Inmunología General 2016 – 2 Universidad Peruana Cayetano Heredia

Prácticas de Laboratorio Facultad de Medicina Alberto Hurtado

Escuela de Tecnología Médica

Práctica 5

ANÁLISIS MICROSCÓPICO DE LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE CÉLULAS Y TEJIDOS LINFOIDES

Responsables de la Práctica: Miguel Marzal, Patricia Sáenz

I. INTRODUCCIÓN

En la sangre se encuentran presentes células y moléculas del sistema inmune innato y adaptativo.
La prueba de sangre o hemograma se puede realizar a través de un simple frotis sanguíneo o con
equipos sofisticados, y es útil en el diagnóstico de alteraciones hematológicas como la neutropenia,
anemia y trombocitopenia, o como indicador de la respuesta inmune frente a infecciones y de los
efectos deletéreos de diferentes tratamientos. (Cuadro 1 y cuadro 2). La fórmula leucocitaria tiene
por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de leucocitos normales y anormales
en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso calcularse el número real de cada clase de
leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto), conociéndose el total de leucocitos.

Cuadro 1. VALORES NORMALES DEL LEUCOGRAMA

FORMULA DIFERENCIAL % VALOR ABSOLUTO (células x mm3)

Neutrófilos Segmentados 60 - 70% 3000- 5000
Neutrófilos en Banda 3-5% 150-400
Eosinófilos 0.5-4% 20-350
Basófilos 0.5% 10-60
Monocitos 4-8% 100-500
Linfocitos 20-40% 1500-4000

Cuadro 2. ALGUNOS VALORES ANORMALES DEL LEUCOGRAMA Y SU INTERPRETACION

INTERPRETACION VALOR ASOCIACIÓN CLÍNICA

Estrés, infecciones virales, fases iniciales de
Leucopenia < 5000 x mm3 enfermedades bacterianas, septicemias en fase
terminal
Leucocitosis > 10000 x mm3 Infecciones
Neutrofilia > 65 % Infecciones agudas
Eosinofilia > 5% Helmintiosis, alergia
Infecciones crónicas, virosis, estados tóxicos, procesos
Linfocitosis > 35 %
autoinmunes
Monocitosis >6% Infecciones bacterianas y parasitarias
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El frotis de sangre periférica es frecuentemente obtenido por punción capilar y teñido con Wrigth
o Giemsa, y suministra un medio para estudiar la sangre y determinar las variaciones y
anormalidades de estructura, forma, tamaño y número de las células sanguíneas, tales como los
eritrocitos, glóbulos blancos y plaquetas. (Figura 1 y 2)

Figura 1. Leucocitos en frotis

sanguíneo

Figura 2. Esquema de la morfología de las células inmunes en un frotis sanguíneo teñido con
colorante Wright

El análisis del frotis sanguíneo puede ser fácilmente practicado por cualquier médico o personal de
salud, y puede ser realizado hasta en el lugar más remoto del país, donde las posibilidades de
laboratorios más sofisticados no están disponibles.
Características morfológicas de los eritrocitos:
1. Tiene el aspecto en forma de disco bicóncavo, anucleado. Dan el color rojo a la sangre por
poseer hemoglobina. Mide aproximadamente 7 um.

Características morfológicas de los leucocitos:

1. Granulocitos: Aquellos que tienen gránulos específicos: neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Los
gránulos observados en extendido están cargados de lisosomas y enzimas hidrosolubles que
son agentes antibacterianos necesarios para la digestión de partículas fagocitarias. Así
tenemos:

1.1. Neutrófilos.

1.1.1. Neutrófilos en cayado: Es el granulocito en banda. Mide de 10 um a 14 um, núcleo

condensado que puede presentar una o dos constricciones, pero no tiene puente de
cromatina. El citoplasma presenta gránulos específicos e inespecíficos, membrana celular
lisa, citoplasma de color ligeramente rosado dependiendo de la coloración.
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1.1.2. Neutrófilos segmentados: Mide igualmente de 10 um a 14 um, núcleo que presenta mayor
condensación y está formado por varios lóbulos (hasta 4) unidos por puentes de cromatina.
El citoplasma está cargado de gránulos.

