Revista Eubacteria
Esferoides y esferas líquidas. Cultivos celulares en 3D para
mimetizar el ambiente de las células en el organismo
José Meseguer, Mª Ángeles Esteban, Victoriano Mulero, Alberto Cuesta y Mª Pilar Sepulcre
Departamento de Biología Celular e Histología (Biología Celular), Universidad de Murcia.
meseguer@[Link], aesteban@[Link], vmulero@[Link], alcuesta@[Link], mpsepul@[Link]
INTRODUCCIÓN que en un futuro casi inmediato se prevé que permitirán
salvar numerosas vidas. Ello ha sido posible gracias a la
Hacia finales del siglo XX, se inicia un fenómeno de transformación, crecimiento y división de células en el
convergencia entre diferentes disciplinas científicas tales laboratorio, en condiciones de cultivo. Es por ello, que
como Informática, Física, Química o Matemáticas con la numerosos investigadores de todo el mundo se centran
Biología, originando nuevos campos de actuación cuya actualmente en la propuesta de nuevos modelos de cultivo de
denominación se caracteriza por el prefijo “Bio” como células, tema que abordamos a continuación.
expresión de su orientación y contenido. Además, la mayoría
de estas disciplinas de fusión, se proyectan inexorablemente Estudios recientes sobre comunicación, microambiente y
hacia áreas sanitarias (Veterinaria, Medicina o Psicología) y comportamiento espacial de las células tumorales, o sobre las
tecnológicas (Industria, Ingeniería o Arquitectura), originando necesidades de métodos eficaces de expansión de las células
nuevos campos científicos concretos de entre los que madre, han puesto de manifiesto la necesidad de disponer de
destacan la Biosanidad y la Biotecnología. Todo ello ha procedimientos nuevos, que permitan cultivar células en un
determinado avances analíticos, técnicos, metodológicos e entorno lo más similar posible al del tejido del que forman
instrumentales (óptica, robótica, modelado, tratamiento de parte en el organismo vivo. En este sentido, los cultivos de
datos, sensores, materiales, marcadores, etc.) que pretenden células tradicionales, en dos dimensiones (2D), han mostrado
dar respuesta a nuevas cuestiones propias de estos nuevos limitaciones esenciales tales como la imposibilidad de
campos de la ciencia. reproducir la morfología y las propiedades bioquímicas que
poseen las células en su emplazamiento en el organismo vivo.
Podemos decir que, al igual que al final de la segunda Para resolver estos y otros problemas de similar naturaleza,
guerra mundial se produce un importante desarrollo del se ha propuesto el uso de modelos de cultivo en tres
conocimiento científico como consecuencia del uso del dimensiones (3D), tales como los denominados esferoides y
microscopio electrónico y el descubrimiento de la estructura esferas líquidas. Estos métodos tienen una amplia variedad
del ADN, en años recientes también tiene lugar un desarrollo de usos: permiten investigaciones in vitro sobre las relaciones
sorprendente del mismo, como consecuencia de los avances estructura-función celulares en situaciones normales o
acontecidos en genómica y proteómica, en las técnicas de patológicas; en estudios sobre la interacción célula-sustancias
análisis y tratamiento de imágenes, así como en la propuesta o estructuras del medio orgánico, tales como los factores de
de recientes modelos para el mantenimiento de células y crecimiento, las citoquinas, los componentes de la matriz
tejidos in vitro. En este contexto, podemos considerar que, en extracelular, etc., para el diagnóstico clínico; o en el análisis
el momento actual, uno de los objetivos esenciales de la de la relación entre células y diferentes agentes suministrados
Biología Celular es el conocer la estructura, ubicación e al medio.
interrelación de las biomoléculas, como medio para explicar
la "vida” de las células, en su situación tanto de células Los resultados obtenidos con el uso de estos modelos de
aisladas, como integrantes de masas celulares normales o cultivo 3D permiten concluir que las condiciones de
patológicas, o como integrantes de los organismos mantenimiento de las células, según dichos modelos, son
multicelulares. altamente similares a aquellas condiciones en las que se
encuentran en el organismo vivo.
