UNIVERSIDAD SANTIAGO DE CALI

INFORME DE CROMATOGRAFIA LIQUIDA HPLC

KATERINE QUIMBAYO AGREDA 1.144.044.537, VALENTINA GÓMEZ 1.234.194.101, KAROL
DIAZ 1.149.687.559, JUAN SEBASTIAN BONILLA 1.107. 507.246

RESUMEN:
En el presente informe se prentende mostrar el procedimiento y fundamentos de la cromatografia liquida
HPLC realizada en la laboratorio para la cuantificación de la cefeina en bebbidas comerciales, donde se
realizarón la preparacion de una solucion estandar de cafeina con una concentracion de 200 ppm, y luego se
prosedio a preparar las muestra problema con conetenido de cafeina, mediante el area de señal
cromatografica, para lo cual se realizo una curva de calibración inyectando muestras de cafeina con
concentraciones concocidas .

PALABRAS CLAVES: Cromatografia liquida, HPLC, Cafeina, Concentración, Estandar.

INTRODUCIÓN estas interacciones selectivas y más posibilidades

El HPLC o cromatografía liquida de alta resolución, para la separación.
es una técnica cromatografica usada para separar
componentes usando una gran variedad de El café es una de las bebidas más apetecidas y
internaciones químicas entre el analito y la consumidas a nivel mundial. Se obtiene de manera
columna cormatografica. natural producto de la siembra del arbusto o árbol
de café, este arbusto es una planta tropical, cuya
En la cromatografía líquida, la fase móvil es un
semilla es el calificado grano de café, el cual genera
líquido que fluye a través de una columna que
su primera producción entre los 3 o 4 años de
contiene a la fase fija. La separación
haber sido sembrado, para así hacer una mezcla de
cromatográfica en HPLC es el resultado de las
agua caliente con granos tostados de la planta de
interacciones específicas entre las moléculas de la
cafeto.
muestra en ambas fases, móvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, la El café contiene más de 1000 sustancias químicas
cromatografía de líquidos de alto rendimiento distintas, así como los compuestos nitrogenados,
(HPLC, de high-performance liquid azucares, aminoácidos, sustancias volátiles,
chromatography) no está limitada por la carbohidratos, pero una de las más importantes
volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra. donde se encuentra el principio activo del café es la
cafeína.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y
especies iónicas, productos naturales lábiles, La cafeína (1,3,7 – trimetilxantina) es un
materiales poliméricos y una gran variedad de compuesto químico alcaloide, que generan efectos
otros grupos polifuncionales de alto peso fisiológicos, pertenecientes al grupo de las
molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, metilxantina, su fórmula química es C8H10N4O2,
otro parámetro se encuentra disponible para la con una masa molecular de 194,19 g/mol. Es un
selectividad, en adición a una fase estacionaria polvo incoloro y amargo. Una de sus propiedades,
activa. es un sólido cristalino y profundamente amargo.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases
estacionarias, lo que permite una mayor gama de El cuerpo humano absorbe la cafeína rápida y
completamente a partir del tracto gastrointestinal,
aumenta su concentración cuando entra al plasma aumenta la energía, proporciona antioxidantes,
sanguíneo, luego se introduce muy rápido en todos reduce la sensación de sueño, relaja los músculos
los tejidos corporales. Los efectos estimulantes lisos, disminuye el riesgo de desarrollar cáncer y
comienzan desde los 15 y 30 minutos una vez diabetes, previene la formación de cálculos. Pero si
consumida, este efecto puede durar horas. Es una se consume más 400 mg de cafeína, que equivale a
sustancia ergogénica, que interactúa 3 o 4 tazas de café es perjudicial para la salud, ya
principalmente con la adenosina, donde se que, a corto plazo en el sistema nervioso central, el
destacan algunos efectos positivos y negativos sueño es interrumpido, acelera la ansiedad y hay
sobre la salud. cambios en el comportamiento, causa intoxicación
que se manifiesta con nerviosismo, insomnio,
La determinación analítica de la cafeína es una hiperacidez gástrica, contracciones musculares,
determinación importante tanto en la industria agitación psicomotriz, diarrea, tensión muscular,
farmacéutica como en la industria alimentaria. En palpitaciones cardiacas. Los cafés procesados no
la formulación de medicamentos, la cafeína se pueden pasar de un rango determinado de cafeína.
emplea como estimulante respiratorio en neonatos Por eso es importante la determinación de cafeína,
o para el tratamiento de la migraña y otros tipos de ya que el exceso de esta tiende a producir
cefaleas . En la industria alimentaria, el análisis de múltiples complicaciones al cuerpo humano de
la cafeína es una técnica de control de calidad de manera fisiológica, causando un problema
ciertos productos que incorporan este compuesto permanente en nuestras vidas.
como ingrediente como es el caso de refrescos y
bebidas energéticas, y de determinados productos
que la conteniente de manera natural como son el
café, el cacao o el té.

