Características generales de la reacción antígeno-anticuerpo

Los ligandos biológicos basados en la afinidad entre moléculas, como enzima y sustrato, hormona y receptor, antígeno y
anticuerpo, desempeñan un papel importante en los organismos vivos. Las características de reconocimiento específicas
de los inmunoensayos (reacciones antígeno-anticuerpo [Ag-Ab]) se han utilizado ampliamente como herramientas
analíticas, lo que se suma a la amplia gama de métodos disponibles en las pruebas de laboratorio clínico.

Se pueden usar inmunoensayos para la detección de antígenos o anticuerpos. Para la detección de antígenos, el

anticuerpo específico correspondiente debe prepararse como uno de los reactivos. Lo contrario es cierto para la
detección de anticuerpos. La sensibilidad de los inmunoensayos se ha mejorado a través del desarrollo de nuevos tipos
de sistemas de detección de señales y tecnología de fase sólida. Los inmunoensayos se han optimizado para detectar
menos de 0,1 pg / ml de antígeno presente en la sangre. Se pueden aplicar a la detección de haptens como pequeñas
moléculas; proteínas y complejos proteicos como macromoléculas; y cualquier anticuerpo contra alergenos, agentes
infecciosos y antígenos autólogos.

Resumen de los principios generales de los inmunoensayos

Clases de inmunoensayos
Una breve clasificación y una lista de características de varios inmunoensayos aparecen en la Tabla 44-1 . Los
inmunoensayos de precipitación proporcionan el método más simple para que los antígenos y los anticuerpos
reaccionen entre sí sin implicar la detección de ninguna etiqueta. El complejo Ag-Ab resultante en gel o fase líquida
puede observarse cualitativamente como un precipitante a simple vista y cuantitativamente con un detector. 

CUADRO 44-1
Clasificación de varios inmunoensayos y sus características
Etiquetas (Grupos de Separación Detección de señal Sensibilidad
reporteros) B / F *

Inmunoensayos de No requerido No Ojo desnudo, turbidez, ~ 10 µg /

precipitación requerido nefrometría. mL 1

Inmunoensayos de Células sanguíneas, partículas No Ojo desnudo, analizador de ~ 5 ng / mL2

partículas artificiales (gelatina, requerido patrones, espectrofotometría,
partículas, látex, etc.) conteo de partículas

Radioinmunoensayos Radioisótopos ( 125 I, 3 H) Necesario Recuento de fotones ~ 5 pg / mL

Inmunoensayos de Enzimas Necesario Espectrofotometría, conteo de ~ 5 pg / mL 

enzimas fotones por fluorometría (CL- ~ 0.1 pg /
EIA) mL 3

Inmunoensayos de Fluoróforos Necesario Recuento de fotones ~ 5 pg / mL4

fluorescencia

Inmunoensayos de Compuestos Necesario Recuento de fotones ~ 5 pg / mL4

quimioluminiscencia quimioluminiscentes
 Ver a tamaño completo
B / F,  Encuadernación libre.
Datos de Ritchie R: inmunoanálisis automatizado, Parte I y Parte II  , Nueva York, 1978, Marcel Dekker; Haux P, Dybois H,
McGovern M, et al: evaluación del análisis de ferritina TIna-quant en el sistema Boehringer Mannheim / Hitachi 704, Clin
Chem34: 1174, 1988. Resumen; Isomura M, Ueno M, Shimada K, et al: inmunoensayo enzimático quimioluminiscente
altamente sensible con fase sólida de ferrita recubierta de gelatina, Clin Chem 40: 1830, 1994; y Sgoutas DS, Barton EG,
Hammarstrom M, et al.: Se evaluaron y compararon críticamente cuatro ensayos de tirotropina sensible, Clin
Chem  25:1785–1789, 1989.
* Paso de lavado para la separación de etiquetas encuadernadas en inmunocomplejo de etiquetas libres. No se
requieren ensayos homogéneos incluidos para la separación B / F.
El inmunoensayo de aglutinación de partículas ( Kasahara, 1992b ) utiliza partículas inertes como etiquetas, en oposición
a la precipitación directa de los complejos Ag-Ab. Los antígenos o anticuerpos unidos a partículas como eritrocitos, látex
o sol metálico reaccionan con el analito en la muestra. Como resultado de esta reacción inmune, las partículas grandes
muestran patrones de aglutinación significativos que pueden verse a simple vista.Yalow y Berson (1959) informó sobre el
desarrollo de un radioinmunoensayo (RIA) utilizando radioisótopos como etiquetas. Este avance permitió la detección
cuantitativa de un nivel de trazas de analitos y contribuyó al avance de la investigación básica y la medicina clínica. La
insulina, por ejemplo, se cuantificó por RIA, que posteriormente reemplazó el bioensayo de insulina. RIA puede
formatearse en un procedimiento en fase sólida para facilitar la separación de etiquetas encuadernadas y libres. Desde
el desarrollo de los RIA, la búsqueda de etiquetas alternativas a los radioisótopos peligrosos se ha intensificado, con el
objetivo de desarrollar inmunoensayos no isotópicos que utilizan enzimas, etiquetas fluorescentes y otros grupos
informadores.