Sin lugar a duda, uno de los avances científicos actuales
más importante es la producción de líneas celulares mediante Los orígenes de los esferoides como método de estudio 3D
reprogramación celular, técnica de Biología Celular que ha se remontan a los trabajos sobre morfogénesis realizados
abierto nuevos horizontes y esperanzas para la solución de hacia los años cuarenta y siguientes por investigadores tales
importantes enfermedades que aquejan a la humanidad y como Holtfreter (1944) o Moscona (1952, 1961), que
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utilizaron reagregados esferoidales de células, o por extracelulares como intracelulares, por lo que se ha sugerido
Sutherland y colaboradores (1971, 1988) que utilizaron que el solo hecho de la tridimensionalidad no debe ser el
esferoides multicelulares de células tumorales en sus estudios único aspecto a considerar (Baker y Chen, 2012). Por otra
sobre la respuesta de estas células a agentes terapéuticos. En parte, el cultivo de más de un tipo celular simultáneamente
contraste, las esferas líquidas han sido principalmente objeto permite simular mejor las condiciones in vivo. En el caso de
de estudio de la Física y la Química, habiendo despertado el investigaciones que se proponen barridos amplios de datos,
interés de la Biología y de la Medicina muy recientemente. resultan de gran utilidad aquellos modelos que permiten
Actualmente son numerosas las áreas científicas en las que se desarrollar fácilmente numerosos cultivos individuales que
están utilizando los esferoides como modelos de cultivo 3D sean susceptibles de ser trabajados de modo automático.
para el desarrollo de investigaciones biomédicas, hasta tal
punto que podemos afirmar que nos movemos desde los En definitiva, podemos decir que sumar a los cultivos 2D la
cultivos 2D hacia una nueva era de los estudios in vitro, la era tercera dimensión supone entrar en un mundo nuevo y
de los cultivos en 3D. La diferencia fundamental entre ambos diferente de la investigación in vitro, ya que implica un
tipos de cultivo es que en los cultivos 2D las células crecen en cambio en la expresión de genes, en la producción de
monocapa, adheridas a un sustrato plano o en suspensión, proteínas, y en la forma y las relaciones de las células, es decir
mientras que en los modelos de cultivos 3D las células se nos planteamos una situación completamente nueva en
localizan sobre andamiajes sólidos (naturales o artificiales), o cuanto a cómo se diferencian, proliferan, interactúan y
formando grupos celulares generalmente de forma esferoidal sobreviven las células en cultivo (Dance, 2012). En el presente
(esferoides) o en pequeñas formaciones a modo de cápsulas trabajo de revisión dedicaremos nuestra atención
esféricas (esferas líquidas). En ellos, las interacciones que se exclusivamente a dos de los modelos: los conocidos como
establecen son del tipo célula-célula o célula-medio, de modo cultivos 3D utilizando “esferoides” y al recientemente
semejante a como acontece in vivo. Las condiciones que propuesto método de encapsulación de líquido, bajo el
proporcionan estos modelos resultan de especial nombre de “esferas líquidas” como posible modelo (McHale y
trascendencia en el caso de estudios de replicación y Newton, 2015). El desarrollo de estos modelos ha supuesto la
penetración viral (Finocchiaro et al., 2004) o en los estudios integración de conocimientos de la Biología Celular, las
de células del cáncer, ya que, es sabido que las condiciones Matemáticas, la Física, la Química y la Ingeniería. Así mismo,
del medio en que se desarrollan las células tumorales tienen está conllevando el desarrollo de nuevas líneas celulares y de
efectos determinantes sobre sus propiedades neoplásicas, lo nuevos métodos de análisis cuantitativo, incluidas las técnicas
cual afecta al modo en como responden las células tumorales de imagen tridimensional. Por otra parte, el uso de estos
a los tratamientos quimioterapeúticos (Sahai y Marshall, métodos está determinando un descenso notable del uso de
2003). Además, una de las características destacables de los animales de laboratorio, de modo particular en el caso de
cultivos 3D esferoidales es su geometría, en cuanto a que esta ensayos de toxicidad o de pruebas farmacológicas mediante
determina la forma, el estado de polaridad y el ambiente esferoides.