1.1.3. Alteraciones leucocitarias de los neutrófilos:

 Granulaciones tóxicas: Son gránulos basófilos más oscuros que lo normal y se observan
durante el transcurso de infecciones severas y estadios tóxicos.
 Vacuolas tóxicas: Se observan en el citoplasma de los neutrófilos durante infecciones
severas y estados tóxicos.
 Cuerpos de Dohle: Son áreas teñidas de azul en el citoplasma de los polimorfonucleares
neutrófilos y se encuentra en infecciones, especialmente en neumonías.
 Polisegmentación: Son neutrófilos con 5 ó más lobulaciones. Se observa en las anemias
por deficiencia de vitamina B-12 y ácido fólico, Síndrome de Down y otras anomalías.

1.1.4. Existe aumento en el número de neutrófilos (neutrofilia) en:

 Infecciones bacterianas por agentes piógenos.
 Abscesos y septicemias.
 Procesos inflamatorios y necrosis tisular.
 Trastornos metabólicos por intoxicación.
 Procesos malignos: Carcinoma.
 Hemorragias y hemólisis.
 Postesplenectomía.

1.1.5. Existe disminución de neutrófilos (neutropenia) en:

 Aplasia medular.
 Agentes citotóxicos.
 Granulopoyesis inefectiva (anemias megaloblásticas).

1.2. Eosinófilos:
1.2.1. Son parecidos a los neutrófilos, miden aproximadamente 9 um. Generalmente el núcleo es
bilobulado y lo que más caracteriza a esta célula es la presencia de gránulos color naranja-
marrón vistos claramente, muchas veces estos gránulos hacen que se pierda la membrana
celular por el rompimiento de esta, ya que estas células son muy frágiles.

1.2.2. Existe aumento de eosinófilos (eosinofilia) en:

 Infecciones parasitarias.
 Reacciones alérgicas.
 Enfermedades cutáneas.
 Neoplasias.

1.3. Basófilos:
1.3.1. La característica más importante de esta célula es la cantidad de gránulos de color azul
negruzco que se encuentra ocupando toda la célula (esto cuando la célula es madura) y parte
de la célula cuando ésta es inmadura. Mide aproximadamente 12 um. Presenta un núcleo
que muchas veces no logra observarse por la cantidad de gránulos que contiene histamina y
heparina.
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2. Agranulocitos: No poseen gránulos. Aquí tenemos a los linfocitos y monocitos.

2.1. Linfocitos:
2.1.1. Miden de 6 um a 10 um, presentan generalmente un núcleo ligeramente oval que ocupa casi
toda la célula, la cromatina es densa, citoplasma escaso, y puede contener gránulos azurófilos
inespecíficos.
2.1.2. Pueden encontrarse también una alteración de los linfocitos llamados “linfocitos atípicos”,
que miden de 15 um a 20 um, núcleo irregular, indentado, excéntrico y puede observarse
nucléolos. El citoplasma es amplio, color azul tenue, y puede presentar gránulos azurófilos y
vacuolas. Estas células pueden observarse en mononucleosis infecciosa, hepatitis viral,
herpes zoster, enfermedades autoinmunes, y normalmente pueden hallarse hasta en 5 %.

2.2. Monocitos:
2.2.1. Son los leucocitos de mayor tamaño en la sangre (12 um a 15 um).
2.2.2. Su núcleo es generalmente excéntrico, aunque puede ser central. Su cromatina nuclear es
laxa, distribuida en forma regular, la forma del núcleo generalmente es de una madeja de
lana o arriñonada, aunque puede tener forma de un abastonado. El citoplasma es de color
grisáceo y puede presentar gránulos inespecíficos (azurófilos).
2.2.3. Los monocitos se encuentran elevados en: Enfermedades como la Tuberculosis, endocarditis
bacteriana, enfermedades virales como sarampión, rubéola, etc., colagenosis, neoplasias,
etc.

Las células inmunes están organizadas y agrupadas en los tejidos linfoideos donde maduran y
entran en contacto con los antígenos de agentes agresores. Histológicamente estos tejidos
presentan una conformación semejante, donde abundan folículos primarios ricos en células B,
rodeados por una capa de células T y células fagocíticas.

