OXIDACION DE ACIDOS GRASOS
1. INTRODUCCION
Los ácidos grasos son el mayor combustible metabólico para humanos. En presencia de
oxígeno, los ácidos grasos catabolizados hasta CO 2 y H2O permiten que el 40% de la
energía libre producida en este proceso es conservada por la célula en forma de ATP. El
resto de energía es liberada como calor.
El catabolismo de los ácidos grasos ocurre dentro de la mitocondria por un proceso
conocido como beta-oxidación. Esta vía comprende una serie de reacciones enzimáticas
que conducen un Acil-CoA hacia la formación de Acetil CoA y un Acil-CoA con dos átomos
de carbono menos, respecto al que inició la reacción; este último compuesto, reingresa
nuevamente a este ciclo de reacciones de tal manera que el ácido graso finalmente queda
convertido en varias moléculas de Acetil-CoA, dependiendo del número de carbonos. Los
moles del Acetil-CoA producidos son principalmente utilizados por el organismo en la
producción de energía, al unirse al Oxalacetato puede iniciar un ciclo de Krebs y luego
una cadena respiratoria para lograr su oxidación total hasta CO 2 y H2O, con la
correspondiente síntesis de ATP.
El Acetil-CoA interviene también en la síntesis de ácidos grasos, síntesis de colesterol,
así como también en la síntesis de cuerpos cetónicos.
En esta práctica se utilizará un homogenizado de hígado, como fuente de enzimas. Como
el oxígeno es convertido en agua, se empleará el respirómetro de Wartburg para medir
el consumo de oxígeno.
2. OBJETIVOS
• Estudiar la oxidación del ácido butírico a través del consumo de oxígeno.
• Demostrar el requerimiento de varios cofactores para una óptima oxidación
de ácidos grasos.
• Revisar aspectos importantes de la respirometría.
3. MATERIAL Y METODOS
3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales biológicos
• Homogenizado de hígado de rata
3.1.2. Materiales de vidrio
• Tubos de ensayo
• Pipetas
• Frascos de Wartburg
3.1.3. Reactivos
• ATP 0,01M
• MgSO4 0,02M
• NAD
• Butirato de sodio 0,01M
• Buffer fosfato 0,1M pH 7,2
• Agua destilada
3.1.4. Equipos y otros
• Respirómetro de Wartburg
• Guantes
3.2. METODOS
Mediante la observación y exploración se aplicará el método del respirómetro de
Wartburg para medir el consumo de oxígeno, con la finalidad de verificar las
reacciones de oxido-reducción.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Oxidación de ácido graso, usando Respirómetro de Wartburg
En 6 frascos de Wartburg medir lo siguiente:
1 2 3 4 5 TB
ATP 0,01M 0,4mL 0,4mL 0,4mL
MgSO4 0,02M 0,3mL 0,3mL 0,3mL 0,3mL 0,3mL
NAD 0,1mL 0,1mL 0,1mL 0,1mL
Sustrato* 0,6mL 0,6mL 0,6mL
Buffer fosfato 0,01M pH 2mL 2mL 2mL 2mL 2mL
7,2
H2O destilada 1,2mL 0,6mL 1mL 0,7mL 1,6mL 4mL
Homogenizado de hígado 2mL 2mL 2mL 2mL 2mL
*5 volúmenes de butirato de sodio 0,1M y 1volumen de fumarato de sodio 0,01M.
• Equilibrar los sistemas por 10 a 15 minutos, permitiendo el libre intercambio
gaseoso con el medio ambiente.
• Cerrar la llave de los manómetros y la llave lateral de los frascos de Wartburg y
realizar las lecturas cada 10 minutos hasta completar una hora.
5. RESULTADOS
• Esquematizar el procedimiento de los experimentos. Luego interpretar sus
resultados.
• En el experimento 4.1. estructurar la siguiente tabla:
CON ESTE GRAFICO PODEMOS OBSERVAR EL CONSUMO DE OXIGENO DE CADA SISTEMA
En el 2do sistema es donde se consume más oxígeno.
Mientras que en el 5to sistema es donde se produce el menor o casi nulo consumo de
oxígeno.