celular, los cuales están íntimamente relacionados con la
expresión de genes y el comportamiento biológico de las LOS ESFEROIDES
células (Mueller-Klieser, 1997). Se han generado diferentes
modelos de cultivos 3D de entre los que cabe citar los que Los esferoides son un modelo de cultivo 3D que aprovecha
utilizan: explantes de tejidos u órganos; la tendencia natural a agregarse que muestran muchos tipos
microtransportadores; vasos de pared rotatoria o celulares, para crear masas multicelulares de forma
biorreactores de microgravedad; sistemas de matriz de gel; esferoidal, que son objeto de cultivo in vitro. En la práctica,
cultivo de una balsa epitelial; masas esferoidales de células; este modelo puede ser utilizado en cualquier tipo de
etc. (Andrei et al., 2005). investigación biomédica, debido a que, si se dan las
condiciones adecuadas, se pueden formar esferoides con
Es importante considerar que, al seleccionar uno de estos cualquier tipo de célula. Los esferoides se vienen utilizando
modelos para un determinado trabajo, se ha de tener en con éxito en importantes campos científicos, tales como el de
cuenta el tipo de matriz que habrá de rodear las células, ya la Biología Celular (adhesión, migración o morfogénesis), la
que esta determinará el que las células permanezcan en un Virología (aislamiento, propagación y cuantificación de virus,
ambiente lo más parecido posible al del tejido del cual interacción célula-virus); la Farmacología (evaluación de
proceden, condicionando la conservación de la morfología y fármacos); la Inmunología (producción de vacunas, uso de
las funciones celulares durante el tiempo de cultivo, se trata moduladores inmunitarios); la Cirugía (comportamiento de
de reproducir la reciprocidad célula-matriz extracelular, células de diferentes tejidos, como las de hueso y cartílago en
siendo este un tema objeto de debate, como consecuencia diferentes medios o frente a diferentes materiales); la
del hecho de que son las propias células las que producen la Oncobiología y la Cancerología (recreación de tumores,
matriz y generan las señales de comunicación tanto estudios de quimiocinas en células cancerosas, o terapia
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basada en anticuerpos); la Biología del Desarrollo y de la
Fertilización (desarrollo de embriones), etc. Otro método muy simple para crear esferoides, en el
estudio de tumores, consiste en sembrar un número definido
Un método sencillo para generar esferoides consiste en de células tumorales en suspensión (de 1000 a 20 000 células)
crear gotas de una suspensión celular (“método de la gota en una placa de 96 pocillos de fondo redondo o cónico, en
colgante”) sobre la cara inferior de una superficie de vidrio o medio de crecimiento estándar, y centrifugar durante 10
plástico (placa de Petri) o utilizando placas de 96 pocillos de minutos a 1000g. A las 24 horas de cultivo se genera un
fondo horadado (figura 1). esferoide individual en cada pocillo. Todos ellos muestran
uniformidad de tamaño, morfología y estratificación de
células (los esferoides multicelulares tumorales, al igual que
los tumores sólidos y las metástasis avasculares in vivo,
constan de varios cientos de células dispuestas en tres capas:
una capa externa de células proliferantes, responsables del
crecimiento del tumor en los organismos vivos; una capa
media de células quiescentes; y una zona interna de necrosis
central, formada por células que han muerto por deficiencia
Figura 1. Método de la gota colgante. a) Esferoides en la cara inferior de un aguda de nutrientes e hipoxia). Se ha comprobado que si se
vidrio circular. b) Esferoides en una placa de 96 pocillos de fondo horadado.
adiciona a estos cultivos 3D extracto de membrana basal,
algunas de las líneas celulares tumorales evolucionan
En cada gota así creada, las células se desplazan hacia el rápidamente desde agregados celulares hasta la morfología
fondo de la misma, donde forman un agregado, para originar esferoidal. Una descripción detallada del protocolo para la
finalmente una masa de forma esferoidal o esferoide (figura consecución de esferoides siguiendo este método, puede ser
2). consultada en el artículo publicado por Phung et al. (2011).