Representación esquemática de los diversos tipos

de células integrantes de un nódulo o folículo
linfático secundario. (Sobotta y Welsch. 2009)

Fotomicrografías de A) un folículo linfático

primario. El parénquima celular consta de
linfocitos pequeños sin diferenciación; y de B) un folículo secundario mostrando las diversas
zonas que lo constituyen. a) Centro germinativo, b) casquete o manto, c) zona dependiente del
timo. Tinción H-E. 100x
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Los órganos linfáticos se clasifican en:

 Órganos linfáticos primarios, como el timo y la médula ósea.
 Órganos linfáticos secundarios, entre los que se consideran a folículos linfáticos
asociados a mucosas de los aparatos digestivo, respiratorio y urogenital, las
amígdalas o tonsilas, placas de Peyer, ganglios linfáticos y al Bazo.

En la práctica veremos cortes histológicos de Amígdala, Timo, Bazo, y ganglios linfáticos de ratón.

3. Amígdalas o tonsilas.
3.1. Son estructuras constituidas también por folículos linfáticos asociados a mucosas. En este caso
están localizadas en la mucosa nasofaríngea alrededor del istmo de las fauces. Forman un
círculo de defensa inmunológica denominada “anillo faríngeo de Waldeyer” que protege los
tractos digestivo y respiratorio

4. TIMO.
4.1. El timo es un órgano linfático que en la especie humana y en los mamíferos está constituido
por dos lóbulos localizados en la región cervical como en los cobayos o “conejillo de indias”
(Cavia porcelus) o en la porción superior del mediastino torácico, por encima del corazón y de
los grandes vasos del tórax, en la especie humana y otros mamíferos.
4.2. En la especie humana pesa alrededor de 10 y 15
gramos almomento del nacimiento; en la pubertad
alcanza su desarrollo máximo, llega a pesar entre
30 y 40 gramos. En la etapa juvenil y adulta entra
en un proceso de regresión (involución del timo) y
parte de su tejido glandular linfático disminuye y es
reemplazado por tejido adiposo. En la etapa adulta
pesa aproximadamente 10 gramos.
4.3. Los dos lóbulos del timo se originan de las III bolsas
faríngeas, algunos autores consideran que también
intervienen componentes epiteliales de las IV
bolsas faríngeas. Las células endodérmicas
epiteliales de estas bolsas proliferan y se
diferencian en las células reticulares del estroma
tímico. El estroma es colonizado, posteriormente
por células linfáticas vírgenes indiferenciadas
funcionalmente que se forman en la médula ósea a
partir de células madres linfoblásticas.
4.4. Cada lóbulo del timo está rodeado por una cápsula
delgada de tejido conjuntivo laxo, la cual envía al
interior del órgano trabéculas finas acompañadas de vasos sanguíneos de calibre pequeño
(arteriolas y vénulas); las trabéculas al introducirse subdividen a los lóbulos en lobulillos
incompletos. Cada lobulillo, de forma poliédrica, está integrado por una corteza y una médula.
Las trabéculas sólo llegan al límite corticomedular. Las médulas de los lobulillos vecinos
confluyen entre sí.
4.5. Secciones microscópicas de timo, coloreadas con H-E, muestran a la corteza de un color azul
morado oscuro, esto debido a la gran cantidad de linfocitos localizados en esa zona y que están
muy agrupados entre sí; en cambio la médula exhibe un color rosa azulado porque en ella los
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linfocitos existen en menor cantidad y, por la presencia de numerosas células epiteliales

reticulares, abundantes macrófagos y células
interdigitantes (presentadoras de antígenos) y de
unas estructuras formadas por células epiteliales
queratinizadas de disposición concéntrica
denominadas corpúsculos de Hassall.

4.6. La corteza está integrada por una gran

cantidad de linfocitos de varios tamaños,
macrófagos y células reticulares. Los linfocitos
indiferenciados provienen de la médula ósea y en
la corteza inician un proceso intenso de
proliferación celular originando linfoblastos
(linfocitos grandes) los cuales por
autorreplicación (sucesivas mitosis) originarán
toda la población de linfocitos (timocitos) de la
corteza.

