GUIAS PRACTICA DE LABORATORIO

MICROBIOLOGIA BASICA
FACULTAD DE MEDICINA
2020-2

INTRODUCCION

La microbiología es una disciplina que estudia la biología de los microrganismos patógenos

como las bacterias, los virus, los parásitos y los hongos, los cuales son causantes de
enfermedades infecciosas.
Las prácticas de laboratorio de microbiología básica tienen como propósito facilitar el
aprendizaje de los principales métodos de diagnóstico e identificación de agentes
etiológicos de las enfermedades infecciosas humanas, medios de cultivos, coloraciones,
pruebas inmunológicas y de microscopia y relacionarlos con los conocimientos adquiridos
en el curso. Con el desarrollo de las prácticas el estudiante conocerá y empleara los
principales métodos de toma de muestra utilizados para el diagnóstico de enfermedades
infecciosas, así también los métodos directos e indirectos más comunes en el laboratorio
de microbiología para la identificación de microorganismos infecciosos, inmunológicos, de
cultivo y microscópicos.
Los avances tecnológicos con un aumento de la automatización, el desarrollo de la
biología molecular la química de los ácidos nucleicos, los avances de la inmunología y los
conocimientos de la patogenicidad microbiana, hacen muy necesaria la revisión continua
de los manuales de microbiología, en ellos se abordan temas cuyo conocimiento es básico
para el buen funcionamiento del laboratorio de microbiología, como son su organización,
el control de calidad, los medios de cultivos y el procesamiento primario de las muestras
clínicas: extracción, transporte y es de vital importancia que esta infraestructura sea
correcta para la realización de un buen diagnóstico microbiológico.

INFORMACION GENERAL
Las prácticas serán evaluadas de acuerdo a los siguientes aspectos: Seguir las normas de
bioseguridad, comportamiento en el laboratorio, informe de laboratorio, y evaluaciones.
LAS GUIAS SERA EVALUADAS POR ESCRITO EN LA SEMANA CORRESPONDIENTE.
RECUERDE: En el informe explicar lo sucedido en cada práctica, analizar los resultados
obtenidos y sacar las conclusiones correspondientes de acuerdo con los resultados.
Materiales y métodos. Nombres de los estudiantes y el grupo de trabajo asignado.
Responder TODAS las preguntas que se hicieron en la guía (ya sean de consulta o de
análisis
 PRÁCTICA DE LABORATORIO No.1
FACULTAD DE MEDICINA
MICROBIOLOGIA BASICA

BIOSEGURIDAD, RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO

Competencias para el desarrollo del ser:

Asume con respeto los conocimientos adquiridos, se responsabiliza por su propia

producción académica.

Competencias para el desarrollo del conocer:

● Conoce las normas de bioseguridad del laboratorio de microbiología.

● Aplicar las reglas básicas de higiene y seguridad para los laboratorios del área
microbiológica
● Analizar la importancia que tiene cada una de estas reglas, tanto en las actividades
académicas de aprendizaje, como en el ejercicio profesional
● Conocer que es un laboratorio de microbiología clínica, como actuar, trabajar y utilizar
los implementos suministrados
● Conocer e identificar las partes de un Microscopio compuesto y sus funciones.
● Adquirir habilidad en la utilización eficiente del Microscopio.

Competencias para el desarrollo del hacer:

● Realiza un cuadro comparativo de los niveles de desinfección.

● Realiza un diagrama del lavado de manos y la importancia que tiene dentro de las
normas de bioseguridad.
● Aprende a enfocar correctamente las láminas realizadas y suministradas durante la
práctica de microbiología

BIOSEGURIDAD

Fundamento teórico

Un laboratorio de Microbiología es un lugar convenientemente habilitado donde se

pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a
cabo con una buena técnica aséptica, y por tanto se requiere un ambiente limpio y
ordenado y trabajar siempre en condiciones de esterilidad (en campanas de esterilidad
biológica o en la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas). Aunque los
microorganismos que se manipulen no sean considerados patógenos, todos los cultivos de
todos los microorganismos deben ser manejados con precaución por su potencial
patogenicidad.

REQUISITOS BÁSICOS:

1. Restringir la presencia de los microorganismos en estudio, para evitar el riesgo de

contaminarse uno mismo o a un compañero.

2. Para evitar que los microorganismos ambientales (presentes en piel, pelo, aire, ropa,
etc.) contaminen nuestras muestras, es necesario respetar una serie de

NORMAS DE SEGURIDAD:

1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio desechable, guantes, gorro y tapabocas

2. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y jabón.

3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar cada
práctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los desinfectantes más
habituales para esto son el cloruro de amonio y el alcohol (etanol 96°).

4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben evitar

los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que pueden crear corrientes que
originen contaminaciones o producir accidentes.

5. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se manipulan
microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc.

6. El descarte del material contaminado se hará en los recipientes adecuados.

Guardián para descartar material corto punzante

[Link]

7. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del laboratorio.

8. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos, etc.)

se comunicará inmediatamente al docente o al auxiliar.

Consulta previa a la práctica:

● ¿Cómo se define BIOSEGURIDAD?
● ¿Qué es una cámara de bioseguridad?
● ¿Cómo se clasifican los laboratorios de acuerdo al riesgo que manejan?
● ¿Qué es esterilización, y que técnicas hay para esterilizar?
● ¿Qué es desinfección y que métodos desinfectantes hay?
● ¿Cuáles son los momentos clave para el lavado de manos y la higiene

Procedimiento

Materiales

Guantes no estériles, bata blanca, tapabocas, gafas, gorro de cirugía.

Desarrollo del procedimiento

Siga instrucciones del docente para el manejo de pipetas, material corto punzante y
contaminado

Instalaciones:
Dar un recorrido por el laboratorio. Se dará a conocer los diferentes elementos que se
utilizan en el laboratorio de microbiología y el manejo correcto de algunos equipos.

Bioseguridad:
La prevención es la premisa principal para el desarrollo de las actividades en el laboratorio
clínico, iniciando con el reconocimiento de las fuentes de riesgo tales como los eléctricos,
la revisión de las etiquetas símbolos que identifican el riesgo de las diferentes sustancias y
reactivos en base a sus componentes; de igual manera se deberá manipular toda muestra
como potencialmente infecciosa y la segregación de los residuos se hará conforme a las
normas.
Los elementos corto punzantes serán descartados de forma exclusiva en el recipiente
destinado para tal fin sin depositar otros elementos no indicados y sin volverlos a tapar.
Los estudiantes reconocen el espacio físico donde se llevan a cabo las prácticas y los
diferentes elementos disponibles para prevenir la contaminación y las lesiones como los
elementos de protección personal (EPP) e intervenir los posibles incidentes o accidentes
que afecten la seguridad de los estudiantes especialmente aquellas relacionadas con el
riesgo biológico.

Reconocer el entorno para identificar los elementos que nos permiten atender incidentes
o accidentes como el extintor y la forma de uso, las duchas corporales y de ojo y el
significado de los símbolos.
Aplicar conductas y comportamientos que disminuyen el riesgo tales como:

• Las áreas de trabajo deben mantenerse ordenadas, limpias y libre de materiales no

relacionados con el trabajo.

• No está permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o

aplicarse cremas en las áreas de trabajo.

• No guardar alimentos o bebidas en refrigeradores destinados al almacenamiento de

muestras o reactivos.

• No pipetear con la boca.

• Si usa lentes de contacto extremar la protección de la mucosa ocular. El cabello largo

debe estar recogido.

• Las propiedades personales deben ser guardadas y aseguradas en casilleros provistos

fuera del área técnica de trabajo.

• Está prohibido el uso del celular durante el periodo de las prácticas.

• Al momento de salir de las áreas técnicas retirar los EPP y lavar manos con abundante
agua y jabón, práctica fundamental en el laboratorio y puede ser realizada de dos formas,
lavado de manos con agua y jabón o uso de soluciones de alcohol. El uso de esta última
opción es efectivo y rápido, pero requiere que las manos no se encuentren visiblemente
sucias.

Bibliografía

● [Link]
[Link]
● [Link]
vencion/promocion_prevencion/riesgo_biol%C3%B3gico-
bioseguridad/b_bioseguridad/BIOSEGURIDAD.p
Microscopia

[Link]

Fundamento teórico:

El Microscopio es un instrumento hecho a base de lentes que ha permitido a los hombres

poder llevar a cabo estudios en aquellos individuos y células que no pueden verse a simple
vista. La microscopía data del siglo XVII, aunque antes de esa fecha se sospechaba de la
existencia de criaturas que no podían ser observadas a simple vista. Uno de los aspectos
relevantes en el uso del Microscopio, se debe al uso del objetivo de inmersión, el cual
utiliza un medio líquido que rellena el espacio entre el objeto y el objetivo y es el aceite de
inmersión.

El microscopio es un instrumento fundamental en la práctica de los laboratorios de

microbiología, con él, se realiza diagnóstico directo de muchas enfermedades producidas
por la infección de microorganismos. Gracias a él, las ciencias biológicas en general y entre
ellas la microbiología ha realizado muchos avances en la investigación de las células
procariotas y eucariotas
En este curso práctico de microbiología, el microscopio va a ser nuestra principal
herramienta, por lo tanto debe tratarlo con cuidado y para eso debe conocerlo.

