Código FLA-23 v.

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Guía Unificada de Laboratorios
MICOLOGIA CLINICA
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1.Titulo:

Guía No 7
MICOSIS SUBCUTANEAS

2. Objetivo General
Realizar el diagnóstico correcto de las micosis subcutáneas mediante el examen directo, e identificar género y especie
de los agentes etiológicos.

2.1 Objetivos Específicos

1.Aplicar una toma de muestra adecuada.
2.Identificar mediante el examen directo, las estructuras correspondientes a las micosis subcutáneas.
3.Informar correctamente el resultado de los exámenes directos.
4.Identificar género y especie de los agentes etiológicos
5.Correlacionar los datos clínicos y epidemiológicos de cada una de estas micosis.

3. Marco Teórico
Las micosis subcutáneas son un grupo heterogéneo de enfermedades que se caracterizan por el desarrollo de lesiones
en el sitio de implantación del hongo. En estas micosis es muy importante la relación entre las defensas del hospedero
y la virulencia del agente infeccioso; de ahí que en sujetos inmunocompetentes están comprometidos la piel y el tejido
celular subcutáneo, pero la diseminación a órganos más profundos es rara.

Las micosis subcutáneas o intermedias comprenden: La esporotricosis, la cromomicosis, los micetomas (eumicetomas
y actinomicetomas), la lobomicosis, la rinosporidiosis y las zigomicosis.

1. Esporotricosis

Definición
La esporotricosis es una micosis del tejido celular subcutáneo ocasionado por un hongo dimórfico térmico, denominado
Sporothrix schenckii. El hongo se encuentra en la naturaleza, bajo su face miceliar, como un saprófito de material
vegetal así como en la tierra; también se ha aislado de aguas.

La esporotricosis es una entidad subaguda o crónica que se desarrolla después de la implantación traumática del
agente etiológico; también, aunque excepcionalmente, puede adquirirse por la inhalación de las conidias del hongo. La
esporotricosis es una entidad polimorfa que ha sido clasificada clínicamente en primaria cutánea y primaria pulmonar.
La esporotricosis primaria cutánea están consideradas dos formas, la linfangítica y la fija. En pacientes
inmunosuprimidos y en alcohólicos la micosis puede diseminarse hematógenamente a huesos, articulaciones, piel,
ojos, sistema nervioso central o sistema genitourinario. (1)

Agente etiológico
Sporothrix schenckii

Muestra
Exudados, material purulento, Biopsias, Esputo, Líquido sinovial, Líquido cefalorraquídeo.

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Daisy Janeth Carvajal B Versión 2 de 2
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Fecha: Octubre de 2009 Fecha: Fecha:Octubre de 2009
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Examen directo
Inmunofluorescencia directa (IFD)
Coloraciones histológicas (Hematoxilina-Eosina - HE, Acido Peryódico de Schiff -PAS, Plata metenamina)

Hallazgos
Las blastoconidias que representan la forma parásita del hongo, son de difícil observación en las muestras clínicas de
lesiones cutáneas primarias, aún con coloraciones especiales para hongos, con excepción de la IFD. En los casos
positivos, se observan blastoconidias pequeñas (2-10um) esféricas, ovales o en forma de cigarro, uni o multigemantes.
En las muestras de lesiones pulmonares, de articulaciones y otras formas diseminadas, las blastoconidias son
generalmente más abundantes.
En algunos casos, en las biopsias teñidas con HE o PAS, se observa la blastoconidia rodeada de un material
eosinofílico (reacción de Splendore-Hoeppli), conocida como cuerpo asteroide.

Significado
La visualización del hongo por métodos especiales y la reacción tisular establecen o sugieren las esporotricosis; sin
embargo, los cultivos son esenciales para el diagnóstico, dada su alta sensibilidad. La inmunofluorescencia directa y la
inmunoperoxidasa son las técnicas que permiten visualizar con más regularidad las blastoconidias, pero estas técnicas
sólo suelen estar disponibles en algunos centros de referencia.

Informe de resultados
Examen directo: por inmunofluorescencia o inmunoperoxidasa, se observan blastoconidias compatibles con Sporothrix
schenckii.

Biopsia: Descripción de la reacción tisular, se observan cuerpos asteroides y/o blastoconidias compatibles con
Sporothrix schenckii

Prueba cutánea
Consiste en aplicar intradérmicamente al paciente una dilución del antígeno levaduriforme o miceliar; una prueba de
induración de 5mm o más después de 48 horas se considera positiva. Esta prueba es útil para determinar la
exposición al hongo.