4.7. Las células reticulares epiteliales son de tres tipos y se distribuyen, en la corteza, de tres
maneras:

4.7.1.Células reticulares del tipo I. Se localizan por debajo de la cápsula, en las superficies laterales
de las trabéculas y rodeando a los vasos sanguíneos que penetran en la corteza, constituyendo
la barrera hematotímica. La unión entre las células reticulares se hace mediante uniones
ocluyentes de tal manera que constituyen paredes que rodean pequeños compartimentos que
aíslan completamente a los linfocitos corticales del resto de los elementos tisulares del
organismo. Los núcleos de estas células son de forma variada, con abundante heterocromatina
y un nucleolo muy bien definido.
4.7.2.Células reticulares del tipo II. Están localizadas
en los pequeños espacios limitados por las
células anteriores. Son células con un
citoplasma ligeramente acidófilo, con
numerosos tonofilamentos y con varias
prolongaciones que se unen entre sí
constituyendo un retículo celular. Poseen
núcleos voluminosos con escasa
heterocromatina. En los espacios situados
entre ellas se disponen una gran cantidad de
linfocitos indiferenciados.
4.7.3.Células reticulares del tipo III. Se sitúan en el
límite de la corteza con la médula Junto con las
células reticulares tipo IV de la médula, forman
una especie de tabique celular, que separa
ambas regione. Poseen citoplasma y núcleo de
mayor capacidad tintorial y muestran una
presencia evidente de cisternas dilatadas de
retículo endoplásmico rugoso que indica
síntesis proteínica abundante.
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4.8. La médula tímica presenta un color más pálido y posee una menor población celular linfática
por unidad de superficie. Casi un 5% del total de linfocitos que albergaba la corteza. Son todos
ellos linfocitos pequeños que en la corteza se han vuelto en linfocitos T inmunocompetentes.
4.9. También existen células dendríticas, macrófagos, aunque de menor tamaño que los de la
corteza, algunas células plasmáticas y cebadas. Estas últimas llegan al parénquima a través de
la irrigación sanguínea medular.

4.10. En la médula se localizan tres tipos de células reticulares epiteliales:

4.10.1. Células epiteliales reticulares tipo IV. Se localizan debajo de las células reticulares tipo III
de la corteza, junto con ellas forman el límite corticomedular tímico. Poseen un núcleo
voluminoso con cromatina distribuida en grumos gruesos. El citoplasma es acidófilo y
contiene abundantes tonofilamentos.
4.10.2. Células epiteliales reticulares tipo V. Son las células que forman el retículo celular de la
médula. Poseen prolongaciones gruesas y escasas, unidas entre sí mediante desmosomas.
Los núcleos son de forma variada, de contornos precisos y cromatina perinuclear
distribuida uniformemente.
4.10.3. Células epiteliales reticulares tipo VI. Forman una estructura característica de la médula
del timo, los corpúsculos de Hassall; Estos consisten
en la disposición concéntrica de las células
reticulares alrededor de, posiblemente, restos
celulares de linfocitos T medulares muertos. Poseen
tamaños variables (pueden medir de 20 hasta más
de 100 μm de diámetro); se tiñen intensamente con
la eosina, aunque algunas células más internas
suelen poseer gránulos basófilos de queratohialina.
Se piensa que son las únicas células epiteliales
reticulares que puedan derivar del ectodermo. En
ciertos casos están sumamente queratinizadas
(cornificadas) e inclusive pueden calcificarse.

5. GANGLIOS LINFÁTICOS O LINFONODOS.

5.1. Son estructuras de forma redondeada u ovoidea,
intercaladas entre el recorrido de los vasos
linfáticos. Presentan una ligera concavidad en una
de sus superficies que recibe el nombre de hilio,
lugar por donde penetran vasos arteriales y
emergen vasos venosos y linfáticos (eferentes), Por
su superficie convexa e introducen varios vasos
linfáticos con válvulas, denominados aferentes. En
la especie humana suelen medir desde 3 a 5
milímetros hasta tamaños mayores como de 2 a 3
centímetros de longitud (observar el mapa
conceptual inferior).
5.2. Se localizan a lo largo de los vasos linfáticos pero en
lugares de confluencia de estos vasos se reúnen en
mayor cantidad, por ejemplo en la región del cuello,
en las ingles y axilas, en la cavidad abdominal y el mediastino.
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5.3. Microscópicamente están constituidos por una corteza y una médula entre ambas se localiza
una porción del parénquima linfático denominada paracorteza.
5.4. El órgano está recubierto por una cápsula de tejido conectivo denso irregular, relativamente
gruesa. En ciertas regiones se encuentra rodeado por tejido adiposo.

5.5. La cápsula remite trabéculas o tabiques conjuntivos incompletos que llegan hasta el límite con
la médula, de éstos se desprenden haces de fibras colágenas delgadas y fibras reticulares que,
en la médula se disponen organizando una red fibrocelular (células y fibras reticulares)
tridimensional. En la región cortical la disposición de la red es
menos notoria.