Revíselo bien antes de encenderlo y cuando lo vaya a entregar debe quedar limpio y
completamente apagado.
Consulta previa
● Investigue la función de cada una de las partes del microscopio
● ¿Qué es un montaje húmedo?
● ¿Qué objetivos se utilizan para observar montajes húmedos?
● ¿Cuándo se utiliza el aceite de inmersión?
● ¿Cuántas veces aumenta el tamaño de un objeto observado en 100x?
● Explique las razones porque NO deben tocarse los lentes de un microscopio con
los dedos.
● Describa las partes mecánicas y los componentes ópticos del microscopio

Procedimiento

PARTE A:
● Para transportar el Microscopio de un lugar a otro, utilice ambas manos,
sujetándolo por el brazo del microscopio con una mano y sosteniéndole la base
con la palma de la otra mano, llevándolo siempre en posición vertical.
● Revise su microscopio y notifique al docente cualquier irregularidad.
● El sistema óptico y la iluminación nunca deberá ser tocado con los dedos
● Observe los objetivos. Asegúrese que el objetivo de menor aumento este en
posición para observar sobre la platina. Si no está haga girar el revólver, elija
primero el aumento de 10X. Tenga en cuenta que los microscopios traen también
un objetivo de 4X, el cual no utilizarnos en estas prácticas.
● Observe el sistema del carro. Muévalo
● Ubique los tornillos macrométrico y micrométrico
● Localice el diafragma. Muévalo
● Conecte la fuente de luz, observe a través del ocular, hasta observar el círculo de
luz sin sombra (abra y cierre el diafragma si es necesario). Observe por el ocular.
Ilumine el campo operando el sistema de iluminación.
● Conecte el microscopio al tomacorriente y una vez encendido se evitará cualquier
movimiento brusco.
● Coloque el portaobjeto sobe la platina del microscopio y enfoque con el objetivo
de 10X, campo iluminado.
● Deslice el tornillo macrometrico, observando lateralmente hasta que el objetivo
quede cerca del portaobjeto.
● Observe a través de los oculares hasta enfocar la preparación, afine la imagen
moviendo lentamente el tornillo micrométrico. Si desea mayor aumento girar el
revolver hasta el objetivo adecuado.
● Si utiliza el objetivo de 100X es necesario colocar sobre la preparación una gota de
aceite de inmersión. Observe y ajuste cuidadosamente usando el micrométrico.
● Una vez que ha hecho todas estas observaciones proceda a limpiar el microscopio
utilizando papel de arroz (lentes) y bayeta (sistema mecánico).
● Después de su uso disminuya la luz hasta cero y apague el microscopio.

PARTE B:
 Preparación # 1: A una lámina ya preparada y coloreada, agregue una gota de aceite de
inmersión
a. Ponga la preparación sobre la platina y súbala con el tornillo macrométrico, enfoque
con el objetivo de 10X y luego cambie al lente de inmersión, 100X.
b. Afine la imagen utilizando el tornillo micrométrico ajuste la intensidad de luz, abriendo
y cerrando el diafragma, hasta lograr una visión clara.

Preparación # 2: Lamina en fresco, con laminilla

a. Ponga la preparación sobre la platina y súbala con el tornillo macrométrico, enfoque
con el objetivo de 10X y luego cambie al lente de inmersión, 40X.
b. Afine la imagen utilizando el tornillo micrométrico ajuste la intensidad de luz, abriendo
y cerrando el diafragma, hasta lograr una visión clara.

EN ESTA PRACTICA NO SE REALIZA INFORME DE LABORATORIO

* Al terminar retire la preparación.

* Disminuya la luz hasta cero y apague el microscopio.
* Limpie el ocular y los objetivos con papel limpia lentes.
* Gire el revólver y deje el microscopio en objetivo de 4X. Descienda la platina.
* Desconecte el microscopio. (No le coloque el forro)
* Déjelo en la mesa de trabajo

Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad

a. Procure dejar el Microscopio en el mismo sitio.
b. Economice la vida de la lámpara, asegurándose de ejecutar la iluminación correcta.
c. No permita que ácidos, líquidos o aceites ensucien el microscopio.
d. Nunca utilice lentes de mayor aumento, sin cubrir la preparación con un cubre objeto.
e. Nunca deje el objetivo de inmersión lleno de aceite, use papel limpia lentes, con
movimientos suaves y circulares para su limpieza, especialmente al final de su uso.

BIBLIOGRAFIA

Cortes José A. El microscopio óptico compuesto. 2001 Última modificación: 2005.

Disponible en
[Link]
anual de microscopia, AUXILAB. Materiales para laboratorio
[Link]
%20web/manual%20de%[Link]
[Link]

PRÁCTICA DE LABORATORIO No.2

 FACULTAD DE MEDICINA
MICROBIOLOGIA BASICA

MEDIOS DE CULTIVO Y MORFOLOGIA BACTERIANA

Competencias para el desarrollo del ser:

Asume con respeto los conocimientos adquiridos, se responsabiliza por su propia

producción académica.

Competencias para el desarrollo del conocer:

● Conoce las normas de bioseguridad del laboratorio de microbiología, describe los

diferentes niveles de desinfección, métodos físicos y químicos, y las características y
utilidad de la morfología colonial.
● Conocer por medio de demostración las técnicas de siembra para aislamiento
bacteriano.
● Reconocer los diferentes medios de cultivos existentes para el crecimiento de los
microorganismos, teniendo los conceptos básicos de nutrición y preparación de los
mismos

Competencias para el desarrollo del hacer:

● Realiza un cuadro comparativo de los niveles de desinfección.

● Realiza un cuadro comparativo de las muestras bacteriológicas.
● Realiza el sembrado de las muestras y repique del cultivo bacteriano.

SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO

Fundamento Teórico

Con el fin de familiarizar al estudiante con la morfología de las bacterias bajo el objetivo
de 100X del microscopio óptico, durante esta práctica los estudiantes visualizaran
diferentes tipos de preparados de laboratorio tanto de muestras biológicas como
preparaciones a partir de cultivos puros. Adicionalmente se hará un reconocimiento de los
tipos de medios de cultivos y técnicas de siembra.

Obtener y observar el crecimiento bacteriano en el laboratorio de Microbiología es muy

importante ya que permite continuar con pruebas que conllevan a la identificación del
microorganismo.
De acuerdo a las necesidades particulares de las bacterias y de los fines perseguidos para
su aislamiento se utilizan distintos medios de cultivo. Estos deben proporcionarles a los
microorganismos los nutrientes necesarios y las condiciones óptimas para el crecimiento
bacteriano

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme,
la variedad de medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de
cultivo se comercializan en forma de polvo, o granulados, que es preciso rehidratar .y son
preparados por personal del laboratorio, y que luego de ello deben ser debidamente
esterilizados. En el mercado se pueden encontrar medios listos para fundir, o medios
servidos en cajas de Petri o en tubos.

Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:

1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacárido que se obtiene de ciertas

algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.

2. Azúcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los más empleados
son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.

3. Extractos. Son preparados de ciertos órganos o tejidos animales o vegetales obtenidos

con agua y calor.

4. Peptonas. Son proteínas hidrolizadas, se obtienen por digestión química o enzimática

de proteínas animales o vegetales.

5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo

son añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos microorganismos
patógenos.

6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se añaden al medio para mantener el pH

dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos bisódicos o bipotásicos.
7. Indicadores de pH. Son indicadores ácido-base que se añaden para detectar cambios de
pH en el medio.

8. Agentes reductores. Sustancias que se añaden al medio para crear las condiciones que
permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. Ej.: cisteína y
tioglicolato.

Tipos de medios de cultivo.

Por su CONSISTENCIA:

a) Sólidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus componentes,
normalmente agar. Se preparan en placas de Petri

b) Líquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos

c) Semisólidos. Son aquellos que se usan generalmente para el transporte de bacterias

Por su COMPOSICIÓN:

a) Medios Nutritivos. Permiten el desarrollo de una gran variedad de

microorganismos.
b) Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
c) Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna propiedad
que un determinado tipo de microorganismos posee

Agar sangre Agar Chocolate Agar Mac Conkey

Consulta previa a la práctica:

● ¿Qué medios de cultivo se usan con frecuencia para aislar bacterias Gram negativas?
● ¿Cómo se prepara el agar sangre y para que se utiliza?
● ¿Cómo se prepara el agar chocolate y cuáles son sus usos?
● ¿Qué son los factores V y X?

Materiales:
● Microscopio y aceite de inmersión
● Medios de cultivo estériles: Agar sangre, agar McConkey,
● Asas bacteriológicas
● Colección de bacterias patógenas

Procedimiento:
Los estudiantes se reunirán en grupo y definirán:

1. La utilidad de los medios de cultivos suministrados.

2. Determinaran la clasificación de los medios de cultivo de acuerdo a:
- Su estado físico.
- Según su Naturaleza o composición
- Según su propósito
3. Observaran los cultivos de los microorganismos suministrados y anotar
- Tamaño
- Forma
- Color
- Bordes
- Superficies
- Aspecto
- Producción de pigmento (si lo tiene)
- Consistencia
- Elevación

Toma de muestras para examen microbiológico

Consideraciones generales
● La toma de muestra debe realizarse antes de iniciar el tratamiento con
antimicrobianos, ya que, este interfiere en la observación directa del germen, así
como en el posterior aislamiento del mismo en los medios de cultivo, Si esta
norma no se pudiera cumplir por necesidad de instaurar un tratamiento urgente,
es necesario informar al laboratorio de los antibióticos que está recibiendo el
 paciente, para lo cual basta con diligenciar debidamente el volante de reseña
clínica.
● La toma de muestras debe realizarse en los lugares donde sea más probable
encontrar el microorganismo con la menor contaminación externa posible. Para
reducir ésta, se deben seguir las siguientes normas:
● Descontaminar adecuadamente la piel antes de la extracción de un líquido estéril
corporal (líquido cefalorraquídeo, sinovial o pleural), utilizando alcohol (70%).
● Utilizar técnicas que eviten áreas con microbiota bacteriana normal. Por ejemplo,
deberá realizarse una punción percutánea transtraqueal, en lugar de recoger un
esputo expectorado activamente, si se sospecha una infección de vías inferiores
ya que interesa obviar la microbiota bacteriana normal de las vías respiratorias
superiores.
● Utilizar medios de cultivo específicos para aislar el patógeno sospechoso. Por
ejemplo, en un frotis faríngeo se buscará principalmente el Estreptococo del grupo
"A" y para ello, se realizará la siembra en medios apropiados para el aislamiento
de dicho germen,
● Recoger la muestra en el estadio de la enfermedad más apropiado. Por ejemplo,
el número de Patógenas entéricos es mayor durante la fase aguda o diarreica de
la enfermedad.
● Las muestras deben recogerse en cantidad suficiente para permitir un examen
completo; deben colocarse en recipientes estériles y remitirse la más pronto
posible al laboratorio.
● Es un requisito indispensable que el laboratorio reciba la suficiente información
clínica para guiar al microbiólogo en la selección de medios o técnicas adecuadas.
● El personal de laboratorio debe rechazar las muestras que no se han recogido de
forma adecuada y los especialistas clínicos deben apoyar esta actitud.
 Siembra de microorganismos

En términos microbiológicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el cual se lleva

una porción de una población de microorganismos (inóculo) de un cultivo bacteriano a un
medio nutritivo para su crecimiento. PARA UNA CORRECTA REALIZACIÓN DE LA SIEMBRA
SON NECESARIAS CIERTAS CONDICIONES:

1) Que se lleve a cabo con instrumentos estériles sobre medios de cultivo estériles.
Para estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos aquellos
microorganismos que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de
trabajo. Esto se consigue con la ESTERILIZACION, proceso que consiste en
conseguir que todos los microorganismos presentes mueran desde el punto de
vista microbiológico.

