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Fundamentos de la PCR en Biología Molecular

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que permite obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN específico mediante la repetición de ciclos de desnaturalización, hibridación de cebadores y elongación. En cada ciclo, la ADN polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria al molde utilizando nucleótidos y cebadores. Tras varios ciclos, se pueden obtener millones de copias del fragmento de ADN deseado. La PCR se usa ampliamente en

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Fundamentos de la PCR en Biología Molecular

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que permite obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN específico mediante la repetición de ciclos de desnaturalización, hibridación de cebadores y elongación. En cada ciclo, la ADN polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria al molde utilizando nucleótidos y cebadores. Tras varios ciclos, se pueden obtener millones de copias del fragmento de ADN deseado. La PCR se usa ampliamente en

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FUNDAMENTOS DE LA REACCION EN CADENA DE 3.

El ADN polimerasa en conjunto con los


LA POLIMERASA nucleótidos sintetizan una nueva hebra del
ADN molde, se enlonga la cadena (72 C,
QUE ES
30s).
Es una prueba molecular, muy usada en el campo
El ciclo se repite entre 25 a 35 veces en un periodo
de la biología molecular.
de 2 horas a 3 horas.
Desarrollada por Kary Mullis en 1986.
PARA REALIZAR LA TECNICA DE PCR SE NECESITA:
Desarrollada para ofrecer una alternativa para el
- Desoxinucleotidotrifosfato (dnTPs)
estudio del ADN.
elongación -> sustrato para la síntesis del
FUNCION/OBJETIVO nuevo ADN.
Obtener un gran numero de copias de un - Cebadores (Primers r y f) alineamiento ->
fragmento de ADN particular mediante una oligonucleótidos complementarios,
amplificación in vitro. delimitando la zona de ADN que se quiere
amplificar, 15 a 20 nucleotidos.
Ejemplo, cabello tiene mutación: se aísla el ADN
- ADN polimerasa -> enzima termoestable
especifico y se amplifica (se saca bastantes copias
(taq polimerasa) resistente a temperaturas
del ADN) para determinar el tipo de mutación.
altas. Taq -> termo acuática, producto del
Técnica de amplificación selectiva (amplificación microorganismo que se purifico y luego
porque se saca bastantes copias y selectiva porque industrializo.
las copias sacadas son de un ADN especifico que - ADN molde
nosotros queremos averiguar), se basa en la - Agua destilada ultra pura.
función de la enzima ADN polimerasa y actúa en - Solución tampón o buffer -> permite el
una fase del PCR, esta enzima fabrica una cadena adecuado funcionamiento del ADN
de ADN complementaria a la que se va a extraer. polimerasa.
TERMOCICLADOR -> realiza la serie de ciclos con - Iones divalente (Mg) -> la enolasa necesita
variaciones de temperatura. de magnesio(cofactor) para funcionar.

FASES DE PCR CUALIDADES

Se pasa de tener un ADN molde (ADN que Sensibilidad -> con una mínima cantidad de ADN se
queremos identificar). puede realizar la amplificación.

1. Se separan las hebras del ADN porque el Especifica -> solo se obtiene un solo producto
PCR se expone a un proceso de amplificado.
desnaturalización debido a que se aumenta Eficiencia -> amplificación máxima obtenida en
la temperatura a 94-96 grados C y se varios ciclos.
rompen los puentes de hidrogeno. (94 C,
Fidelidad -> poco margen de error.
1min)
2. Primer o cebador se acopla en una fase de EJEMPLOS DE CUANDO SE USA:
alineamiento o hibridacion a las cadenas - Medicina forense, determinar el ADN de
moldes para delimitar a las cadenas (50-56 una persona.
C). (52 C, 1min)
- COVID genoma ARN. Con la PCR el arn del
covid se convierte en ADN mediante una
enzima (retro transcriptasa)
- Cáncer
- DX prenatal de enfermedades genéticas
Siempre partimos de un material genético.
A temperaturas de hibridación mas elevadas que la
Tm de los cebadores la rigurosidad aumenta y la
especifidad tambien.

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