 100% de

su volumen nominal máximo, es decir, del volumen máximo de líquido teórico
que es capaz de medir dicha micropipeta. Sin embargo, hay que tener en
cuenta que la precisión de las micropipetas disminuye al acercarnos a su
volumen de trabajo mínimo. Por ello, para elegir la micropipeta con la que
vamos a trabajar debemos recordar que el rango de trabajo óptimo de las
micropipetas está entre el 35 y el 100% del volumen nominal indicado y que
nunca debemos trabajar por debajo del 10% de su volumen máximo.

III. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

1. Balanza analítica cualificada sensibilidad 0,1 mg.
2. Micropipetas p200 y p1000.
3. Puntas amarillas y azules.
4. Vasos de precipitación de 20, 50 y 100 mL.
5. Guantes descartables de látex.
6. Agua destilada.
7. Termómetro con escala graduada de bajo rango.
8. Medidor de humedad relativa y presión atmosférica.
IV. PROCEDIMIENTO
Dependiendo de rango de volumen de la micropipeta, utilizar rangos que involucren la
décima parte del rango. Así si la pipeta es de 20 − 200𝜇𝐿 se tomarían cada 20𝜇𝐿, en
cuyo caso:
1. Colocar en balanza analítica un vaso de precipitados de 50𝜇𝐿 vacío, limpio y seco.
2. Esperar que estabilice completamente su valor y anotar con sus 4 cifras decimales.
3. Colocar una punta a la micropipeta y especificar el volumen de 20𝜇𝐿.
4. En un vaso de precipitados de 200𝑚𝐿 colocar unos 90 𝑚𝐿 de agua destilada.
5. Presionar lentamente hasta el primer toque la micropipeta.
6. Introducir la punta de la micropipeta a una profundidad entre 3 y 5 mm de la
superficie del agua destilada y succionar verticalmente el volumen especificado
de 20𝜇𝐿.
7. Depositar cuidadosamente el volumen tomado en el vial que está dentro de la
balanza, presionando hasta el segundo toque de la micropipeta y de allí al tercero
(al fondo del émbolo).
8. Anotar el peso registrado con sus 4 cifras decimales.
9. Repetir la misma operación 5 veces desde el punto (5), tomando como valor inicial
de cada medición, el peso registrado de la medición anterior.
10. De ser necesario colocar otro vaso y anotar el valor de su peso. (si no hay
evaporaciones considerables podría utilizarse el mismo vaso inicial)
11. Fijar ahora en la micropipeta, el volumen de 40𝜇𝐿 y repetir las mismas operaciones
que las realizadas con el volumen de 20𝜇𝐿, anotando en todos los casos los
respectivos valores.
12. Repetir las operaciones con el resto de los volúmenes.
13. Medir la temperatura del agua y determinar su densidad usando tablas de
corrección de densidad en función de la temperatura.
V. CÁLCULOS
1. Datos de medición de temperatura del agua:
Temperatura del Agua (°C) = 20.9
Densidad del agua corregida (𝒈⁄𝒄𝒎𝟑 ) =0.998101𝒈⁄𝒄𝒎𝟑
Rango de Micropipeta por cualificar = 𝟏𝟎𝟎 − 𝟏𝟎𝟎𝟎𝝁𝑳
2. Si al tomar datos cada 100 𝜇𝐿, se tuvieron los siguientes datos, entonces complete
las tablas correspondientes:
Hallando la masa real
 𝟏 𝟏
𝐖𝐯 = 𝐖𝐚𝐩𝐚𝐫 [𝟏 + 𝛅𝐚𝐢𝐫𝐞 ( − )]
𝛅𝐨𝐛𝐣 𝛅𝐩𝐞𝐬𝐚

- 𝑊𝐻2𝑂 𝑟𝑒𝑎𝑙= 0.0997 g:

𝟏 𝟏
𝑾𝒗 = 0.0997 [𝟏 + 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟏𝟗𝟓 ( − )] = 𝟎. 𝟎𝟗𝟗𝟖
0.998101 8.0000
- 𝑊𝐻2𝑂 𝑟𝑒𝑎𝑙= 0.0998 g:
1 𝟏
𝑾𝒗 = 0.0998 [𝟏 + 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟏𝟗𝟓 ( − )] = 𝟎. 𝟎𝟗𝟗𝟗
0.998101 8.0000
- 𝑊𝐻2𝑂 𝑟𝑒𝑎𝑙 = 0.0997 𝑔:
1 𝟏
𝑾𝒗 = 0.0997 [𝟏 + 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟏𝟗𝟓 ( − )] = 𝟎. 𝟎𝟗𝟗𝟖
0.998101 8.0000
- 𝑊𝐻2𝑂 𝑟𝑒𝑎𝑙 = 0.0997 𝑔:
1 𝟏
𝑾𝒗 = 0.0997 [𝟏 + 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟏𝟗𝟓 ( − )] = 𝟎. 𝟎𝟗𝟗𝟖
0.998101 8.0000
- 𝑊𝐻2𝑂 𝑟𝑒𝑎𝑙 = 0.0998𝑔:
1 𝟏
𝑾𝒗 = 0.0997 [𝟏 + 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟏𝟗𝟓 ( − )] = 𝟎. 𝟎𝟗𝟗𝟗
0.998101 8.0000

Hallando el volumen

- 𝑉𝐻2𝑂 = 0.0998 g:
𝑂. 𝑂998
𝑉𝐻2𝑂 = × 1000 = 99.9899
0.998101

- 𝑉𝐻2𝑂 = 0.0999g:
𝑂. 0999
𝑉𝐻2𝑂 = × 1000 = 100.0901
0.998101

- 𝑉𝐻2𝑂 = 0.0998𝑔:
𝑂. 𝑂998
𝑉𝐻2𝑂 = × 1000 = 99.9899
0.998101

- 𝑉𝐻2𝑂 = 0.0998 𝑔:
𝑂. 𝑂998
𝑉𝐻2𝑂 = × 1000 = 99.9899
0.998101

- 𝑉𝐻2𝑂 = 0.0999 𝑔:

𝑂. 0999
𝑉𝐻2𝑂 = × 1000 = 100.0901
0.998101
 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟓𝟑. 𝟑𝟖𝟖𝟕 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟓𝟓. 𝟎𝟓𝟑𝟔
𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟏𝟎𝟎 𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟐𝟎𝟎
𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶
Rep 𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶
𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈) Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈)
(𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳) (𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳)
1 53.4884 0,00997 0,00998 99.9899
1 55.2531 0.1995 0.1997 200.0799
2 53.5882 0,00998 0,00999 100.0901
2 55.4526 0.1995 0.1997 200.0799
3 53.6879 0,00997 0,00998 99.9899
3 55.6520 0.1994 0.1996 199.9797
4 53.7876 0,00997 0,00998 99.9899
4 55.8514 0.1994 0.1996 199.9797
5 53.8874 0,00998 0,00999 100.0901
5 56.0508 0.1994 0.1996 199.9797
̅
𝑿 100.0299 ̅ 200.0198
𝑿
𝑺𝑻 0.05483 0.0548
𝑺𝑻
% 𝑪. 𝑽. 0.0548 0.0274
% 𝑪. 𝑽.

𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟓𝟓. 𝟖𝟕𝟖𝟎 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟓𝟕. 𝟎𝟖𝟖𝟗
𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟑𝟎𝟎 𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟒𝟎𝟎
𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶
Rep 𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶
(𝒈) (𝒈)
𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈) Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈)
(𝝁𝑳) (𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳)
1 56.1783 0.3003 0.3006 301.1719
57.4878
1 0.3989 0.3993 400.0597
2 56.4786 0.3003 0.3006 301.1719
57.8867
2 0.3989 0.3993 400.0597
3 56.7789 0.3003 0.3006 301.1719
58.2856
3 0.3989 0.3993 400.0597
4 57.0792 0.3003 0.3006 301.1719
58.6845
4 0.3989 0.3993 400.0597
5 57.3794 0.3002 0.3005 301.0717
59.0834
5 0.3989 0.3993 400.0597
̅
𝑿 301.1518 ̅ 400.0597
𝑿
𝑺𝑻 0.0448 0
𝑺𝑻
% 𝑪. 𝑽. 0.01487 0
% 𝑪. 𝑽.

𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟓𝟖. 𝟗𝟐𝟗𝟏 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟔𝟏. 𝟑𝟏𝟒𝟐
𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟓𝟎𝟎 𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟔𝟎𝟎
𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶
Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈) 𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶
(𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳) Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈)
(𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳)
1 59.4277 0.4986 0.4991 500.0496
1 61.9125 0.5983 0.5989 600.0395
2 59.9263 0.4986 0.4991 500.0496
2 62.5108 0.5983 0.5989 600.0395
3 60.4249 0.4986 0.4991 500.0496
3 63.1091 0.5983 0.5989 600.0395
4 60.9235 0.4986 0.4991 500.0496
4 63.7074 0.5983 0.5989 600.0395
5 61.4221 0.4986 0.4991 500.0496
5 64.3056 0.5982 0.5988 600.0393
̅
𝑿 500.0496
̅
𝑿 600.0195
𝑺𝑻 0
𝑺𝑻 0.0448
% 𝑪. 𝑽. 0
% 𝑪. 𝑽. 0.007466
 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟔𝟒. 𝟎𝟓𝟒𝟐
𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟕𝟎𝟎 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟔𝟕. 𝟒𝟐𝟑𝟓
𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟖𝟎𝟎
Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈) 𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶
(𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳) Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈)
(𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳)
1 64.7522 0.6980 0.6987 700.0294
65.4502 1 68.2211 0.7976 0.7984 799.9190
2 0.6980 0.6987 700.0294
66.1482 2 69.0188 0.7977 0.7985 800.0192
3 0.6980 0.6987 700.0294
66.8462 3 69.8165 0.7977 0.7985 800.0192
4 0.6980 0.6987 700.0294
67.5442 4 70.6142 0.7977 0.7985 800.0192
5 0.6980 0.6987 700.0294
̅
𝑿 700.0294 5 71.4119 0.7977 0.7985 800.0192
0 ̅
𝑿 799.999
𝑺𝑻
0 𝑺𝑻 0.0448
% 𝑪. 𝑽.
% 𝑪. 𝑽. 0.0056

𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟕𝟏. 𝟏𝟖𝟎𝟐 𝑴𝒂𝒔𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 𝒗𝒂𝒔𝒐 𝒗𝒂𝒄í𝒐 = 𝟕𝟓. 𝟓𝟐𝟖𝟑
𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟗𝟎𝟎 𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑬𝒗𝒂𝒍𝒖𝒂𝒅𝒐 = 𝟏𝟎𝟎𝟎
𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶 𝑽𝑯𝟐 𝑶
Rep 𝑾𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 𝑾𝑯𝟐 𝑶 𝒂𝒑𝒂𝒓 𝑾𝑯𝟐 𝑶
𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈) Rep 𝒓𝒆𝒂𝒍 (𝒈)
(𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳) (𝒈) (𝒈) (𝝁𝑳)
1 72.0776 0.8974 0.8983 900.0091
76.5254
1 0.9971 0.9982 1000.0992
2 72.9750 0.8974 0.8983 900.0091
77.5225
2 0.9971 0.9982 1000.0992
3 73.8724 0.8974 0.8983 900.0091
78.5196
3 0.9971 0.9982 1000.0992
4 74.7698 0.8974 0.8983 900.0091
79.5167
4 0.9971 0.9982 1000.0992
5 75.6672 0.8974 0.8983 900.0091
80.5137
5 0.9970 0.9981 999.9990
̅
𝑿 900.0091 ̅ 1000.0795
𝑿
𝑺𝑻 0 0.0448
𝑺𝑻
% 𝑪. 𝑽. 0 0.004479
% 𝑪. 𝑽.
VI. RESULTADOS
Confirmada la precisión de los volúmenes de cada tabla, transfiera los promedios a la
siguiente tabla:

Dato Vol. Nominal Vol. Exp.

(𝝁𝑳) (𝝁𝑳)

0 0 0

1 100 100.0299

2 200 200.0198

3 300 301.1518

4 400 400.0597

5 500 500.0496

6 600 600.0195

7 700 700.0294

8 800 799.999

9 900 900.0091

10 1000 1000.0795

Finalmente usando Excel grafique y encuentre la relación lineal que demuestra que la
micropipeta evaluada proporciona verazmente lo que marca en ella.
VII. CONCLUSIONES
 Se concluye que la micropipeta está correctamente calibrada, ya que los valores
obtenidos experimentalmente son cercanos a los datos esperados.
 El porcentaje de variabilidad (R2) es 1, por lo que la correlación entre los valores
reales y los experimentales son muy idénticos.
 Se obtuvo que el coeficiente para los 𝜇𝐿 es 0.224, lo que quiere decir que por
cada microlitro se puede esperar que el valor experimental aumente una media
de 0.224
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Fuentes, A., Fernández, I., Fuentes, C. (s. f). “Manejo de micropipetas”.
Universidad Politécnica de Valencia. Obtenido de:
[Link]
xt=El%20rango%20de%20trabajo%20de,capaz%20de%20medir%20dicha%20
micropipeta.
 Materiales de Laboratorio (s. f). Micropipetas. Obtenido de:
[Link]
 IPN (julio de 2018), “Calibración de Pipetas”. Obtenido de
[Link]