2) Realice un frotis de garganta

3) Siembre por agotamiento como muestra la siguiente figura en los agares sangre y
chocolate
4) Lleve a incubar a 37oC por 24 horas
Pasos para la siembra por estrías
METODOS DE INCUBACION
➢ Temperatura:

* Bacterias patógenas: 37°C; excepcionalmente otras temperaturas.

➢ . Atmósfera de incubación:

* Aerobiosis: trasladar las placas a la estufa e incubarlas de forma invertida (tapa abajo;
medio inoculado arriba). Los tubos ser incuban siempre en posición vertical.

* Microaerofilia:

** Método de la vela: en la jarra se introduce una vela encendida que va consumiendo el

oxígeno acumulado tras cerrar la jarra.

** Incubadora de CO2: permite regular la cantidad de CO2 en la atmósfera de incubación.

* Anaerobiosis (Método de GasPak): en una jarra de anaerobiosis junto a las placas o

tubos, se introduce un preparado comercial que produce H2, el cual se combina con el O2
y produce agua.

Cuestionario:
● ¿Haga un mapa mental de las diferentes formas de colonias que puede encontrar
en los medios de cultivo solidos?
● ¿Qué es hemolisis, cuantas clases hay y como se observan?
● ¿Cómo se identifica una bacteria?
● ¿Qué es la prueba de la catalasa y cuál es su principio?
 Colonias de Estafilococo aureus :

● Agar utilizado
● Describe las características macroscópicas de las colonias de este germen.
● Que enfermedades infecciosas de la piel y tejidos blandos produce:
● Como médico como evitarías que a tu paciente se le infecten sus heridas por este
microorganismo:

Colonas de Escherichia coli:

● Agar utilizado
● Describe las características macroscópicas de este microorganismo, como se
reportaría en la coloración de Gram:
● Cuál es el hábitat natural de este microorganismo:
● Cuál es la principal infección producida por este microorganismo:
● Como se evidencia el crecimiento de microorganismos en medios líquidos y
sólidos.
Referencias consultadas:

1. Koneman. Diagnóstico Microbiológico. Editorial Médica Panamericana. 6

ediciones. 2008
2. Casado González Mª Concepción, Torrico Cabezas Gertrudis, Anguita María
Medina. Medios de Cultivo en un laboratorio de microbiología. 2012

MORFOLOGIA MICROSCOPICA: COLORACIONES

Competencias para el desarrollo del ser:

Asume con respeto los conocimientos adquiridos, se responsabiliza por su propia

producción académica

Competencias para el desarrollo del conocer:

Clasifica las bacterias en Gram positivas y Gram negativas

Describe La elaboración del frotis de la secreción
Describir los pasos para colorear bacterias

Competencias para el desarrollo del hacer:

Realiza Los dibujos correspondientes a las estructuras vistas

Realiza un cuadro comparativo de las diferencias de la pared celular bacteriana

COLORACION DE GRAM

Fundamento teórico

La coloración de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnóstico

microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884 y hoy en día, sigue
siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo
y eficaz que resulta. En microbiología clínica resulta de gran utilidad, ya que a partir de
muestras clínicas directas provenientes de sitios estériles se puede saber de manera
rápida las características de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales
microorganismos causantes de una infección. A la mayor parte de las muestras sometidas
a examen microbiológico cuando se sospecha de una infección bacteriana se les debe
realizar coloración de Gram.
Esta coloración, permite la diferenciación de los microorganismos en dos grupos: Gram
positivos que retienen el primer colorante usado (cristal violeta) y Gram negativos, que se
colorean con el colorante de contraste (safranina o fuscina). Estas diferencias están
basadas en la estructura y composición química de la pared celular
La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de
peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram
positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido
de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas
explica y determina las características tintoriales. Los reactivos empleados en la tinción de
Gram son el cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol acetona
(decolorante) y fucsina o safranina (colorantes de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose al peptidoglucano de la pared
celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante.
● Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de
su pared celular, predominantemente proteica que se deshidrata con la aplicación
del alcohol-acetona y no permite que el complejo cristal violeta-lugol, salga de la
bacteria. y aun después de agregar el alcohol acetona conserva el colorante
básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al microscopio.
● Las bacterias Gram negativas tienen una pared celular con una capa lipídica (que
aumentala permeabilidad celular), que se disuelve con el albohol acetona
(decolorante), permitiendo la salida del complejo cristal violeta-yodo. Para poder
observar entonces estos microorganismos se colorean luego con la safranina
(colorante de contraste), que se agrega al final del procedimiento, razón por la
cual estas bacterias se observan de color rosado en el microscopio.
Nota: Para que esta reacción ocurra es necesario que las bacterias que se van a colorear
tengan su pared íntegra, para esto se deben utilizar cultivos jóvenes.

Los colorantes se utilizan en microbiología para:

● Teñir los microorganismos y sus estructuras (cápsulas, flagelos, esporas, gránulos)

● Para diferenciarlos en grupos según la forma de tomar dichos colorantes.

● Para adicionarlos a los medios de cultivos con el fin de inhibir el crecimiento de un

grupo determinado de gérmenes.

Los colorantes bacterianos son anilinas que contienen radicales que imparten su
propiedad cromógena al colorante y grupos auxócromos que permiten que el colorante se
una a las fibras o tejidos. Si la porción coloreada (cromógeno) actúa como base, se les
denomina colorantes básicos (catiónicos) y sí el cromógeno actúa como ácido se llaman
colorantes ácidos (aniónicos).

Los núcleos de las células se tiñen mejor con colorantes básicos y el citoplasma con
colorantes ácidos. Como la célula bacteriana tiene su material nuclear distribuido por toda
la célula se colorea bien con los colorantes básicos.

Las bacterias son células transparentes y por su tamaño (0.1 a 5 µm) se pueden observar
en el microscopio en aumento de 40 X o más. Por su constitución tienen una carga
negativa y al observarlas en las preparaciones en fresco se ven en continuo movimiento ya
que se rechazan unas a otras (movimiento browniano)

Algunas bacterias disponen además de flagelos polares o peritricos, lo que les permite un
desplazamiento que se puede apreciar en el campo microscópico cuando se observan en
fresco.

Consulta previa a la práctica:

● ¿Cómo es la estructura de la pared de una bacteria Gram positiva?

● ¿Cómo es la estructura de la pared de una bacteria Gram negativa?
● ¿Por qué es importante la coloración de Gram?
● ¿Cuál es el papel que juega cada colorante en la coloración de Gram?
Procedimiento

Preparación del frotis:

1. Calentar el asa de inoculación hasta que esté al rojo.

2. Tomar la porción de la muestra que se va a examinar por medio de una asa o

escobillón

3. Colocar la muestra sobre un portaobjetos limpio y sin grasa, debidamente marcado

4. Trazar con la muestra una espiral del centro a la periferia

Si la muestra no es líquida, colocar una pequeña gota de solución salina sobre el

portaobjetos antes de realizar el frotis y disolver en ella la muestra
5. Deje secar. Fije la muestra pasándola 3 veces en la llama del mechero (flamearla)

6. Calentar nuevamente el asa para desinfectarla.

Preparación en fresco:

● Desinfecte el asa redonda en el mechero y enfríela

● Si el cultivo es liquido coloque con el asa una pequeña gota sobre una lámina
portaobjetos
● Si el cultivo es sólido coloque en la lámina portaobjetos una pequeña gota de solución
salina estéril.
● Tome con el asa una pequeña porción de la colonia y disuélvala en la solución salina
● Desinfecte nuevamente el asa
● En cualquiera de los dos casos cubra la preparación con una laminilla cubreobjetos
● Enfóquela en el microscopio con objetivo de 40X
● Observe y describa lo observado

Materiales:

● El frotis preparado en la primera parte del laboratorio

● Mechero
● Colorantes y reactivos de Gram:
● Cristal Violeta
 ● Solución de Lugol
● Alcohol-acetona
● Safranina
● Agua corriente

Método:

● Utilizar el frotis delgado que preparó anteriormente

● Dejarlo secar al medio ambiente
● Fijarlo como indica en el esquema
● Dejarlo enfriar

Coloración:

Verter el cristal violeta sobre el portaobjetos y dejar actuar por 1 minuto

1. Enjuagar con agua corriente y dejar escurrir

2. Agregar la solución de Lugol y dejar actuar por 1 minuto

3. Escurrir la solución y enjuagar el portaobjetos con agua corriente

4. Decolorar con el alcohol-acetona por 5 segundos y enjuagar con agua corriente.

5. Agregar la solución de Safranina y dejar actuar por 1 minuto , enjuagar, escurrir y dejar
secar al aire.

6. Observar la preparación al microscopio y dibujar. Tenga en cuenta la morfología

bacteriana y su agrupación.

Bacilos Gram negativo

Bacilos Gram Positivos en medio de los neutrófilos

Si su coloración no quedó muy perfecta, pudo haber cometido alguno de estos errores:
Una reacción Gram positiva falsa

● Frotis fijado antes de estar seco o demasiado grueso

● Cristal Violeta con sedimento (filtrarlo).
● El Lugol no se escurrió completamente.
● No se decoloró suficiente.
● La solución de Safranina se dejó por demasiado tiempo.