https://ezproxy.unisimon.edu.co:2169/#!/content/book/3-s2.0-B9780323295680000449?scrollTo=%23hl0001439

• Inmunoanálisis de partículas: consiste en unir varios anticuerpos a una partícula que es capaz de unir muchas
moléculas de antígeno simultáneamente. Es un método que fundamentalmente añade rapidez a la detección de los
antígenos que se pretende estudiar.

https://www.ecured.cu/Inmunoan%C3%A1lisis

INTRODUCCIÓN

Las técnicas inmunoquímicas y los inmunoanálisis utilizan las reacciones inmunológicas antígeno-anticuerpo. Estas
reacciones pueden detectarse muchas veces por los efectos que producen, como la precipitación o la agluti-nación. En
los inmunoanálisis con reactivos marcados se emplean átomos o moléculas llamados indicadores o trazadores que,
unidos al reactivo antígeno o anticuerpo, muestran que ha tenido lugar la reacción antígeno-anticuerpo. Los principales
marcajes son los isótopos radiactivos, las enzimas, los com-puestos fluorescentes y los compuestos luminiscentes. En
este capítulo se pre-sentan las técnicas inmunoquímicas y los inmunoanálisis y sus aplicaciones en los laboratorios
clínicos.

ANTÍGENOS Y ANTICUERPOS. REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO

Los antígenos son sustancias, generalmente de gran tamaño, capaces de estimu-lar el sistema inmunitario de un animal
y originar una respuesta dirigida espe-cíficamente contra ellas. Se denomina epítopo al determinante antigénico, esto
es, al lugar del antígeno que reconoce y al que se une el anticuerpo. Está for-mado por unos pocos aminoácidos que no
tienen que ser de estructura con-tinua. Se denominan haptenos a las moléculas de bajo peso molecular que, sin ser
inmunógenas de por sí, cuando se unen a una macromolécula portadora inducen la generación de anticuerpos contra
ellas.Los anticuerpos pertenecen a un grupo de proteínas llamadas inmunoglobu-linas, que son glucoproteínas
producidas por los linfocitos B y su progenie las células plasmáticas, que se combinan específicamente con los antígenos.
Cuan-do se ponen en contacto un antígeno y un anticuerpo específico contra él, reac-cionan entre sí para dar un
complejo antígeno-anticuerpo. La unión entre el antígeno y el anticuerpo es un proceso reversible que tiene una
constante de equilibrio característica.Para describir la fuerza o energía de la interacción entre un anticuerpo y un
antígeno se emplean dos términos. La afinidad es la magnitud termodinámica que señala la energía de interacción de un
lugar de combinación del anticuerpo y su epítopo correspondiente del antígeno. Por su parte, la avidez es la fuerza
global de la unión entre el antígeno y el anticuerpo, y comprende la suma de las afinidades de unión de todos los lugares
individuales de combinación del anticuerpo. Las inmunoglobulinas G (IgG) tienen dos lugares de unión en cada molécula
de anticuerpo, mientras que las IgM tienen diez lugares de unión en cada molécula. La afinidad es una propiedad del
antígeno, mientras que la avidez lo es del anticuerpo.La reacción de unión entre un antígeno de peso molecular elevado,
como una proteína, y un anticuerpo contra él se produce en dos fases. La primera

TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN

Cuando el antígeno está unido a un corpúsculo, como las bacterias, las células sanguíneas o las partículas inertes, la
reacción antígeno-anticuerpo produce directamente aglutinación. El título de una prueba de aglutinación es la dilu-ción
máxima del suero que produce la reacción, de forma que, cuanto más elevado sea el título, mayor será la concentración
de la sustancia que se deter-mina en el suero. Las técnicas de aglutinación que se emplean en los laborato-rios clínicos
son la aglutinación directa, la aglutinación indirecta, las pruebas de antiglobulina y las técnicas de inhibición de la
aglutinación. Aunque estas técnicas ya casi no se utilizan en los laboratorios clínicos, salvo en los bancos de sangre, se
describen aquí con fines didácticos.