Se asume que la tasa de crecimiento celular es diferente
en la periferia y en el centro de cada esferoide, siendo posible
predecir matemáticamente el cambio de volumen del
esferoide con el tiempo. Dicha tasa de crecimiento puede ser
modificada experimentalmente mediante una o más señales
mecánicas o bioquímicas del ambiente local (presión,
Figura 2. Esquema del desplazamiento celular durante la formación de un
esferoide en el interior de una gota colgante. ósmosis, temperatura, cambios en la composición del medio,
moléculas solubles, nutrientes, vitaminas, factores de
crecimiento, etc.). Este aspecto resulta de gran interés para
Atendiendo al número de tipos celulares presentes en el estudios sobre el crecimiento de tumores, entre otros. Una
esferoide, se pueden crear esferoides en forma de cultivo consecuencia no deseada de estos tratamientos es la
simple (esferoide monocelular) o como cocultivos (esferoide formación de tejidos aberrantes, en especial, como
multicelular). Una vez creadas las gotas pendientes de su consecuencia de un incremento inadecuado en la presión
soporte, conteniendo cada gota un esferoide, el soporte es hidrostática.
llevado a un incubador.
También se pueden crear esferoides mediante vasos de
Las suspensiones celulares pueden ser dispensadas pared rotatoria o biorreactores. En ambos casos la agregación
mediante pipeta, multipipeta o con dispensador mecánico de las células se produce por efecto gravitatorio sumado a la
(figura 3). tendencia natural de agregación de las células.
No es factible producir esferoides de más de 500
micrómetros de diámetro, debido a que las células del centro
mueren al carecer de nutrientes suficientes. No obstante, con
la intención de abordar estudios biofísicos de corta duración,
este mismo año ha sido publicado un método sorprendente
para producir grandes esferoides (tamaño milimétrico en
imágenes a tiempo real) que permiten caracterizar diferentes
propiedades mecánicas de éstos, incluidas la tensión
Figura 3. Dispensado de la suspensión celular a) Mediante multipipeta. b) superficial, viscosidad y tensión de fluencia (deformación
Mediante dispensador automático. elástica irreversible) (Mazuel et al., 2015). Para ello, les son
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conferidas propiedades magnéticas a las células añadiendo proporcionen condiciones tales como capacidad para la
nanopartículas magnéticas al medio de cultivo, que son obtención de secciones ópticas, una rápida tasa de grabado
absorbidas por estas células sin que se vean alteradas sus de imágenes que permitan el apilamiento y la resolución
funciones. A continuación se llena un molde con dichas espacial, amplio campo de visión, y bajo nivel de excitación de
células y se someten a un campo magnético para conseguir fluoróforos, entre otras. La microscopía de fluorescencia
compactarlas, hasta formar un esferoide de tamaño mucho confocal resulta insuficiente. También resulta insuficiente la
mayor que los producidos con los métodos anteriores. microscopía multifotón debido a los efectos de fotoblanqueo
Finalmente se procede a aplanar los esferoides sobre una y fototoxicidad. Así mismo, la tomografía presenta
superficie plana mediante aplicación de un campo magnético limitaciones (de coherencia óptica o de proyección óptica) en
permanente. Con este método se comprueba que los términos de resolución espacial y de tasa de grabado. La
“esferoides magnéticos” más pequeños se comportan como creación de novedosos métodos microscópicos tales como el
gotas de líquido frente al proceso de aplastamiento, mientras microscopio de fluorescencia confocal theta, microscopía
5
que los “esferoides magnéticos” más grandes se comportan confocal 4Pi, microscopía I M, y microscopía de fluorescencia
como sólidos elásticos en tiempos cortos y como gotas de depleción de emisión estimulada (STED) ha permitido el
líquidas en tiempos más largos. Esta técnica se considera muy estudio de células fijadas. Pero, salvo el microscopio theta,
prometedora para el estudio de cómo los procesos de división estos métodos no permiten el estudio adecuado de muestras
o muerte celular cambian las propiedades de un tejido, y para vivas de varios cientos de micras de espesor, como es el caso
caracterizar otros sistemas blandos diferentes de los de muchos esferoides. Actualmente parece prometedora la
esferoides, tales como los hidrogeles o las esferas líquidas. recién creada microscopía de fluorescencia por hojas de luz
(microscopía de iluminación en un solo plano o SPIM) que
Cuando se trabaja con células que están polarizadas en su combina el seccionado por fluorescencia óptica y
estado natural, como es el caso de los epitelios (células determinados aspectos de la tomografía (figura 4).