Una reacción Gram negativa falsa

● No se dejó actuar suficiente la solución de yodo.

● La preparación se sobre decoloró.
Cuestionario
● ¿Qué ocurre cuando se aplica el cristal violeta en la preparación?
● ¿Cómo actúa el alcohol- acetona sobre la pared de una bacteria Gram negativa y de
una Gram positiva?
● ¿Cómo actúa el colorante de contraste?

● Explique desde el punto de vista morfológico, en que se diferencia una bacteria Gram
positiva de otra Gram negativa.

● ¿Qué función cumple el lugol en la coloración Gram?

● ¿En qué casos el Gram hay que reportarlo inmediatamente?

● ¿Por qué es importante la coloración de Gram?

● Investigue 3 tipos de tinción para bacteriología, exceptuando la de Gram, como se

realizan y para que se utilizan.

● Mencione dos funciones que tiene la pared celular en las bacterias

● Investigue las diferencias de la pared celular de las bacterias Gram positivas y Gram
negativas

● Describa las ventajas y las desventajas entre una tinción simple y una diferencia

Coloración de Zielh Neelsen

Competencias para el desarrollo del ser:

● Organiza trabajos con sus compañeros
● Forma grupos de estudio para lograr los objetivos propuestos

Competencias para el desarrollo del conocer:

 ● Reconocer y distinguir el BAAR en un frotis de esputo, mediante la coloración de
ácido resistentes llamada Zielh Neelsen
● Conocer el fundamento de la coloración de Zielh-Nelsen y su utilidad clínica
● Comparar las diferencias entre la enfermedad de Hansen y la tuberculosis

Competencias para el desarrollo del hacer:

● Observa los BAAR en el microscopio

Fundamento teórico

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y

económica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias
contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos
de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido,
después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol
resistentes o BAAR

Las Micobacterias son organismos de gran importancia clínica por producir un amplio
espectro de patologías tanto en individuos Inmunocompetentes como
inmunocomprometidos, siendo estos la segunda causa de muerte a nivel mundial,
después del VIH, resultante de un único agente infeccioso, tanto así que en 1993 la
Organización Mundial de la Salud declaro la tuberculosis como una emergencia de salud
pública global. Estos son bacilos largos y delgados, su pared está compuesta por
aproximadamente 60% de lípidos y alto contenido de ácidos micólicos, de manera que
todas las especies se presentan como bacilos acido-alcohol resistentes (BAAR) en la
coloración de Ziehl – Neelsen, cuyo fundamento es evidenciar la capacidad de algunas
bacterias de incorporar ciertos colorantes, como la fucsina fenicada, y retenerlos en su
pared celular después de someterlos a la acción de ácidos y alcohol. Esta coloración
también es útil para la identificación de otros bacilos Gram positivos ramificados como
Nocardia spp y Actinomyces spp.

Así mismo, se debe tener en cuenta aquellas Micobacterias que no causan tuberculosis,
como Mycobacterium leprae, Mycobacterium avium complex y las Micobacterias no
tuberculosas (crecimiento rápido y crecimiento lento).

La lepra, así como la tuberculosis puede ser causada por más de una micobacteria, este es
el caso de Mycobacterium lepromatosis y Mycobacterium leprae. Esta patología tiene una
historia que data desde orígenes bíblicos, que incluso con el desarrollo de las terapias
antibióticas modernas continúa siendo una carga importante en las personas y en la
sociedad, pues los pacientes siguen siendo estigmatizados por el diagnóstico de la
enfermedad, lo que conlleva a un diagnóstico y terapia inadecuados. La complicación más
importante de la lepra es el daño al tejido nervioso periférico, lo que conlleva a las
deformidades características de la enfermedad, las cuales pueden prevenirse con una
detección y terapia temprana.

Bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR)

Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeoscomo

Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La
coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese
la pared bacteriana que contiene ceras. La tinción fue descrita por primera vez por dos
médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 a
1894), un patólogo.
Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium, son designados acido-
resistentes porque una vez teñidos por un método conveniente, retienen el colorante y no
se decoloran por acción de los ácidos. Los microorganismos acido- resistentes, aparecen
de color rojo y los no acido - resistentes a parecen de color azul.

Consulta previa a la práctica:

● ¿Cómo es la estructura de la pared de una Micobacteria?

● ¿En que se fundamenta la coloración de Zielh- Neelsen?
● ¿En qué consiste la coloración e Kinyoun?
● ¿Qué características especiales tienen las micobacterias?

Materiales \ Equipos

● Laminas coloreadas positivo y negativas

● Aceite de inmersión
● Microscopio

Procedimiento:

El frotis se realiza y colorea de la siguiente manera. Por motivas académicos, las láminas se
traerán ya coloreadas para que el estudiante las mire y dibuje lo observado.

1. Realizar un frotis del esputo en estudio; dejarlo secar y se fija con calor.
 2. Cubrir la lámina fijada con fucsina fenicada y calentarla hasta que emita vapores,
sin que hierva, durante 5 min. Reponiendo constantemente el colorante para
evitar la desecación.
3. lavar con agua corriente.
4. Decolorar con alcohol - acido hasta que no haya más salida de color.
5. Lavar con agua corriente
6. Agregar la solución de azul de metileno por un minuto.
7. lavar con agua; secar al aire y observar en el microscopio con el objetivo de 100X

Cuestionario
● Describa cual es la forma correcta de tomar la Baciloscopia, y a que paciente se le
debe realizar:
● Haga un mapa conceptual donde explique cuál serían los pasos a seguir con un
paciente sintomático respiratorio al que le van a realizar las baciloscopias:

● ¿Qué normas de bioseguridad se deben seguir cuando se trabajan con esputos?

 ● ¿Por qué la coloración se realiza con calor?
● ¿Cuándo se solicita una baciloscopia?
● ¿Cómo se interpreta una baciloscopia?

BIBLIOGRAFIA
Microbiología medica Murray
Guía práctica de microbiología Panamerican

PRÁCTICA DE LABORATORIO No.3

MICROBIOLOGIA BASICA
FACULTAD DE MEDICINA

METODO DE DETERMINACION DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR DIFUSION

(ANTIBIOGRAMA)

Competencias para el desarrollo del ser:

● Organiza trabajos con sus compañeros

● Forma grupos de estudio para lograr los objetivos propuestos

Competencias para el desarrollo del conocer:

● Conoce clasificación de los antibióticos, diferencia el concepto de bactericida y

bacteriostático.
● Describe los diferentes tipos de mecanismos de resistencia bacteriano.
● Determina la importancia clínica y microbiológica de las pruebas de susceptibilidad.
● Conoce los criterios que permiten la escogencia adecuada de los discos de antibióticos
a probar en un antibiograma.

Competencias para el desarrollo del hacer:

● Realiza un cuadro comparativo de todos los antibióticos teniendo en cuenta el grupo al

que pertenece y mecanismos de acción.
● Realiza correctamente un antibiograma de acuerdo al método de difusión.

Fundamento teórico:

El establecimiento de una correcta y exitosa terapia antibacteriana depende no sólo de

conocer la amplia gama de antibacterianos existentes, su mecanismo de acción, espectro
de acción, farmacodinámica y farmacocinética; sino también del uso de herramientas
fundamentales como resultan ser las pruebas de evaluación de la susceptibilidad
bacteriana a dichos agentes quimioterápicos.

Se denomina antibiótico (del griego, anti, “contra”, bio “vida”), a cualquier compuesto
químico utilizado para eliminar o inhibir el crecimiento de organismos infecciosos. La
penicilina es el antibiótico más conocido, y ha sido empleado para trata múltiples
enfermedades infecciosas, como la sífilis, la gonorrea, el tétanos o la escarlatina. En un
principio, el término antibiótico solo se empleaba para referirse a los compuestos
orgánicos, producidos por bacterias u hongos que resultaban tóxicos para otros
microorganismos. En la actualidad también se emplea para denominar también
compuestos sintéticos o semisinteticos. La principal categoría de antibióticos son los
antimicrobianos, pero se incluyen los fármacos antipalúdicos, antivirales y antiprotozoos.

Una de las técnicas más utilizadas en Microbiología para determinar la sensibilidad a un

antibacteriano es la prueba de difusión en agar, conocida también como el método de
Kirby Bauer. Este método limita su funcionalidad a determinar la capacidad inhibitoria de
un agente antibacteriano sobre un microorganismo en particular, y para ello se usan
discos de papel que contienen concentraciones de antibiótico estandarizadas que se
colocan sobre la superficie, previamente inoculada con la bacteria a ensayar, de un agar
(generalmente agar Müeller Hinton), determinando la capacidad de la misma de resistir a
la acción del agente químico, por la medición del halo de inhibición que se pueda generar
y la comparación del mismo con los parámetros establecidos por el (CLSI) Clinical and
Laboratory Standards Institute, organización global, no lucrativa, que se encarga de
estandarizar, desarrollar y promover el desarrollo y el uso de las pautas establecidas para
el consenso dentro de la comunidad del cuidado de la salud. El diámetro obtenido
dependerá no solo de la sensibilidad del microorganismo y dela carga del disco, sino
también del espesor de la capa del agar, de la capacidad de difusión de la droga en el
medio, de la temperatura y de la fase de crecimiento del inoculo.

El método de Bauer y Kirby favorece la difusión del fármaco en el agar y dependiendo del
antibiótico dicha difusión va a desarrollarse a una velocidad diferente por lo que se hace
necesario el cuadro de normalidad señalado por el CLSI. Existen otras técnicas para
determinar la susceptibilidad bacteriana ante algún fármaco, tales como las pruebas de
dilución en agar, dilución en caldo, la prueba epsilométrica o E-Test, el nivel bactericida
del suero, entre otras. Cada una de ellas puede aportar información relevante y diferente,
incluyendo en algunos casos, la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria
(CMI) y la Concentración Máxima Bactericida (CMB) (1).