REACCIONES DE AGLUTINACIÓN DIRECTA

Las reacciones de aglutinación directa son aquellas en las que el antígeno se halla sobre la superficie de corpúsculos
naturales, como los microorganismos y los eritrocitos. Este tipo de pruebas se utiliza para detectar anticuerpos en suero
contra los antígenos de las membranas de las células y pueden realizar-se en tubo o en placa; en las pruebas en placa se
mezcla una suspensión de las células, se hace oscilar la placa durante unos minutos y se observa la aparición de
aglutinación.

Las pruebas de aglutinación directa se han usado para diagnosticar infec-ciones bacterianas. Se detectan anticuerpos
frente a Brucella, Salmonella (fiebre tifoidea) y Proteus. Los anticuerpos bacterianos pueden generar diferentes for-mas
de aglutinación. Los anticuerpos frente a los antígenos del cuerpo bacte-riano forman un entrecruzamiento de los
microorganismos, que resulta en un precipitado granular compacto que se forma lentamente, mientras que los
anticuerpos frente a los flagelos producen un entrecruzamiento con ellos, que origina un aglutinado ligero y rápido.Las
reacciones de aglutinación directa se emplean también en los bancos de sangre para determinar los grupos sanguíneos.
Existen diferentes méto-dos para detectar los anticuerpos que aglutinan los eritrocitos (v. el capítu-lo 24).

REACCIONES DE AGLUTINACIÓN INDIRECTA

Las reacciones de aglutinación indirecta utilizan células tratadas o partículas inertes recubiertas de antígeno que actúan
como portadores pasivos, como los eritrocitos humanos, los de oveja o los de pavo, y las partículas inertes de látex o
bentonita. Los antígenos se adsorben o acoplan de forma covalente a la superficie. Los polisacáridos y algunos antígenos
proteínicos, como la albúmi-na y los derivados de proteína purificada (PPD), se adsorben con facilidad sobre la superficie
de las partículas, mientras que otros antígenos requieren para poder adsorberse el tratamiento previo de las partículas.
Las células se tratan incubándolas con ácido tánico o cloruro crómico, que modifican la superficie celular.Las pruebas de
aglutinación indirecta se realizan generalmente en placa. Este tipo de aglutinación se ha utilizado en los laboratorios
clínicos para deter-minar el factor reumatoide y las pruebas reagínicas de serología luética (VDRL) para diagnosticar la
sífilis.

PRUEBAS DE ANTIGLOBULINA

Las pruebas de antiglobulina o pruebas de Coombs (v. el capítulo 24) son reac-ciones de aglutinación que permiten
detectar anticuerpos incompletos de la clase IgG, incapaces de producir aglutinación, ni siquiera después de unirse a
superficies particuladas. En las pruebas de antiglobulina, la aglutinación se consigue añadiendo un suero
contrainmunoglobulina (reactivo de Coombs), que produce la formación de puentes entre las partículas que llevan el
antíge-no y el anticuerpo. Hay varios tipos de reactivo de Coombs, que se obtienen inyectando suero humano o alguna
de sus fracciones purificadas en animales. La inyección del suero humano completo produce un suero de Coombs, deno-
minado de amplio espectro, mientras que la inyección de fracciones purifica-das produce sueros de Coombs de
especificidad limitada (anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti-C3, anti-C3b, etc.).

INHIBICIÓN DE LA AGLUTINACIÓN

Las pruebas de inhibición de la aglutinación son adaptaciones de las reaccio-nes de aglutinación que permiten detectar y
cuantificar antígenos solubles. Puede inhibirse la aglutinación de eritrocitos (hemaglutinación) o la de partí-culas de
látex. Cuando se incuba el anticuerpo con la disolución que contiene el antígeno, este se liga a los lugares de unión del
anticuerpo. A continuación, se añaden las partículas recubiertas de antígeno. Si no hay aglutinación, será porque los
lugares de combinación del anticuerpo están saturados y no será posible unir los antígenos particulados y la aglutinación