PRACTICA N°
ADN: MOLÉCULA DE LA VIDA
I. INTRODUCCIÓN
El centro de la ingeniería genética es la biología molecular (es decir, el estudio de
moléculas de la vida). Los biólogos moleculares en las últimas décadas han
concentrado sus esfuerzos en manipular "moléculas de información" como el ADN y
las proteínas porque todas las características externas de los organismos tienen su
base en las proteínas de los genes hechos de ADN. El ácido desoxirribonucleico
consiste en dos cadenas de polinucleótidos, compuesta de 4 subunidades de
nucleótidos. El aislamiento de ADN es un procedimiento rutinario e importante para
los biólogos moleculares. Una vez aislado, el ADN y la secuencia de sus
subunidades se pueden determinar, manipular o alterar. Cuando el ADN u otras
moléculas se aíslan de las células, la solución circundante se vuelve viscosa. Esto se
debe a que las moléculas de ADN son largas y tienden a adherirse entre sí debido a
la cohesión entre ellas y el enlace de hidrógeno (el enlace de hidrógeno también
mantiene juntas las dos cadenas de la doble hélice del ADN).
II. COMPETENCIAS
- Identifica el ADN mediante extracción de tejidos vegetales y/o animales.
- Comprueba las propiedades generales las moléculas del ADN.
- Se familiariza con las reacciones usadas para la extracción del ADN.
III. EXTRACCIÓN DE ADN - FRESAS
⮚ Fundamento: Las fresas son una excelente fuente de ADN, ya que tienen 8
copias de cada cromosoma, lo que resulta en una gran cantidad de ADN por
aislar. Los principales reactivos a usar son: el lavavajillas, los cuales disuelven la
membrana, que es una bicapa lipídica; la sal, que removerá las proteínas que
están unidas al ADN para que no precipiten junto a este; y el etanol, que
promoverá la precipitación.
⮚ Reactivos: Etanol (una botella de 30 ml, colocada una noche antes en la
refrigeradora), lavavajillas líquido, agua, sal
⮚ Materiales: 02 vasos de vidrio, 01 bolsa Ziploc, papel toalla, palo de helado,
cucharitas de metal
⮚ Muestras: 02 fresas
⮚ Procedimiento:
1.Quitar las hojas que puedan tener las fresas.
2.Colocar las fresas en la bolsa Ziploc, sellarla y aplastar suavemente las fresas por
dos minutos. Molerlas completamente.
3.En un vaso de vidrio (vaso N°1), mezclar dos cucharaditas de lavavajillas líquido, 1
cuchara de sal, y media taza de agua.
4.Añadir dos cucharaditas de la mezcla a la bolsa Ziploc conteniendo las fresas
molidas.
5.Resellar la bolsa y mezclar las fresas por dos minutos.
6.Abrir la bolsa de fresas, y con ayuda del papel toalla, filtrar el contenido de la bolsa
con fresas en un vaso de vidrio nuevo (vaso N°2). Vierte lentamente el contenido
para evitar que el papel toalla se rompa.
7.Verter por un lado al vaso de fresas filtrado (vaso N°1), una cantidad de alcohol a
baja temperatura similar al filtrado de fresas. No mezclar.
8.En unos segundos, se observará el desarrollo de una sustancia blanca en la
superficie del extracto de fresas.
9.Con ayuda del palito de helado, trata de coger el sobrenadante blanco.
10. Anota tus observaciones y añade imágenes de los pasos del experimento.
V. EXTRACCIÓN DE ADN – SALIVA (OPCIONAL)
⮚ Fundamento: En este procedimiento, se extraerá ADN de las mucosas
provenientes de las mejillas. Será mejor que no se haya ingerido alimento ni haber
mascado chicle. De la misma manera que las fresas, el ADN se obtendrá de la lisis
celular y nuclear, usando el lavavajillas y haciendo que precipite añadiendo etanol.
⮚ Reactivos: Etanol (una botella de 30 ml, colocada una noche antes en la
refrigeradora), lavavajillas líquido, agua, bebida rehidratantes de color claro.
⮚ Materiales: 02 vasos de vidrio, palo de helado, cucharitas de metal
⮚ Muestras: Células de la mucosa bucal.
⮚ Procedimiento:
1. Toma un sorbo de la bebida rehidratante y mantenlo en la boca. Remover por un
minuto vigorosamente para desprender las células de la mucosa. Mientras la
remueves, trata de frotar las mejillas con los dientes y la lengua para promover el
desprendimiento.
2. Escupir el sorbo en un vaso de vidrio (vaso N°1).
3. En otro vaso de vidrio (vaso N°2), mezclar dos cucharaditas de lavavajillas
líquido y media taza de agua.
4. Añadir dos cucharaditas de esta mezcla al vaso con el líquido que escupiste
(vaso N°1).
5. Remover suavemente este vaso (vaso N°1) de lado a lado por tres minutos.
6. Dejar al vaso (vaso N°1) reposar por un minuto.
7. Verter por un lado al vaso N°1, una cantidad de alcohol a baja temperatura
similar a la cantidad de líquido escupido. No mezclar.
8. Con una cucharita, tratar de mover suavemente la capa del etanol hacia la capa
de la mezcla del lavavajillas. Cuando se haga esto aparecerá un sobrenadante
blanco.
9. Con ayuda del palito de helado, trata de coger el sobrenadante blanco.
10. Anota tus observaciones y añade imágenes de los pasos del experimento.
VI. CUESTIONARIO
1.¿Por qué se usó alcohol a baja temperatura y no a temperatura ambiente?
2.¿Por qué fue necesario moler las fresas?
3.El ADN que se extrae de la boca ¿sólo es extraído de las células de las mucosas
bucales?
4.Investigue sobre otros procedimientos se usan para extraer ADN
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
- Darrel S, Vodopich Randy Moore. 2017. Biology laboratory manual. Eleventh
edition. McGraw-Hill Education, New York
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Morgan, D., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P.
(2015) Molecular Biology of the Cell. Garland Science, Taylor & Francis Group,
1464 pp.
- Hirakawa, H., Shirasawa, K., Kosugi, S., Tashiro, K., Nakayama, S., Yamada,
M., Kohara, M., Watanabe, A., Kishida, Y., Fujishiro, T., Tsuruoka, H., Minami,
C., Sasamoto, S., Kato, M., Nanri, K., Komaki, A., Yanagi, T., Guoxin, Q.,
Maeda, F., Ishikawa, M., Kuhara, S., Sato, S., Tabata, S. & Isobe, S.N. (2013)
Dissection of the Octoploid Strawberry Genome by Deep Sequencing of the
Genomes of Fragaria Species. DNA Research, 21, 169-181.
- Mercado, J.A., El Mansouri, I., Jiménez-Bermúdez, S., Pliego-Alfaro, F. &
Quesada, M.A. (1999) A convenient protocol for extraction and purification of
DNA from Fragaria. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant, 35, 152-
153.