Consulta previa a la práctica:

● ¿Cómo se lee un antibiograma por el método de Bauer y Kirby?
● ¿Cómo se interpreta un antibiograma?
● ¿Qué es una BLEE? ¿Qué antibióticos se ven involucrados en este fenómeno?
● ¿Qué debe tener en cuenta para montar un antibiograma por el método de
Bauer y Kirby?
● ¿Qué propiedades tiene el medio Mueller – Hinton?
● ¿Qué es la Concentración Mínima Inhibitoria?
● ¿Qué se debe tener en cuenta para escoger los sensidiscos adecuados en un
antibiograma?
● ¿Qué es la escala de Mac Farland?
● ¿Cuál es la finalidad de las pruebas de susceptibilidad?
● ¿Qué significa sensibilidad y resistencia cuando se interpreta un antibiograma?
 ● ¿En qué casos las pruebas de susceptibilidad requerirán de medios de cultivos
distintos al de Mueller-Hinton?
● Defina concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración bactericida
mínima (CMB)
● ¿Cómo se llama la prueba de sensibilidad observada en la practica?

Materiales::
Cepa bacteriana
Guantes y Tapa bocas
Agar Mueller Hilton
Solución salina estéril
Tubos de ensayo
Sensidiscos de antibióticos
Regla milimétrica
Escobillones estériles
Incubadora
Mechero
Pinza
Asas microbiológicas

Selección de los agentes antimicrobianos para las pruebas de sensibilidad

La selección de los agentes antimicrobianos apropiados para la prueba, es una decisión de

cada laboratorio clínico en consulta con el cuerpo médico, el comité de farmacia el comité
de enfermedades contagiosas.
● GRAM POSITIVOS: oxacilina, penicilina, gentamicina, cotrimoxasasol sulfa,
ciprofloxacina, Clindamicina, eritromicina, linezolid, vancomicina, teicoplanina

● GRAM NEGATIVOS: amoxicicilina ácido clavulanico, ceftriaxona, ceftazidima,

cfepime, aztreonam, ciprofloxacina, gentamicina, ampicilina, cotrimoxasasol sulfa.

Informes de rutina: Para evitar una mala interpretación, el informe de rutina al médico
deberá incluir únicamente las drogas apropiadas al uso terapéutico.
Para la realización de una adecuada prueba de sensibilidad, el número de agentes
probados debe ser limitado. En general, deberá incluir sólo un representante de cada
grupo de drogas relacionadas con actividad casi idéntica y para las cuales la interpretación
podría ser la misma.

NOMBRE GENERICO: Para minimizar confusiones, todos los antibióticos deberán ser
referidos por su nombre genérico,

Reactivos
AGAR MULLER- HILTON:
De los medios disponibles se considera al agar M, Hilton el mejor para las pruebas de
sensibilidad de rutina porque:
Muestra buena reproducibilidad para las pruebas de sensibilidad entre los distintos lotes.
Tiene bajo contenido de inhibidores para sulfonamidas, Trimetroprim y tetraciclina. Es
adecuado para el crecimiento de la mayoría de las bacterias patógenas Existen suficientes
datos recopilados que avalan la experiencia de las pruebas de sensibilidad realizadas con
este método,
Aunque el agar M. Hilton es generalmente confiable para las pruebas de sensibilidad, los
resultados obtenidos con algunos lotes pueden, en ocasiones, variar significativamente. Si
un lote del medio no sustenta el adecuado crecimiento de los microorganismos probados,
los halos obtenidos en las pruebas por difusión podrían ser mayores quedando fuera de
los límites de control de calidad, conduciendo a resultados erróneos.

Procedimiento para la realización del test de difusión por disco

Nota: Se hará una demostración práctica, guiada por los docentes, sobre la realización del
antibiograma

SELECCIÓN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS

PREPARACIÓN DEL INÓCULO.

● Método de desarrollo previo:
1) Seleccione 4 o 5 colonias bien aisladas de igual morfología de la caja de
 cultivo. Prepare una suspensión en 4 o 5 ml de un caldo apropiado
de cultivo. Prepare una suspensión en 4 o 5 ml de un caldo apropiado
(Tripteina Soja o BHI) tocando la parte superior de cada colonia
2) incube a 35 – 37 oC hasta que este alcance o exceda la turbidez del
estándar (2 o 6 horas).
3) Ajuste la turbidez del Inóculo con solución salina o caldo hasta el 0.5 de Mc
Farland por comparación visual con el estándar. Para ello, mire los tubos
contra el fondo blanco con una línea negra contraste.

Inoculación de las cajas

1) Dentro de los 15 minutos después de ajustado el inóculo siembre las cajas

de Mueller Hilton con un hisopo estéril. Presione el hisopo contra las
paredes del tubo a fin de escurrir el exceso de inóculo
2) Inocule la superficie seca del Mueller Hilton por hisopado en tres
direcciones para asegurar una completa distribución del inóculo. Las
zonas de inhibición serán uniformemente circulares y el desarrollo
confluente o casi confluente.
3) Si crecen solo colonias aisladas el antibiograma debe repetirse. Espere de 3
a 5 minutos, pero no más de 15 minutos antes de aplicar los discos para
que el exceso de humedad superficial sea absorbido.

Aplicación de los sensidiscos de antibiograma en las cajas inoculadas.

a) Colocar los discos sobre la superficie del agar inoculada con pinza estéril aplicando
una ligera presión a una distancia no rnenor a 24mm desde un centro al otro.
Debido a que algunas drogas difunden casi instantáneamente, un disco no debe
ser removido una vez que tomó contacto con la superficie del agar. No deben
colocarse más de 12 discos por caja de 250 mm y no más de 6 discos por caja de
 100mm.
b) Incubar las placas invertidas a 35-37oC dentro de los '15 minutos posteriores a que
los discos fueron aplicados. Con excepción de Haemophilus spp, Neisseria
gonorrhoeae y Streptococcus spp, las placas no deberán ser incubadas en
concentración incrementada de CO2 porque los estándares de interpretación
fueron desarrollados usando incubación ambiente y el agregado de CO2 alteraría
significativamente el tamaño de las zonas inhibitorias para algunos agentes

Advertencias:
A. Los discos de antibióticos no deben ser manipulados con las manos pues
podrían ejercer efecto sobre la flora habitual de la piel.
B. De caerse uno de los discos fuera de la placa, este debe ser desechado.
C. De caerse uno de los discos dentro de la placa el mismo no debe ser removido
ni movilizado hacia otra zona del agar

Lectura e interpretación de resultado

a) Después de 18 a 24 horas de incubación examine cada caja y mida los

diámetros de las zonas de inhibición, si las placas fueron satisfactoriamente
hisopadas y el inóculo fue el correcto las zonas de inhibición serán
uniformemente circulares y habrá desarrollo confluente. Si el microorganismo
estudiado es un Staphylococcus spp o Enterococcus ssp, incube por 24 horas y
use luz transmitida para examinar un ligero crecimiento de cepas de meticilino o
vancomicina resistente respectivamente dentro de las zonas de inhibición.
Cualquier desarrollo dentro de la zona de es indicativo de meticilino o vancomicina
resistencia.

b. El punto final deberá tener en cuenta el área que no muestre desarrollo obvio, no
 incluyendo velo de crecimiento o colonias muy pequeñas que puedan ser
detectadas solo con mucha dificultad en el borde de la zona. Colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberán ser sub cultivadas, re identificadas y
reensayadas. En medios suplementados con sangre, deberá ser medida la zona de
inhibición del crecimiento, no la zona de inhibición del hemólisis.
c. Los tamaños de las zonas de inhibición serán interpretados con la tabla y los
microorganismos se informarán sensibles intermedios o resistentes frente
antimicrobiano ensayado.

Método de Disco

d. Para la lectura del antibiograma se debe utilizar una regla milimetrada y tener en
cuenta las normas del CLSI que tiene los puntos de corte para cada antibiótico
dependiendo de la cepa estudiada.

Por efectos académicos y de tiempo, en clase se le entregara a cada grupo un cultivo con
el antibiograma listo.
Con una regla milimetrada, se medirá la zona clara alrededor del disco de antibiótico, el
cual se corresponde con la inhibición del crecimiento bacteriano. Estos datos se
compararán con los diámetros de zona establecidos para cada antibiótico en las tablas de
interpretación internacional. La interpretación de los halos de inhibición nos permitirá
expresar el resultado como sensible, sensibilidad intermedia o resistente.

Se le entregara a cada grupo, un cuadro para que sea llenado, de acuerdo a los resultados
obtenidos.

Bibliografía:
- Clinical Laboratory Standards Institute CLSI (formerly National Committee
 Laboratory Standards NCCLS). M2-A5 Performance standards for antimicrobial disk
susceptibility test. Approved Standard. NCCLS, Wayne. 17 (17), 2014
- García JA, Cantón R, García JE, Gómez-Lus ML, Martínez L, Rodríguez-Avial C, Vila J.
Métodos básicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos 2000.
[serie en línea] disponible en [Link]
- Patrick Murray 2017 octava edición. Microbiología medica

PRÁCTICA DE LABORATORIO No.4

MICROBIOLOGIA BASICA
FACULTAD DE MEDICINA

Diagnósticos de virus, hepatitis B. virus de la inmunodeficiencia humana y dengue,

Sarampión, Rubeola

Fundamento teórico:

Debido a su tamaño submicroscopico, no contamos con herramientas necesarias para

observar los virus; sin embargo a través de pruebas inmunológicas podemos evidecoiar no
solamente antígenos virales sino también los anticuerpos que produce un individuo frente
a la infección por diferentes tipos de virus.

Materiales

● Pruebas rápidas de Hepatitis B, VIH y dengue

● Muestras de sueros humano.

Desarrollo del procedimiento

Ya que el procedimiento para cada prueba esta descrito por el fabricante, es necesario
leer detalladamente los insertos de las pruebas a realizar y seguir paso a paso la técnica.,
Realizar las pruebas asignadas a la muestra entregada, siguiendo las recomendaciones de
bioseguridad ya aue se considera una muestra potencialmente infecciosa.
A través de diapositivas por grupos asignadas, investigaran los nuevos lineamientos del
INS para el diagnóstico de Sarampión y Rubeola.