Cultivo
Sporothrix schenckii crece bien en casi todos los medios de laboratorio y resiste la cicloheximida; las colonias se
desarrollan entre 3 y 5 días y con una temperatura de 25 a 27C. Las colonias son inicialmente brillantes y de un
pigmento muy variable entre blanco, pardo o negruzco; posteriormente adquieren consistencia vellosa.(Figura 1)

El examen microscópico con azul de lactofenol muestra hifas con conidióforos largos y finos que crecen en ángulo
recto respecto a la hifa y que presentan conidias en su ápice que se acomodan semejando una palma o una margarita.
Una segunda forma conidial, producida por algunas cepas, corresponde a macroconidas triangulares de color pardo y
pared gruesa, las cuales parecen ser más resistentes a los factores ambientales desfavorables. (Figura 2)

Los repiques a 37C desarrollan colonias de levaduras que presentan microscópicamente blastoconidias esféricas u
ovaladas, de tamaño variable e indistinguibles de otras levaduras.

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Figura 1 Colonia de Sporothrix schenckii Figura 2 Sporothrix schenckii en fase micelial

2. Cromoblastomicosis

Definición
La cromoblastomicosis es una micosis crónica de la piel y del tejido celular subcutáneo, producida por hongos
dematiáceos, que en el tejido y bajo su forma parasitaria, producen células escleróticas de Medlar. Los agentes
etiológicos son hongos ambientales asociados a material vegetal en descomposición.
Las lesiones, aunque muy polimorfas, conservan algunas características predominantes como son su aspecto
verrucoso, bordes infiltrados y placas irregulares. Las lesiones activas generalmente son secas, descamativas o
costrosas y de color violáceo. Suelen presentarse formaciones nodulares que progresan hasta el desarrollo de
seudotumores, algunas veces pedunculados, por lo que adquieren aspecto de coliflor. En algunos casos son placas
infiltradas poco levantadas; la ulceración no es frecuente y está relacionada con infección bacteriana secundaria, la que
origina un olor desagradable.

Agentes etiológicos
Fonsecaea pedrosoi
Cladophialophora carrionii
Fonsecaea compactum
Phialophora verrucosa
Rhinocladiella aquaspersa

Muestra
Puntos negros dérmicos, Escamas, costras, Material purulento,exudados, biopsia.
En algunos casos (5-10%) es necesario recurrir a la biopsia debido a la hiperqueratosis que impide penetrar al lugar
donde se encuentra el hongo.

Examen directo
KOH 10-20%, solo o adicionado con tinta china azul.
Negro de Clorazol E
Coloraciones histológicas (HE,PAS)

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Hallazgos
Se observan una o múltiples células redondeadas, de color café o amarillo ocre, de 4 a 12 um de diámetro, de pared
gruesa, con inclusiones citoplasmáticas y con particiones o septos. Estas células llamada cuerpos escleróticos o
células de Medlar, se dividen en varios planos, con septos en diferente orientación; no hay reproducción por gemación,
Ocasionalmente, en los casos de larga duración, se observa también hifas cortas, septadas, de pared gruesa y
dematiáceas.
En biospsias teñidas con Hematoxilina-eosina, las células de Medlar conservan su color característico, en tanto que
con coloraciones de plata no es posible diferenciar tales células. (Figura 3)

Significado
La observación de las células escleróticas de Medlar establece el diagnóstico de cromoblastomicosis, pero el cultivo es
indispensable para determinar el género y la especie del agente etiológico.

Informe de resultados
Se observan células escleróticas de Medlar.

Figura 3 Células de Medlar

Cultivo
El medio de cultivo que se utiliza para aislar el agente etiológico es el Sabouraud modificado o Mycosel. Este medio
se incuba a temperatura ambiente durante cuatro semanas, porque estos microorganismos son de crecimiento lento.
En este medio los diferentes géneros dan colonias semejantes con pigmento oscuro y micelio estéril; por lo tanto para
su clasificación, se colocan en medios especiales, como el agar harina de maíz o el medio de Kamiski modificado
mediante microcultivos, en los cuales se logra la esporulación característica de cada especie.