endoteliales, células de los túbulos renales, folículos, acini,
etc.), es posible obtener la formación de quistes, esferas
huecas de una monocapa de células, perfectamente
polarizadas, flotando en un gel de colágeno hidratado. En
este caso, las células crecen de modo que sus superficies
latero-basales (exterior del quiste) quedan en contacto con el
gel, mientras que su superficie apical contacta con el fluído
interno de la cavidad (de modo altamente similar a como
ocurre en los capilares sanguíneos y linfáticos, o en la
nefrona).
Figura 4. a) Esferoide observado con microscopio de fluorescencia confocal.
El uso de esferoides, como modelo de cultivo 3D, supone b) Esferoide observado mediante microscopía de fluorescencia basada en
importantes ventajas: 1) Las células del esferoide no se hojas de luz. Máxima proyección de un apilamiento de una reconstrucción de
multivisión de doce apilamientos grabados a lo largo de diferentes ángulos
encuentran adheridas a un soporte, sino que forman un
(0° a 330°) con un incremento sucesivo de 30°. Lente objetivo Carl Zeiss
agregado celular de forma esferoidal en el interior de un Apocromática 40x y apertura numérica de 0.8. El apilamiento comprende 400
líquido pipeteable durante todo el tiempo que dura el cultivo. secciones obtenidas con un espaciado axial de 0.5 micrómetros. Los núcleos
2) Las células del esferoide no requieren un andamiaje fueron teñidos con Draq5 (excitación 647 nm, emisión 670 nm). Imagen final
externo o interno para agregarse. 3) Las células del esferoide después de deconvolución. (Imagen modificada y adaptada de la presente en
el trabajo de Pampaloni et al., 2007).
se pueden unir unas a otras, mimetizando un ambiente
fisiológico similar al del tejido de procedencia. 4) Las células
del esferoide pueden originar su propia matriz extracelular. 5)
Aunque los esferoides imitan, de modo altamente
Las células del esferoide ven preservado su fenotipo celular
semejante, las condiciones biológicas de las células en su
específico característico de un tejido diferenciado.
emplazamiento vivo, deben ser tenidas en cuenta las
distancias existentes entre cualquier modelo y la realidad. Así,
Cuando se trabaja con agregados celulares (esferoides)
en estudios sobre el cáncer, es obvio que los esferoides
grandes, se ha de llevar un control cuidadoso del intercambio
similares a tumores cancerosos representan, en todo caso,
de gas, así como de la difusión de los nutrientes solubles y de
una estructura y composición mimética mucho más simple
los agentes químicos.
que el verdadero tumor (Trepat, 2011).