Evaluación

A través de un quiz se evaluaran los conocimientos de las técnicas conocidas durante la

práctica.

PRÁCTICA DE LABORATORIO No.5

MICROBIOLOGIA BASICAG
FACULTAD DE MEDICINA

PARASITOS

Competencias para el desarrollo del ser:

● Asume con respeto los conocimientos adquiridos, se responsabiliza por su propia

producción académica, Organiza trabajos con sus compañeros
● Cultiva el habito de consumir celulosa para mejorar la digestión y alimentos
saludables

Competencias del desarrollo del saber:

● Describe las diferencias entre Coprológico seriado, por concentración.

● Determina la importancia del Coprológico dirigido en el diagnóstico de la diarrea
● Conocer los métodos convencionales para el diagnóstico de las infecciones por
parásitos

Competencias para el desarrollo del hacer:

● Realiza un coprológico y analiza la diferencia entre un coprológico digerido y un

coprocultivo

OBSERVACION DE PROTOZOOS INTESTINALES

Fundamento Teórico
Las infecciones del tracto gastrointestinal representan un grave problema de salud
pública. La diarrea es la manifestación más común de esas infecciones, las cuales
constituyen una de las causas más importantes de morbilidad y mortalidad en lactantes y
niños menores de cinco años, con el mayor número de casos en los países en vías de
desarrollo de Asia, África y Latinoamérica.

La etiología de la enfermedad diarreica es diversa y numerosos esfuerzos se han realizado

para tratar de explicarla, observándose que el factor infeccioso continua siendo el más
importante, sin duda, por su carácter transmisible. La utilidad del diagnóstico de la diarrea
se enfoca fundamentalmente desde dos puntos de vista:

1. El clínico, para la atención y seguimiento de pacientes.

2. Desde el punto de vista de salud pública: control de brotes y vigilancia epidemiológica.

En el estudio de la material fecal, se pueden realizar diferentes procedimientos entre los

más comunes: Coprológico, copróscopico, coprocultivo y coproantígenos, cada uno
diseñado para búsqueda y análisis de diferentes factores o diferentes patógenos.
La Entamoeba histolytica es un parásito de amplia distribución, puede aislarse en todo el
mundo. Se encuentra en forma de trofozoito que habita en el intestino grueso, causando
ulceras y fagocitando glóbulos rojos. El quiste maduro es la forma infectante, posee 4
núcleos, cariosoma central y distribución regular de la cromatina. Tras la ingestión del
quiste (resiste las condiciones ácidas del estómago), se dividen los núcleos y el citoplasma,
y de cada división se forma un trofozoito, causante del cuadro clínico.
Patogénesis: La infección se produce tras ingestión de agua o alimentos contaminados
con materia fecal que contenga quistes; los quistes pueden sobrevivir varias semanas, los
tratamientos del agua para consumo humano no aseguran la destrucción de los quistes. El
trofozoito llega al colon y se adhiere al epitelio produciendo su destrucción, penetran en
la submucosa y aparecen unas lesiones típicas (botón de camisa). Pueden producir otras
complicaciones como granulomas amebianos, megacolon, hemorragia intestinal masiva. El
trofozoito puede llegar al hígado a través de circulación portal.
Clínica: En la mayoría es asintomática, sólo en un 10% invade el epitelio del colon
apareciendo el cuadro clínico. -Amebosis intestinal aguda o disentería amebiana. Dolor
abdominal y rectal, diarrea sanguinolenta y tenesmo.
Diagnóstico: Demostración de quistes o trofozoitos en heces o en muestras de tejido.
Importante el diagnóstico diferencial con otras amebas que pueden colonizar el tubo
digestivo.
La Giardia lamblia produce giardiosis que es la protozoosis humana más frecuente. Tiene
una amplia distribución, frecuente en niños, transmisión fecal-oral (niños en guarderías) y
contaminación de agua con quistes (altamente infecciosos). Morfología y ciclo: En el
paciente infectado se encuentran trofozoitos en muestras procedentes de duodeno y
quistes en heces. Trofozoito con forma de pera, dos núcleos anteriores, cuatro pares de
flagelos y una ventosa central por la que se une al epitelio intestinal. Los Quistes ovalados,
poseen una pared gruesa y 4 núcleos.
Patogenia: Se sitúa en las criptas de la mucosa duodenal, produciendo lesiones por un
mecanismo no bien conocido.
Clínica: La mayoría de pacientes infectados no desarrollan sintomatología. Cuadro clínico
similar a una infección gastrointestinal aguda (dolor epigástrico, diarrea maloliente con
moco pero sin sangre, deshidratación y pérdida de peso). Existen formas crónicas
(malabsorción y esteatorrea), se asocian a inmunodeficiencias (patógeno frecuente en el
sida).
Diagnóstico: Detección de quistes en heces.

Consulta previa a la práctica:

● ¿Qué parasito causa amebiasis ?

● ¿Cuáles son los síntomas clásicos de amebiasis?
● ¿Qué factores de virulencia intervienen en la amebiasis?
 ● ¿Dónde habita la forma adulta de Giardia lamblia?
● ¿Cuál es la sintomatología clásica de una giardiasis?

Coprológico

El examen coprológico es un perfil en el que se incluyen diferentes técnicas de análisis

(físicas, químicas y microscópicas) utilizadas para apreciar la capacidad digestiva del
intestino y de gran utilidad para identificar procesos digestivos que cursan con diarrea por
mala absorción o insuficiente digestión enzimática.
Algunos signos como la presencia de moco, pH alterado, la presencia de sangre oculta en
heces, puede ser el primer examen del protocolo a seguir para la identificación de una
patología. El examen Coprológico General es una prueba de laboratorio confiable que
facilita la detección de anomalías en el proceso digestivo. Este examen consiste en dos
partes: la parte Física y Química, que comprende la medición del pH, la detección de
Sangre oculta en heces y la detección de azúcares reductores, además de la observación
macroscópica de sus características, como color, consistencia, presencia o no de moco,
sangre macroscópica o parásitos macroscópicos.

La otra parte que compone al estudio es la observación al microscopio de la muestra

biológica, con el fin de identificar, por su morfología, diversos elementos que son
patognomónicos de algunos desórdenes intestinales, como lo son las grasas neutras,
almidones, jabones, eritrocitos, leucocitos, quistes y trofozoitos de algunos protozoarios y
huevos, larvas y hasta adultos de algunos helmintos. Los datos arrojados por el presente
estudio de laboratorio serán de utilidad para llegar a un buen diagnóstico apoyándose en
la clínica.

Análisis físico
● Consistencia y forma. Las heces normales son blandas y formadas o formes. En caso
de estreñimiento habitual o patológico se vuelven demasiado duras y con la ingestión
de laxantes o purgantes o la presencia de microorganismos patógenos se producen
 heces demasiado blandas o líquidas lo que constituye la diarrea. Cuando la diarrea
está acompañada de moco y sangre se llama disentería y cuando contiene restos
alimentarios sin digerir se llama lientería.

● Color. En condiciones normales, los adultos evacuan heces de color pardo de distinta
intensidad; este color se debe a la urobilina y al urobilinógeno formados por las
bacterias, como resultado de la reducción de la bilirrubina. El color puede cambiar por
la ingestión de algunos alimentos como leche, vegetales clorofílicos, remolacha, o por
otras sustancias como hierro, bismuto y bario. También puede variar como
consecuencia de algunas enfermedades como ictericia obstructiva, hemorragias del
tracto intestinal alto o melenas, exceso en el contenido de grasa o esteatorrea como
en casos de malabsorción intestinal.

● Moco. Normalmente en las heces se aprecian pequeñas cantidades de moco, pero

cuando éste aumenta indica inflamación o irritación del intestino, especialmente del
colon, en cuyo caso se debe examinar la porción de materia fecal que lo contenga.

Análisis químico
● pH. La reacción de la materia fecal depende en gran parte de dieta. Alto consumo de
proteinas produce alcalinidad, mientras que el consumo abundante de carbohidratos
producen heces ácidas. Normalmente el pH es cercano al neutro y varía de 6.8 a 7.2

● Azúcares reductores. La glucosa y la lactosa pueden estar presentes en materia fecal

cuando hay un trastorno en la absorción por parte del intestino delgado. Estos
azúcares reducen el reactivo de Benedit y por esta razón se llaman reductores. Este
examen es especialmente útil en caso de Enfermedad Diarreica Aguda para guiar al
clínico en el diagnóstico de la causa etiológica de la diarrea. Las diarreas inflamatorias
generalmente cursan con Azúcares negativos ya que los agentes etiológicos se
localizan principalmente en el intestino grueso, en tanto que las diarreas secretoras
pueden presentar azúcares positivos, especialmente lactosa, azúcar que se absorbe a
través del intestino delgado.

En la tabla siguiente se resumen algunos de los parámetros importantes para la

clasificación de las diarreas

PARÁMETRO DIARREA INFLAMATORIA

DIARREA SECRETORA

Ph Acido o alcalino Acido

 Azúcares reductores Ausentes Presentes
Leucocitos Presentes Ausentes
Localización del agente Intestino grueso Intestino delgado
causal
Mecanismo de acción Invasivo Osmótico
del agente

● Sangre oculta. Su hallazgo tiene valor en el diagnóstico de cáncer, úlcera péptica o de

algunas parasitosis intestinales; aun muy pequeñas cantidades de sangre se pueden
detectar por diferentes métodos, bien sea como una reacción enzimática inespecífica
semejante a la reacción de las peroxidasas o por métodos mas específicos con
anticuerpos monoclonales.