Fonsecaea pedrosoi
Es el más común en Colombia. La colonia es de crecimiento lento, de color parduzco, verde oliva o gris y de
consistencia aterciopelada. Microscópicamente se caracteriza por producir los tres tipos de conidiogénesis: fiálides,
rinocladiellas y cladosporium, predominando esta última ( Figura 4).

Fonsecaea compactum

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La colonia es de crecimiento muy lento, de color negro y muy adherida al medio. Microscópicamente se observa
esporulación tipo cladosporium, pero las esporas se agrupan en forma compacta sobre la cabeza conidial (Figura 5).
Phialophora verrucosa
La colonia es de color gris oliva o negro y de forma aplanada. Microscópicamente se caracteriza por producir fiálides
con collarete a lo largo de la hifa; dentro del cuello se producen esporas pequeñas elípticas
Que permanecen unidos formando una masa, lo que le da aspecto de florero. (Figura 6)

Cladophialophora carrionii
Crece lentamente dando una colonia pequeña, lisa y de color negro a verde oliva. Microscópicamente da una
esporulación tipo cladosporium con conidióforos que producen cadenas largas de conidias. (Figura 7)

Rhinocladiella aquaspersa: presenta conidiación tipo rinocladiella o acroteca: Los condióforos son simples y con
frecuencia no se diferencian de la célula vegetativa. En la punta y a lo largo del conidióforo se producen
conidios ovales únicos. El conidióforo se elonga simpodialmente para producir mas conidios de una sola
célula. Cuando se desprenden los conidios, en el conidióforo se observan pequeñas cicatrices; en el
conidio también queda una cicatriz de unión. (Figura 8)

Es importante hacer la diferencia entre los mohos negros patógenos y los saprófitos. Los primeros no licuan la gelatina,
no coagulan la leche ni digieren el almidón, lo que si hacen los ambientales o saprófitos.

Figura 4 Fonsecaea pedrosoi Figura 5 Fonsecae compactum Figura 6 Phialophora verrucosa

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Figura 7 Cladophialophora carrioniii Figura. 8 Rhinocladiella aquaspersa

4. Materiales, Equipos e Insumos

4.1 Materiales
Elementos de bioseguridad: Bata manga larga, guantes, gorro, careta.
Láminas portaobjeto
Laminillas cubreobjeto
Fósforos
Toalla de papel
Hojas de bisturí
Lancetas
Tijeras
Cinta pegante

4.2 Medios
Cultivos en Agar sabouraud de los agentes etiológicos de Esporotricosis y Cromoblastomicosis.

5. Reactivos
KOH 10%

6. Procedimiento
Describir las características macroscópicas de las lesiones.
Observar las placas de colección.
Reconocer las diferentes formas de esporulación de los mohos negros que son agentes etiológicos de
Cromoblastomicosis
Observar las características de las colonias de estos hongos
Realizar la técnica de microcultivo para lograr la esporulación de mohos negros.

7. Nivel de riesgo

Nivel 2 (Medio)

8. Bibliografía
 ARANGO M., CASTAÑEDA E., Micosis humanas, Procedimientos diagnósticos. Exámenes directos. Edición CIB,
INS. 1.995
 ESCOBAR M, y otros. Micología. Manual de Laboratorio. Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad
de Medicina, Universidad de Antioquia. 1.99
Fotografías tomadas de:
 Dra. Francisca Hernández Hernández, Facultad de Medicina, UNAM:
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/micologia/micsubcu_cromo.php
 http://cromomicosis-chromoblastomicosis.blogspot.com/2008/09/cromomicosis-por-rhinocladiella.html
 http://www.pf.chiba-u.ac.jp/gallery/fungi/f/Fonsecaea_compacta_microscopy.htm
 http://overcomingcandida.com/mycology/mycology-5.htm

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9. Anexos
CONSULTA
1.Consulte los agentes etiológicos, muestras, e informe de examen directo de la lobomicosis, rinosporidiosis,
zigomicosis y micetoma.
2.Dibuje y explique los siguientes tipos de conidiogénesis: Fialofora, rinocladiella o acroteca y cladosporium.
3.Cómo se observa microscópicamente Rhinocladiella aquaspersa
4.Cuál es la diferencia entre Cromoblastomicosis y faeohifomicosis.
5.Enuncie tres criterios que corroboren un diagnóstico de esporotricosis.
6.Qué interpretación tiene una prueba de Esporotriquina positiva.
7.Consulte en internet los gráficos correspondientes a los exámenes directos de las micosis intermedias.

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