Los esferoides, como cualquier cultivo de células,
requieren del control y el análisis microscópicos. Esto ha
determinado la necesidad de métodos microscópicos que nos
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ESFERAS LÍQUIDAS líquida. Las esferas líquidas pueden ser depositadas, a su vez,
en otros líquidos y de modo general presentan propiedades
Una esfera líquida es una gota pequeña de líquido de baja adhesión y alta movilidad tanto en interfases sólido-
encapsulada mediante una delgada capa de partículas no sólido como en interfases sólido-líquido. Además, se puede
solubles (concha), que la convierte en un objeto blando no- establecer contacto térmico con la gota de líquido a través de
húmedo. La interfase líquido-vapor es reemplazada por una los componentes de la concha. Pueden ser mantenidas a
°
interfase sólido-líquido. Estas estructuras fueron creadas por baja temperatura (-7 C), pero se ha visto que bajas
primera vez haciendo rodar una pequeña gota de agua sobre temperaturas dan lugar a cambios en la forma, la cual deja de
una superficie sólida cubierta de granos de polen ser esférica, para ser acampanada.
(hidrofóbicos). Curiosamente, los granos de polen se adherían
fuertemente a la superficie de la gota de agua originando una El tiempo de vida de una esfera líquida depende de su
estructura encapsulada (Aussillous y Quéré, 2001). tamaño y del tipo de material que constituye la concha, el
cual puede ser muy variado (grafito, metal, plástico, material
Todas las esferas líquidas encapsulan un líquido, biológico, lípidos, partículas magnéticas o magnetizables,
convirtiendo lo que sería un contacto líquido-sólido en un etc.). Así, las esferas líquidas de partículas de grafito reducen
contacto sólido-sólido (capa de partículas sólidas-sólido de la tasa de evaporación en un 25-45% comparadas con las
soporte o sustrato). Estos conceptos fueron inicialmente gotas de líquido del mismo tamaño desprovistas de concha.
planteados en términos de propiedades hidrofílicas e Además, nanopartículas de óxido de hierro han sido utilizadas
hidrofóbicas de las partículas de la cápsula o concha en su no solo para formar la concha, sino que han sido dispersadas
interacción con el líquido de la gota. en el interior de esferas líquidas, para permitir actuación
magnética sobre ellas.
El volumen de líquido encapsulado puede ser
incrementado hasta cierto límite. Se pueden crear partículas Existe una amplia gama de métodos para preparar
de mayor tamaño, que no se corresponden con la concepción partículas para la concha, las cuales, como ya se ha indicado,
de cuerpo esférico de las esferas líquidas (figura 5). pueden tener diferente forma y tamaño (bolas, cápsulas,
bastones, nanotúbulos, nanofibras, etc.).
En definitiva, podemos imaginar que una esfera líquida es
una porción pequeña de líquido cuya superficie esférica está
recubierta por partículas de baja rigidez de unión, con una
baja tasa de evaporación. Sería como una red de nudos
superficial imaginaria, forzada a determinar la forma de la
gota, en la que cada nudo es una partícula (figura 6).
Figura 5. a) Esquema de esfera líquida y de una gran gota de líquido no
esférica, dispuestas sobre un sustrato sólido. Adaptado del esquema
presente en el artículo de McHalle y Newton (2015). Célula
Las partículas que forman la concha de cada esfera líquida
se disponen en una capa, sueltas entre si, de modo que no
aíslan completamente al líquido, y pueden tener forma y
tamaño variable e incluso se pueden usar partículas con
extremos de diferente forma y orientación (por ejemplo, Figura 6. Esquema del proceso de formación de una esfera líquida. Adaptado
partículas con forma de barra prismática simple, o con uno de del presente en el artículo de McHalle y Newton (2015).
sus extremos de forma esférica). También se pueden producir
esferas líquidas con concha de agregados multicapa,
Las esferas líquidas pueden ser desplazadas sobre
formados por partículas diferentes, en dos regiones de la
superficies sólidas y responder a estímulos tales como
superficie (región semiconductora/región dieléctrica, que
cambios de pH, radiaciones o gases. Pueden ser utilizados
permiten la orientación de la esfera mediante un campo
como biorreactores (dos esferas líquidas que contienen
eléctrico). La rigidez de la concha determina la forma de la
diferentes líquidos separados, que cuando coalescen inician
esfera líquida.
una reacción, o pueden ser conectados mediante un puente
conductor creando un reactor micro-electroquímico).