5.6. Las paredes de los senos linfáticos están integrados

por células endoteliales y células reticulares aplanadas que
emiten finas prolongaciones, las cuales atraviesan la luz de los
senos ocasionando a éstos una superficie irregular. Esta
especie de epitelio reticular carece de membrana basal pero
se fija al retículo fibrocelular del parénquima linfático
circundante mediante fibras reticulares condensadas.

5.7. Las paredes de los senos linfáticos son atravesadas

fácilmente por la linfa, por moléculas proteínicas y por células
de diversa estirpe que migran de la luz vascular al tejido
linfoide y viceversa.

5.8. El parénquima linfático tiene diversas formas de organización. En la corteza se dispone en

forma de folículos linfáticos primarios y secundarios (descritos anteriormente) y tejido linfático
difuso, en la médula adopta la forma de cordones y de tejido linfático difuso
5.9. Las arterias penetran por el hilio se ramifican en la región medular siguiendo el recorrido de
las trabéculas; algunas arteriolas abandonan las trabéculas, se introducen en los cordones
medulares y se subdividen en capilares. Las otras ramas continúan su recorrido hasta llegar al
tejido linfático interfolicular de la región cortical, allí se capilarizan y retornan a la médula en
la forma de venas postcapilares.
5.10. Las vénulas postcapilares se caracterizan porque poseen un endotelio constituido por células
cúbicas y una capa engrosada de tejido conjuntivo subepitelial. Se les denominan venas
endoteliales altas (VEA). Se disponen en la paracorteza. Las venas continúan su recorrido por
la médula se unen a otras venas y abandonan el ganglio por el hilio.
5.11. Los linfocitos que circulan por estas venas pueden atravesar el endotelio alto (experimentos
empleando células marcadas indican que los linfocitos expresan moléculas membranales
denominadas selectinas las cuales reconocen a receptores específicos de las células
endoteliales altas, facilitando la activación de movimientos de diapedesis e los linfocitos para
atravesar el endotelio, abandonar el lecho vascular y trasladarse al parénquima linfático. En
este lugar permanecen entre 15 a 20 horas, abandonan el parénquima linfático utilizando los
vasos linfáticos eferentes y se incorporan al torrente circulatorio. De esta manera los
linfocitos T y algunos linfocitos B pueden recircular por periodos sumamente largos
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6. BAZO.
6.1. Es un órgano impar, situado en el
epigastrio izquierdo, por debajo del
diafragma. Es de color rojo vino oscuro;
mide en promedio 12 cm de longitud x 8
cm de ancho y 4 cm de grosor. Pesa
aproximadamente 150 a 200 gramos.
6.2. Posee una superficie convexa y una
superficie cóncava, denominada hilio por
donde penetran vasos arteriales y
emergen vasos venosos y linfáticos.
6.3. Es un órgano localizado entre la circulación
sanguínea, por lo tanto desarrolla las
funciones de filtrar la sangre, eliminando
eritrocitos viejos o seniles de la circulación
general e interviene en procesos de
defensa inmunológica.
6.4. En algunas especies animales como los caninos, felinos y equinos interviene como un
reservorio de sangre.
6.5. La superficie de corte del bazo al estado fresco, nos muestra una masa uniforme de un color
rojo oscuro (pulpa roja) representada
microscópicamente por la presencia abundante de
eritrocitos contenidos en capilares sinusoidales y senos
venosos. En la pulpa roja se distribuyen, de manera mas
o menos regular, unas estructuras pequeñas
redondeadas u ovaladas de un color blanquecino
grisáceo (la pulpa blanca., representaciones de los
folículos linfáticos.
6.6. El bazo está rodeado por una cápsula gruesa de tejido
conjuntivo fibroso denso irregular con fibras reticulares
y, en varias especies animales incluida la humana, por
cantidades variables de fibras musculares lisas.
6.7. Desde la cápsula se desprenden abundantes trabéculas
que se introducen hacia el interior del órgano
separándolo en compartimentos incompletos los cuales
poseen un estroma reticular fibrocelular característico
de los órganos linfáticos. (Fig. linf. 41) Las arterias y venas
discurren entre el tejido conjuntivo de las trabéculas.
6.8. La red estromal alberga abundantes capilares sinusoides
y senos venosos, revestidos por un endotelio incompleto
que tiene adheridas, en su superficie externa o
intercalada entre las células endoteliales, a células
reticulares que desarrollan cierta capacidad fagocítica.
6.9. Las ramas de la arteria esplénica penetran la cápsula del
hilio y se ramifican nuevamente para incorporarse a las trabéculas (arterias trabeculares por
donde discurren hacia el interior del parénquima acompañando a trabéculas de menor grosor.
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6.10. Cuando las arterias

