AMILASA SALIVAL
Objetivo
- Determinar la taza de hidrólisis del almidón por acción de la amilasa
salival, mediante la observación de pérdida de color del complejo
Almidón-yodo.
- Determinar el efecto de factores como temperatura y concentración de
enzima en una reacción enzimática.
- Analizar la relación entre la velocidad de reacción de la enzima amilasa
salival y los factores ambientales.
Descripción del desarrollo de la práctica
Tener en consideración el inciso de procedimiento.
Materiales y Equipos
10 Tubos de ensayo
5 Goteros
Pinzas de madera
Beaker de 100 ml
Baño maría a 37 C
Baño de agua hirviendo
Rótulos o marcador indeleble
Almidón al 1 %
Reactivo de Felhing
Solución de Lugol
Solución de saliva
Procedimiento:
Parte I. Acción enzimática
En esta práctica experimental se calculará la taza de hidrólisis de almidón por
determinación del tiempo empleado por el cambio de color.
*Colectar aproximadamente diez mililitros de saliva en un beaker pequeño
rotular esta solución de saliva como solución “stock”
Nota: evite masticar chicle, comer dulces o beber líquidos aproximadamente
una hora antes de iniciar este laboratorio.
*Prepare una serie de 4 tubos de ensayos limpios y secos y adicione 2 ml de
solución de almidón a cada tubo, guárdelas para emplearlas más tarde.
Realiza el siguiente procedimiento para determinar la acción de la amilasa
salival:
Agrega al tubo 1 unas 10 gotas de Reactivo de Fehling, calienta 5
minutos en baño de agua caliente y observa el cambio de color.
Adiciona al tubo 2: 10 gotas de solución de Lugol. Deja a temperatura
ambiente por 5 minutos y determina el cambio de color.
Agrega a los tubos 3 y 4: 0,5 ml de saliva y coloca en baño maría a
37°C durante 15 minutos.
Adiciona al tubo 3, 10 gotas de reactivo de Fehling y calienta en baño
maría por 5 minutos.
Agrega al tubo 4, 10 gotas de Lugol, deja en reposo por 5 minutos y
observa si hay cambio de color.
Parte II Efecto de la temperatura
En 3 tubos de ensayo coloque 1 ml de solución de almidón.
Agregue 0,2 ml de saliva a los tubos 1, 2 y 3.
Incube lo tubos por 10 minutos de acuerdo a las siguientes
instrucciones:
Tubo # 1 Baño María a 37°C
Tubo # 2 Baño de hielo
Tubo # 3 Baño de agua hirviendo
Resultados y Conclusiones
PARTE I
PARTE II
Presentación escrita de los resultados obtenidos y las conclusiones en el
informe, según el modelo del formato anexado al final de la guía.
Cuestionario
Parte I:
1. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Fehling? Qué tipo de
carbohidratos reaccionan con este reactivo?
2. ¿Qué es un azúcar reductor?
3. ¿Cuál es el fundamento de la identificación de azúcares reductores con
el reactivo de Benedict?
4. ¿Qué carbohidratos reaccionan con la solución de Lugol?. Que
reacción ocurre en esta prueba?
5. ¿Qué efecto tiene la amilasa salival sobre la molécula de almidón?
6. ¿Cómo explicas los resultados con los reactivos de Fehling y de Lugol
después de la acción de la enzima.
7. ¿Qué productos se obtienen de la hidrólisis enzimática del almidón.
Escribe la reacción enzimática de la amilasa?
8. ¿Cuál es la importancia de la saliva en la digestión de los
carbohidratos?
Parte II:
1. ¿A qué temperatura trabajó la enzima con más eficiencia?.
2. ¿Cuál es la temperatura óptima de la amilasa salival?
3. ¿Qué efectos tiene en la actividad y estructura de la enzima las
diferentes temperaturas?.
DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
Objetivo
- Manipular muestras biológicas.
- Determinar la actividad enzimática de la catalasa en forma
experimental.
Descripción del desarrollo de la práctica
El principal objetivo de esta actividad es familiarizarse con la metodología
científica, tener en cuenta el inciso procedimiento.
Materiales y Equipos
Gradilla
Pipetas graduadas
Baño maría
Perilla de plástico
Mechero
Tubos de ensaye
Sangre nitratada
Peróxido de hidrógeno
Agua destilada
Procedimiento:
1. Enumerar los tubos de ensayo.
2. Agregar a los tubos 2 ml de agua destilada.
3. Introducir uno de los tubos en baño en ebullición (tubo 2).
4. Añadir a los tubos 2 gotas de sangre (tubos 2, 3, 4 y 5).
5. Introducir los tubos 2 y 3 al baño maría a 37°C, el 4 en ebullición, y el 1 y 5
en ninguno.
6. Agregar a todos los tubos 0.5 ml de peróxido de hidrógeno.
Interpretar y analizar.
Resultados y Conclusiones
Presentación escrita de los resultados obtenidos y las
conclusiones en el informe, según el modelo del formato
anexado al final de la guía.
Cuestionario
1. ¿En qué casos se puede encontrar alguna alteración de la
enzima catalasa?.
2. ¿Sirve la determinación de la catalasa del plasma para
apoyar el diagnóstico en procesos inflamatorios severos?.
3. ¿En qué casos aumenta la fosfatasa alcalina?.
4. ¿Qué órganos están relacionados con las enzimas ALT y AST?.