La concha permite una baja tasa de evaporación o
desvanecimiento del líquido interior, modificando las
Es particularmente novedoso su muy reciente uso en
propiedades de deformación y de impacto de la esfera
diferentes campos de la investigación biosanitaria, de modo
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especial en ensayos diagnósticos tales como los de sangre REFERENCIAS
para Rh y grupos sanguíneos, creando esferas líquidas de
sangre, o inyectando anticuerpos a esferas líquidas de Andrei, G., (2006). Three-dimensional culture models for human viral
suspensiones celulares. También han comenzado a ser diseases and antiviral drug development. Elsevier B.V. Bélgica.
utilizadas en tratamientos de suspensiones celulares que
supongan reacciones con cambios de color visualmente Aussillous, P., y Quéré, D. (2001). Liquid marbles. Nature, 411(6840): 924-
927.
detectables. En microbiología y virología se han comenzado a
aplicar en el estudio de la interacción célula- partícula. Es Baker, B.M.,y Chen, C.S. (2012). Deconstructing the third dimension: how 3D
típico su uso clínico como cápsulas para suministro oral de culture microenvironments alter cellular cues. J. Cell Sci., 125: 3015-3024.
fármacos semisólidos o líquidos de baja solubilidad en agua.
Dance, A. (2012). Enter the Third Dimension. Cell culture goes 3D with
devices that better mimic in vivo conditions. Biotechnol. Bioeng., 109: 2173-
Actualmente, como un paso en la evolución del uso de las 2178.
esferas líquidas, se plantea su aplicación en la tecnología de
microarrays (de ácidos nucleicos, de células o de tejidos). Finocchiaro, L.M., Bumaschny, V.F., Karara, A.L., Fiszman, G.L., Casais, C.C., y
Glikin, G.C. (2004). Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir system
in multicellular tumor spheroids. Cancer Gene Ther., 11: 333-345.
CONCLUSIÓN
Holtfreter, J. (1944). A study of the mechanism of gastrulation. J. Exp. Zool.,
Existen razones suficientes para depositar grandes 95: 171-212.
esperanzas en el uso de la tercera dimensión in vitro. Dada la
trascendencia de los resultados de los estudios de las Mazuel, F., Reffay, M., Du, V., Bacri, J.C., Rieu, J.P., y Wilhelm, C. (2015).
Magnetic flattening of stem cell spheroids indicates a size-dependent
relaciones estructura-función celulares mediante la aplicación elastocapillary transition. Phys. Rev. Lett., 114: 098-105.
de modelos de cultivo 3D, estos se nos muestran como
valiosas herramientas de investigación que permitirán McHale, G y Newton, M. I. (2015). Liquid marbles: topical context within soft
avanzar en los estudios de integración de los datos de la matter and recent progress. Soft Matter, 11: 2530-2546.
genómica y la proteómica, de la Biología Celular y de la
Biología Molecular. Así mismo, podemos prever que la
introducción de la tercera dimensión en los cultivos
propiciará la obtención de resultados esenciales en la
investigación del uso de fármacos y en la investigación clínica.
Además, la posibilidad de realizar barridos de toxicidad a gran
escala se nos presenta como una prometedora alternativa,
de gran valor ético y económico, al uso necesario de
numerosos animales de laboratorio. Por otra parte, la
necesidad de desarrollar nuevos métodos en la tecnología de
imagen, permitirá salvar los obstáculos existentes en la
observación de las células vivas que crecen en cultivos 3D
(Pampaloni, 2007; MacHale y Newton, 2015).
En lo que respecta a los conocimientos sobre las esferas
líquidas, estos han avanzado sustancialmente durante los
últimos años, pasando a ser tomadas en consideración para
propósitos científicos concretos, sobre todo en lo que se
refiere a los campos de la investigación biológica,
biotecnológica y biomédica. Sus potenciales aplicaciones en la
experimentación resultan ilimitadas, en particular en lo
relativo a cultivos 3D (McHalle y Newton, 2015).
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