alcanzan un diámetro de unos 0.2
mm. abandonan las trabéculas y
son rodeadas, por infiltración de su
capa adventicia laxa, de
abundantes linfocitos que se
disponen en forma de cordones
linfáticos en forma de una vaina,
denominada vaina linfática
periarterial. Estas arterias
denominadas arteriolas centrales
pueden emitir ramas laterales que
atraviesan la periferia de los
folículos linfáticos de la pulpa
blanca (arteriolas foliculares).

6.11. Las arteriolas centrales o las foliculares se ramifican en tres o cuatro arteriolas denominadas
arteriolas peniciladas que discurren en la pulpa roja. Posteriormente se subdividen en
capilares arteriales terminales (sinusoidales) que drenan la sangre en los senos venosos,
éstos se reúnen para constituir las vénulas de la pulpa que se incorporan a las trabéculas en
la forma de venas trabeculares y abandonan el bazo como venas esplénicas
6.12. El bazo, al igual que los ganglios linfáticos, ejerce actividad inmunológica cuando arriban al
parénquima esplénico antígenos de diversa índole (bacterias, virus o moléculas extrañas). Las
características morfológicas y bioquímicas de esta respuesta inmune son similares a la de los
linfonodos.
6.13. El contacto con los antígenos se produce en el ámbito de la pulpa blanca donde son
fagocitados por los macrófagos, procesados en el interior de ellos y luego son expuestos en
su plasmalema o son liberados y captados por las células reticulares especialmente en
aquellas localizadas en las vainas linfáticas periarteriales.
6.14. En esta región se localizan abundantes linfocitos T (zona dependiente del timo), los cuales
interactuan con los antígenos liberados por las células procesadoras de antígenos
(macrófagos y células dendríticas) para orientar una respuesta citotóxica o una respuesta
humoral. En cualquiera de las dos circunstancias, los linfocitos T abandonan el bazo a través
de vasos linfáticos eferentes para incorporarse al torrente circulatorio y recircular a ganglios
linfáticos o a los folículos linfáticos de la pulpa blanca del bazo.
6.15. En las regiones de la pulpa blanca donde existen folículos linfáticos, la actividad antigénica
estimula los centros germinativos, lugares donde se reproducen abundantes linfocitos B los
cuales, una vez diferenciados, se distribuyen en la parte más periférica de los folículos y se
transforman en células plasmáticas, generadoras de anticuerpos; éstas abandonan el bazo
también a través de vasos linfáticos eferentes para introducirse posteriormente a la
circulación sanguínea.

II. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

 Identificar macroscópicamente los principales células inmunes de sangre periférica

 Aplicar la lectura del leucograma en frotis sanguíneo para determinar infecciones y estado
inmune
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 Identificación microscópica de los principales tejidos linfoides (Timo, Bazo y Ganglios

Linfáticos)

III. MATERIALES

 Frotises sanguíneos teñidos con colorante de Wright

 Cortes histológicos de tejido linfoides teñidos con Hematoxilina- Eosina
 Microscopios de Luz

IV. ACTIVIDADES

1. BARRERAS DE BIOSEGURIDAD Y LIMPIEZA DE MESA DE TRABAJO

1.1. Colocarse las barreras primarias de protección (Bata blanca totalmente abotonada, pelo
largo recogido, guantes de látex)