6. CONCLUSIONES
• En resumen, el respirador de Wartburg puede ayudarnos a
registrar cambios en la presión atmosférica para determinar
el O 2 consumido. Para causar la oxidación beta de los ácidos
grasos, el oxígeno debe consumirse en la botella.
• El consumo de oxígeno en el sistema 2 es mayor porque
tenemos cofactores que pueden ayudar a que las enzimas
ATP y Mg funcionen y activen los ácidos grasos. Posee NAD
para aportar electrones y protones, proporciona sustratos
en condiciones de pH y buffer fosfato, a diferencia de
otras botellas, es más completo.
7. CUESTIONARIO
7.1. Explicar la relación existente entre el consumo de oxígeno y la oxidación de
ácidos grasos.
Para que se produzca la β-oxidación, la degradación de los ácidos grasos debe estar
directamente relacionada con el consumo de ácidos grasos, que deben estar disponibles
para aceptar hidrógeno.
7.2. Señale y fundamente otros parámetros que pueden servir en el estudio de la
oxidación de ácidos grasos.
Índice de peróxidos: Se determina volumétricamente y esta volumetría es directamente
proporcional del yoduro de potasio liberado con tiosulfato de sodio, utilizando como
disolvente el cloroformo.
Índice de acidez: la cantidad de ácidos grasos determina la edad de una grasa o aceite, y
estos deben equivaler al número de mg de KOH que se necesite para neutralizar el ácido
graso que se encuentre en 1 gr. de grasa. Esto nos indica la escala de descomposición de
los glicéridos del aceite que se produce por la lipasa u otras causas.
Índice de yodo: es el peso total de yodo absorbido por la muestra, ya que los glicéridos que
se encuentran en los ácidos grasos insaturados tienden a unirse al halógeno, por lo tanto
esto determina el gado de instauración.
7.3. Comente el rol del ATP y Mg en la beta-oxidación de los ácidos grasos.
En el catabolismo de ácidos grasos se requiere ATP en la fase de activación, y como
cofactor se usa Mg ++. Debido al uso de la enzima TIOQUINASA y la combinación de
ácido graso y coenzima A, se puede obtener acil-CoA. Libera la oxidación de 5ATP de la
energía reductora de NAD y FAD
7.4. ¿El desacoplamiento de la fosforilación oxidativa, tendría algún efecto sobre
la oxidación de los ácidos grasos, por qué?
El desacoplamiento de la fosforilación oxidativa hace que el gradiente de protones
desaparezca sin la intervención de la ATP sintasa. De esta manera, los electrones
continúan viajando a un ritmo rápido, y el sistema hace un intento ineficaz de restaurar
el gradiente de protones oxidando más combustible y extrayendo más protones de las
mitocondrias y luego ocupando más combustible. El consumo de ácidos grasos es una de
las principales fuentes de energía.
7.5. ¿Qué finalidad tiene la preparación del sistema termobarómetro?
Es una herramienta que permite realizar mediciones termométricas y barométricas al mismo
tiempo. El termobarómetro consta de un matraz con agua acoplado al manómetro de
Warburg. Se utiliza para la corrección de datos de consumo de oxígeno.
7.6. ¿Qué importancia tiene el empleo de KOH en el comportamiento central del
frasco Warburg?
El KOH en el frasco Warburg atrapa el dióxido de carbono presente en la reacción para medir el
consumo de oxígeno en el termobarómetro.
7.7. ¿Qué es el KO2?
El peróxido de potasio es un compuesto con la fórmula química KO2. Esta rara sal de ion
superóxido se produce quemando potasio fundido en oxígeno puro. Se utiliza como
oxidante en la industria química, como depurador de CO2, deshumidificador de H2O y
generador de O2 en naves espaciales, trajes espaciales, submarinos y depuradores de
exhalación.
8. BIBLIOGRAFIA
• Superóxido de potasio. Wikipedia, La enciclopedia libre. Fecha de
consulta:
https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Super%C3%B3xido_de
_potasio&oldi d=124456526.
• Metabolismo de los ácidos grasos: conceptos básicos INFO-
BOQUIMICA.
https://sites.google.com/a/info-farmacia.com/info-
farmacia/bioquimica/metabolismo-de-los-ácidos-grasos-co
• B-oxidación mitocondrial. BIOMODEL.
http://biomodel.uah.es/model2/lip/acgr-b-oxidacion.htm