Análisis microscópico
En forma rutinaria, en el Laboratorio se realizan montajes en fresco con solución salina
fisiológica, lo cual permite apreciar los movimientos de los trofozoitos y las larvas de los
parásitos, así como sus inclusiones citoplasmáticas, factores útiles para su diferenciación;
también se realizan montajes con solución de Lugol o con coloraciobes transitorias como
azul de metileno amortiguado (Azul de Nair) o con eosina, las cuales destacan algunas
estructuras y son útiles para diferenciar parásitos, células y leucocitos (mononuleares o
polimorfonucleares), que no son fácilmente distinguibles cuando estan sin teñir. En otros
casos, como para aclarar diagnósticos o para demostración, se realizan frotis permanentes
teñidos con colorantes como hematoxilina-férrica, coloración Tricrómica o coloración de
Zielh-Neelsen

Selección, recolección y transporte de muestras

Para el procesamiento de cualquier examen en materia fecal se deben seguir ciertos

criterios de aceptación y manejo de una muestra, se consideran muestras inaceptables:
• Muestras de más de 2 horas no preservadas
• Hisopos rectales secos
• Varias muestras de un mismo paciente en un mismo día
• Muestras sin datos del paciente, hora y procedencia.
* Si las heces son mucosas y \ o sanguinolentas, existe la posibilidad de presencia en ellas
de formas trofozoiticas de protozoos. Esto impone la necesidad de realizar el examen
microscópico inmediatamente después de la emisión fecal, siendo posible retardar solo
ligeramente el estudio sin que las formas vegetativas se alteren.

*En heces líquidas y pastosas los parásitos intestinales pueden estar presentes bajo
múltiples formas: trofozoítos y quistes de protozoos, huevos y/o larvas de helmintos.
*En heces formes o duras los parásitos pueden aparecer en diferentes estados, excepto
bajo forma trofozoitica en el caso de protozoos intestinales.
En estas circunstancias, es posible demorar algo más tiempo el examen, incluso emplear
previamente fijadores, y no habrán de tomarse medidas especiales a la hora de su examen
microscópico.

Recolección de la muestra: La recolección de las muestras de materia fecal se puede

realiza en: frascos plásticos con tapa de rosca de cierre hermético, hisopos en tubos con
tapa o medios de transporte.

Materiales \ Equipos

Materia fecal
Laminas portaobjetos y laminillas cubreobjetos
Solución salina
Lugol
Palillos
Microscopio.
Procedimiento

● Colocar en una lámina portaobjetos en un extremo una gota de solución salina y

en el otro extremo una gota de lugol
● Añadir con un palillo, una porción (del tamaño de un garbanzo) de las heces a
examinar., en la solución salina, hasta conseguir una suspensión fina y homogénea
y de ahí pasar con la misma muestra al lugol.
● Colocar una laminilla ambas gotas y observar al microscopio en objetivo de
● Observación de diferentes formas de los principales protozoos y helmintos.
● Cada grupo investigara casos clínicos junto con los resultados de coprológicos y
coproscópicos, con ayuda de los docentes interpretaran los resulta

1. Realizar los montajes con las diferentes muestras que se trajeron

2. Observar e identificar las estructuras parasitarias

Consulta previa a la práctica:

● ¿Qué recomendaciones se deben seguir para la toma de muestra para un

examen coprológico ?
● ¿Qué es un examen coproscopico?
● ¿Qué patologías podrían alterar el color normal de la materia fecal?
 ● ¿Qué patologías podrían alterar el olor normal de la materia fecal?
● ¿ Que es un absceso hepático amebiano? consulte síntomas y diagnostico
● ¿Qué complicaciones puede traer una giardiasis en un niño?

Quiste de Ameba 40 X Quiste de Entamoeba coli 40x

Quistes de Giardia lamblia 40 x

Observación de helmintos (Nematodos y Platelmintos)

Fundamento teórico

Las helmintiasis afectan a una gran parte de la población mundial, en particular a aquellas
personas que no guardan las condiciones higiénico sanitarias adecuadas; la defecación al
aire libre, la ingestión de agua no potable para el consumo y de alimentos contaminados
con tierra, el no lavado o el lavado incorrecto de las manos antes de ingerir alimentos,
entre otras, constituyen muchas de las causas por las cuales las personas se infectan con
estos parásitos.
Tal y como ocurre con los protozoos, los helmintos también poseen ciclos de vida variados
y complejos y su conocimiento es importante toda vez que permite establecer las pautas
tanto para el diagnóstico de laboratorio como para la prevención de estas enfermedades.
En los helmintos podemos observar tres formas parasitarias diferentes: el adulto, el huevo
y la larva. Los helmintos adultos, de forma general, tienen una talla que permite ser
observados a simple vista, sin embargo los huevos y las larvas son microscópicas. Por tal
motivo, el diagnóstico de laboratorio en estos casos se basa tanto en la observación
macroscópica de las muestras buscando las formas adultas del parásito, como en la
observación microscópica en la búsqueda de huevos y larvas.
Los gusanos redondo llamados nematodos poseen varios géneros de importancia medica:
Ascaris, Necator, Trichuris, Enterobius, todas con importantes ciclos de vida, cuyas formas
parasitarias en dichas fases pueden causar daño a su huésped.
Los parásitos nematodos al igual que los platelmintos siempre serán de importancia en
nuestro medio, ya que la falta de agua potable y en algunos lugares la ausencia de agua, el
caminar descalzo y la falta de higiene facilitan que estos parásitos encuentren siempre un
huésped propicio.

Consulta previa a la práctica:

● ¿Qué es el síndrome de Loefler?

● ¿Qué complicaciones puede traer una uncinariasis?
● ¿Cuáles son los síntomas clásicos en una oxiuriasis ?
● ¿Cuáles son las tenias de mayor importancia clínica?
● ¿Que tenia es la causante de la neurocisticercoss?
● ¿Qué diferencias hay entre una Tenia solium y una Tenia saginata?
● ¿Cuál es la tenia más común en los niños?

Examen directo de las heces:

a) Proceda de la misma forma que en la práctica anterior (Observación de protozoos
intestinales) Recuerde guardar las medidas de bioseguridad requeridas, colóquese los
guantes antes de comenzar a trabajar.
b) Observe detenidamente las características de los huevos y larvas. Realice un esquema
de lo observado

Huevo de Uncinaria 40
Dr. Benjamín Nogueda T, Depto. de Parasitología, ENCB-IPN

Huevo de Truchuris trichuria 40x

Huevo de Ascaris lumbricoides 40X

Huevo de Enterobius vermicularis

Referencias bibliográficas

1. Murray Patric, Rosenthal Ken, Pfaller Michael. 7ª Edicición. 2012. Harcourt Brace-
Microbiología Médica
2. Bacteriología diagnostica. Norman Rojas, Esteban Chaves, Fernando García.
Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. 2006. Disponible en:
[Link]
f
3. Parasitosis [Link] para Investigaciones biológicas CIB.
4. http;//[Link]/k0XZVp
 PRÁCTICA DE LABORATORIO No.6
MICROBIOLOGIA BASICA
FACULTAD DE MEDICINA

IDENTIFICACION DE HONGOS AMBIENTALES

Competencias para el desarrollo del ser:

● Asume con respeto los conocimientos adquiridos, se responsabiliza por su propia

producción académica, Organiza trabajos con sus compañeros

Competencias del desarrollo del saber:

● Reconocer las estructuras de los hongos y observar al microscopio los hongos

contaminantes y resaltar su importancia como oportunistas
● Reconocer los hongos que con frecuencia causan micosis superficiales.

Competencias para el desarrollo del hacer:

● Observa el crecimiento de los hongos ambientales.

● Realiza la coloración de azul de lactofenol para Hongos
Fundamento Teórico

Los hongos son organismos que pertenecen al reino FUNGY están formados por células
eucariotas, poseen pared de quitina, pueden ser unicelulares o pluricelulares, los primeros
son llamados levaduras y los segundos se llaman filamentosos o mohos, pueden
reproducirse de forma asexual o sexual, los hongos son los mayores descomponedores de
materia orgánica y su crecimiento es relativamente sencillo, ya que solo necesitan agua y
un sustrato de materia orgánica.
Los hongos filamentosos se dividen en varias clases: Ascomicetos, Basidiomicetos,
Oomicetos y zigomicetos.
Los hongos filamentosos poseen hifas que son estructuras cilíndricas, cenocíticas
(aseptadas) o tabicadas (con septos), generalmente multinucleadas. Crecen por el ápice
(elongación) y pueden hacerlo en cualquier dirección, incluso dentro del sustrato. Un
conjunto de hifas se denomina micelio y cuando alcanzan cierto tamaño se dice que
forma colonias
El micelio que se observa algodonoso se llama micelio aéreo y su papel es sostener el
cuerpo fructífero que contienen las células o estructuras reproductivas y el micelio que
crece dentro del sustrato se llama vegetativo y se encarga de absorber los nutrientes.
Las levaduras presentan formas diversas, esférica, ovoide, elipsoidal y cilíndrica; crecen de
forma isodiamétrica (por todos lados) constituyendo la parte vegetativa y en poco tiempo
se reproducen asexualmente por gemación, fisión binaria o fragmentación. Algunas
levaduras forman cadenas, estructuras a las que se denomina seudohifas (por lo que la
agregación de varias de ellas se conoce como seudomicelio). Las colonias generalmente
son poco elevadas y de consistencia suave, cremosa, y su color oscila, en general, entre el
blanco - amarillo, aunque algunas contienen pigmentos carotenoides.
Las características macromorfologicas de las colonias fúngicas difieren en su color,
superficie, borde y aspecto. El aire es portador de aerosoles biológicos como polvo, gotitas
de agua y otros, que pueden estar cargados de los diversos grupos de microorganismos.

De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos que proceden principalmente
del suelo, de la vegetación. Algunos de los géneros más comúnmente aislados del aire son
Penicillium, Aspergillus, Rhizopus, Mucor y Cladosporium, entre otros.

Los hongos contaminantes del aire se asocian con patología alérgica y pueden ser
oportunistas en pacientes inmunosuprimidos.

Los hongos comprenden un grupo muy diverso de organismos que se caracterizan por
presentar un talo, ser eucarióticos y heterótrofos, nutrirse por absorción o fagocitosis y
poseer una pared celular de constitución química distinta a la de los vegetales y bacterias.
Son además cosmopolitas y se pueden comportar como saprófitos, simbiontes o parásitos.