1.2. Limpiar y desinfectar la mesa de trabajo usando Hipoclorito de sodio al 5% o 10% y alcohol
etílico 70%.

2. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DEL FROTIS DE SANGRE

2.1. Enciende el microscopio y ubica el frotis en la platina del microscopio.
2.2. Coloca el primer aumento (generalmente son el objetivo de 5 o 10X) y enfoca el frotis
usando la perilla macro y micrométrica.
2.3. Ajusta la luz del condensador y el diafragma.
2.4. Ubica el objetivo en la “cola” del extendido. Recuerda que los extendidos de sangre se
leen por el extremo más alejado de donde colocaste la gota de sangre, y este extremo
generalmente se llama “cola del extendido”. (La parte media del extendido se llama
“cuerpo”, y el extremo donde iniciaste el extendido se llama “cabeza”). En la “cola” las
células están muy bien separadas unas de otras, y esto te permitirá observarlas y
diferenciarlas individualmente.
2.5. Ahora cambia al objetivo de 40X y podrás empezar a leer la lámina.
2.6. Si no puedes diferenciarlas a este aumento, entonces debes usar el aumento de 100X;
pero recuerda que con este objetivo debes colocar previamente en la lámina una gota de
aceite de inmersión.
2.7. Identifica las células de la inmunidad en sangre periférica.

3. ANALISIS CUANTITATIVO DE LEUCOCITOS EN FROTIS DE SANGRE

3.1. Organice a su equipo de trabajo y selecciones 2 o 3 frotises de sangre procedentes de la

misma persona. (Así usted y su grupo podrán revisar simultáneamente la muestra
sanguínea del mismo paciente).
3.2. Contar sistemáticamente 100 leucocitos del mismo paciente sin repetirlos e identificado
cada tipo de célula (linfocitos, monocitos, eosinófilos, neutrófilos, basófilos).
3.3. Limpie y apague el microscopio.
3.4. Calcule el porcentaje de cada tipo celular.
3.5. Construya una tabla con estos valores, y compárelos con la TABLA 1 y TABLA 2.
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3.6. Analice si existe evidencia de alteración del porcentaje de leucocitos de su paciente.

3.7. Compare y discuta sus resultados con el resto de los grupos de práctica.

4. DISCUSION DE RESULTADOS
4.1. Discusión de las lecturas realizadas por los alumnos.
4.2. Discusión de una lámina con leucocitosis.

5. RECONOCIMIENTO MICROSCOPICO DE ORGANOS Y TEJIDOS LINFOIDES

5.1. Con ayuda de láminas teñidas y microscopio reconozca las estructuras celulares y tisulares
del Timo, Ganglio linfático, Bazo y Amigdala de ratón.

6. BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO y LAVADO DE MANOS

6.1. Ordene adecuadamente el material usado en la práctica.

6.2. Apague y limpie adecuadamente el microscopio

6.3. Descarte apropiadamente el material usado o contaminado.
6.4. Desinfecte adecuadamente la mesa de trabajo usando Hipoclorito de sodio (legía) y
alcohol etílico 70%.

6.5. Descarte los guantes y practique el lavado de manos.

7. PASO DE SALIDA

Al finalizar la práctica habrá una evaluación escrita de los temas tratados durante la práctica y
del contenido descrito en la guía de práctica.

8. ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE E INVESTIGACIÓN

8.1. Indique las características morfológicas y estructurales de los tejidos y órganos del sistema
inmune observado en la práctica.
8.2. Indique las principales funciones de los tejidos y órganos del sistema inmune observado
en la práctica. ¿Cómo se clasifican?
8.3. Investigue: ¿Qué soluciones fisiológicas son usadas para mantener viable tejidos extraídos
del cuerpo? ¿Qué características deben tener las soluciones? Mencione los medios más
usados en mantenimiento de órganos humanos.

8.4. Respecto a las células de sangre periférica: Confeccionar una tabla con los valores
obtenidos en los grupos de práctica y los valores teóricos normales de las células
inmunocompetentes encontradas en la sangre de humanos normales.

8.5. Investigue que aspectos éticos se debe tener en consideración con el manejo de animales
de laboratorio. Mencione las leyes peruanas o internacionales que existan para estos
temas. Consulte la página WEB de la UPCH. Comité de ética.
Inmunología General 2016 – 2 Universidad Peruana Cayetano Heredia
Prácticas de Laboratorio Facultad de Medicina Alberto Hurtado
Escuela de Tecnología Médica

9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

9.1. Naim R. y Helbert M. Immunology for Medical Students. Harcour Publishers Limited,
Mosby. 2002.

9.2. Curtis Schneck. Biologia. Séptima edición. Editorial Panamericana 2007. Cap. 40.
9.3. Carr Rodak. Atlas de hematología clínica. Tercera edición. Editorial Panamericana.2009.

9.4. Garibay A. Manual de Prácticas de Inmunología. Editorial Unison, Sonora. México. 2006.