Los alimentos frecuentemente son contaminados por mohos que se encuentran

suspendidos en el ambiente, estos al entrar en contacto con cualquier medio nutritivo, les

son propicios para su desarrollo y crecimiento. Algunos de los géneros más comúnmente
aislados del aire son Penicillium, Aspergillus, Rhizopus y Mucor, entre otros.

Todos los hongos de talo micelial, se reproducen por esporulación. Cuando la espora se
encuentra en un medio nutritivo adecuado, se hincha y germina emitiendo uno o más
tubos germinativos que se alargan distalmente hasta constituir filamentos delgados y
largos que se denominan hifas, las cuales pueden ramificarse después.

En algunas especies se forman septos a lo largo de la hifa, quedando entonces dividida en

pequeños compartimentos llamándose entonces hifa septada, otras veces no hay
septación y el protoplasma fluye continuamente a lo largo de la hifa, describiéndose
entonces como hifa no septada o coenocítica. En la mayoría de los hongos las hifas son
septadas. A medida que las hifas se siguen dividiendo se forma un crecimiento algodonoso
o filamentoso de hifas entrelazadas llamado micelio que forman colonias en medios de
cultivos.

El conjunto de micelio se conoce como talo. En algunas formas superiores las hifas se
unen formando cuerpos fructíferos grandes y de estructura compleja como es el caso de
las setas.

La parte del micelio que penetra en el substrato y absorbe substancias nutritivas se llama
micelio vegetativo, la parte que se proyecta sobre la superficie del substrato origina el
micelio aéreo, que a su vez da origen a esporas asexuales llamadas conidias, cuya misión
es la de dispersar el hongo a nuevos hábitats.

Algunos hongos también producen esporas sexuales formadas como resultado de la

reproducción sexual. Las que están encerradas en una especie de saco (Asca) se llaman
ascosporas y las que se forman en el extremo de una hifa o basidio se denominan
basiodiosporas.
Las levaduras son hongos unicelulares y la mayoría son Ascomicetos. Normalmente tienen
forma oval o cilíndrica y su principal forma de reproducción es la gemación, se desarrollan
bien en hábitats con abundante azúcar tales como frutas, flores, e incluso la corteza de los
árboles.

Las setas son hongos filamentosos pertenecientes a los Basidiomicetes que forman
cuerpos fructíferos denominados “setas” y que producen basiodiosporas como esporas
sexuales. Una actividad ecológica muy importante de los Basidiomicetes, es la
descomposición de la madera, papel, ropa y otros derivados de productos naturales. Estos
Basidiomicetes, por tanto, son capaces de producir Celulasas y ligninasas con actividades

degradantes de celulosa y lignina respectivamente, que utilizarán como fuente de carbono

y energía.

Los hongos ambientales pueden utilizarse en la industria, como por ejemplo para obtener
antibióticos, como ocurre con el Penicillium notatum , o para hacer cerveza o en la
industria del pan (Sacharomyces cereviceae) . Pero ellos también pueden provocar
enfermedad como la mucormicosis y la aspergilosis

Consulta previa a la práctica:

● ¿Cuáles son los síntomas de una aspergilosis?
● ¿Qué personas están en riesgo de padecer de una micosis por hongos
ambientales?
● ¿Qué formas de diagnosticar una mucormicosis se utilizan ?
● Consulte un caso clínico de asperigillosis o mucormicosis
HONGOS LEVADURIFORMES

CUERPOS FRUCTÍFEROS DE HONGOS DE LA CLASE BASIDIOMYCETES

Procedimiento

A. Del micelio aéreo o reproductivo de los hongos filamentosos que crecieron en su

caja, realice un montaje como se explica a continuación

* De los cultivos de hongos en cajas, tomar nota de sus características: Forma, aspecto del
micelio (algodonoso, aterciopelado u otro), pigmentación, elevación, consistencia, etc.

* Tome una lámina portaobjeto y coloque en ésta una gota de solución de azul de
lactofenol.

* Seleccionar una de las colonias aisladas y con la aguja de disección tome una pequeña
porción de la colonia del hongo (tenga en cuenta en no tomar parte del medio de cultivo).

* También puede tocar la superficie con la cara adhesiva de una tira de cinta pegante

* Cubrir con una laminilla

* Observar al microscopio con objetivo de 10 y 40 X

* Dibujar las estructuras observadas

B. Con unos pocos días de anterioridad consiga en un mercado, diferentes tipos de

alimentos que tengan hongos en su superficie

● Llévelos al laboratorio en recipientes separados

● Recuerde seguir la normas de bioseguridad
● Siga atentamente las instrucciones del docente y realice lo siguiente
● Cerca de la llama del mechero, Coloque 2 gotas de azul de lactofenol en una
lámina portaobjetos
● Corte un pequeño trozo de cinta transparente marca Scotch
● Coloque el lado del pegante de la cinta sobre el hongo del alimento y haga un
poco de presión
● Lleve la cinta y colóquela sobre el azul de lactofenol que se encuentra en la lamina
● Deje la cinta sobre la lámina y coloque la laminilla
 ● Enfoque en 10x y 40x

A continuación, presentamos algunas características macroscópicas y microscópicas de

los hongos ambientales que usted puede tener en la caja de Petri.

a
b c

d e f
a. Aspergillus niger, b: Aspergillus fumigatus, c: Bipolaris, d: Penicillum spp, E:
Syncephalastrum spp, F: Ulocladium sp.

EXAMEN DIRECTO KOH

Fundamento teórico

Las infecciones fúngicas pueden causar un gran número de entidades clínicas, con
manifestaciones variadas que dependen del lugar de infección y del tipo de paciente. En
general, podrían clasificarse según un criterio de profundidad, en superficiales, cutáneo-
mucosas, subcutáneas y profundas (endémicas y oportunistas).

Las micosis superficiales incluyen infecciones muy frecuentes que afectan al estrato
córneo de la piel, a la epidermis y a los anexos cutáneos: pelo y uñas. Son infecciones que
constituyen una parte importante de las consultas dermatológicas y cuyo diagnóstico de
elección sigue siendo el examen directo y el cultivo de las muestras de piel y anexos
cutáneos

Ante la sospecha clínica de una micosis superficial el clínico tiene que confirmar la
infección recurriendo a una serie de procedimientos de laboratorio que incluyen la
detección del organismo en el tejido (por examen directo o estudio histológico), el
aislamiento del patógeno en el cultivo y excepcionalmente, el reconocimiento de la
respuesta inmune específica por técnicas histológicas

Este procedimiento no sustituye al cultivo. Brinda información preliminar o presuntiva al

ser una técnica rápida que puede ser útil al médico y en algunos casos llegar a ser
diagnóstica.

El Hidróxido de potasio (KOH) Disuelve rápidamente las células permitiendo digerir

material proteico, observando con mayor nitidez los elementos fúngicos, su efecto de
clarificar puede incrementarse al calentar a la llama ligeramente la preparación.
Adicionalmente, se pueden emplear colorantes para pigmentar la pared de los hongos y
mejorar la visualización. La observación de hifas, permite sugerir la presencia de invasión
micótica.

Existen artefactos (hematíes, burbujas de aire, leucocitos, gotas de grasa y partículas de

talco) que pueden interferir y confundir.

Se visualizan artroconidias y blastoconidias. Las blastoconidias son unicelulares y de forma

variable y nacen en brotes en los ángulos de las artroconidias. La principal característica es
la de presentar artroconidias usualmente en forma cúbica o de barril (3,4
Artroconidias (objetivo de 40X)

Consulta previa a la práctica:

● ¿Qué géneros de hongos producen las dermatofitosis?

● Realice un mapa mental del cuerpo humano y coloque los nombres de las
micosis superficiales según su ubicación
● ¿Qué se debe tener en cuenta para la toma de una muestra sospechosa de tener
hongos?
● ¿De qué forma puede contaminarse una persona con hongos dermatofitos ?
Procedimiento
Toma de la muestra
a) Con anterioridad ubique una persona que tenga signos clínicos de tener
onicomicosis , hongos en planta de pies o en cualquier parte de la piel
 b) Se le debe pedir al paciente interrumpir con 3 días de anterioridad el
tratamiento antimicótico, si lo está usando
c) No aplicar cremas, ni talcos antes de la toma de la muestra, las uñas no
deben tener esmalte y las áreas deben estar limpias
d) Para uñas debe usarse un corta uñas nuevo y cortar la uña intentando
coger zona donde haya cambio de color y engrosamiento, colóquela en un
sobre de papel y llévelo al laboratorio
e) Para pellejitos en los pies, arránquelos con cuidado y colóquelos entre 2
láminas portaobjetos, séllelas con cinta pegante y llévelas al laboratorio
f) Tome datos del paciente como: enfermedades de base, descripción de la
lesión, tiempo de aparición, tratamientos

NOTA: siempre use guantes para la toma de la muestra

Examen directo

a) Guardando normas de bioseguridad y muy cerca de la llama del mechero,

con una pinza tome la uña y colóquela sobre una lámina portaobjetos y
con ayuda de un bisturí raspe la uña tratando de sacar polvillo.
b) Tome un pellejito con la pinza y sobre una lámina y con ayuda de un bisturí
corte lo más fino posible
c) Agregue 2 gotas de KOH sobre las muestras y coloque laminilla
d) Pase por la llama del mechero y luego lleve a la incubadora a 37 oC por 10
minutos
e) Observe en 10x y 40x

Cuestionario
● ¿Cómo actúa el KOH sobre las muestras que contienen hongos?
● ¿Qué recomendaciones se le dan a un paciente con lesiones micoticas por
dermatofitos?
 ● Complete según el caso
Paciente de 6 años con lesión descamativa en cuero cabelludo

-Fuente de la muestra
-Cuidados y recomendaciones para la toma de muestra
-Técnica de recolección

● ¿Qué es la quitina, Ergosterol y ¿Cuál es su función?

.

Referencias bibliográficas

1. Bonifaz A. Micología médica básica. Quinta edición McGraw-Hill

2. Casadevall A. [Link]. Human Fungal Pathogens 1st Edition. Cold Spring Harbor Laboratory
Press.