La fuente de cafeína más conocida es el grano de

café, a partir del cual se elabora la bebida de café.
El contenido de cafeína en los granos verdes de
café se encuentra muy ligado a la especie de
procedencia. Entre las distintas especies de café
conocidas, destacan las variedades Arábica (Coffea
Arábica) y Robusta (Coffea Canephora) por ser las
de mayor producción a nivel mundial, de manera
IMAGEN Nº 1: ESTRUCTURA QUÍMICA DE LA
que el cultivo de estas dos variedades supone más
CAFEINA
del 90% de la producción mundial de café. Los
granos de café obtenidos a partir de estas
METODOLOGIA APLICADA:
variedades presentan una composición y
características organolépticas muy diferentes.
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
Respecto a su contenido en cafeína, los cafés
es una las técnicas analíticas más utilizadas para la
pertenecientes a la variedad Robusta es son los
determinación de cafeína en alimentos y bebidas.
que presentan una mayor concentración, que
Antes de llevar a cabo el análisis cromatográfico
oscila entre el 1,7 y el 3,5%, frente al 0,8 y 1,5% de
para su cuantificación, es necesario emplear un
los cafés de la variedad arábica. Es decir, una taza
proceso adecuado de extracción de la cafeína en
de café arábica contiene el doble de cafeína, o
las muestras de café, que nos permita separar el
incluso más, que una taza de café robusta frente.
principio activo de la matriz y extraer la mayor
Esto hace que el café robusta sea más amargo.
cantidad posible del compuesto. La cafeína es una
sustancia muy soluble en agua, siendo esta
La cafeína usada con moderación (2 tazas de café
solubilidad dependiente de la temperatura. Es por
al día) tienen muchos beneficios, lo cual estimula el
ello, que la extracción de la cafeína empleando
sistema nervioso central, mejora la concentración,
temperaturas que oscilan entre los 80 y los 100 oC  Adams, Don, and Arlene Goldbard.
mejorarán la extracción de este compuesto. Creative community: the art of cultural
Además, el empleo de óxido de magnesio o development. New York, NY: Rockefeller
ferrocianuro de zinc durante la extracción nos Foundation, Creativity & Culture
permitirá eliminar determinadas sustancias como Division, 2001.
el ácido clorogénico, que pueden interferir en la
medida posterior. Una vez obtenido el extracto de
la muestra, este será analizado por cromatografía
de alta resolución (HPLC) en fase reversa
empleando un detector UV . La cuantificación de la
cafeína presente en la muestra se llevará a cabo
por el método del patrón externo.

En la parte experimental se utilizaron soluciones a

diferentes concenraciones (4,12,24,36,48) de la
cafeina y lugo se inyectron en el HPLC, para poder
obtener una curva de calibración. Los diferntes
analisis se realizaron para diferntes tipo de analitos
con alto conetnido de cafeina entre los que se
trabajaron fueron ( Una bebida gaseosa, una
pastilla con alto conetenido de Cafeina, el café, y
un café descafeinado, para los cuales se les realizo
diferentes metodos para preapara la muestra y asi
poder llevarlas al HPLC y poder cuantificar la
cantidad de cafeina presente y realizar la curva de
calibración.
Los metodos o preparación de la muestra utilizados
fueron:

CONCLUCIONES:

Durante el desarrollo de la tecica se pudo concluir:

 Efectividad de la tecnica
 Tecnica de alta eficiencia y de cortos tiempo
de analisis
 Metodo mas usado en la industria
farmaceutica

BIBLIOGRAFIA
 Instituto Químico Biológico.
Vademecum. Disponible en:
http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farm
a04/c003.htm.

 ISO 20481:2011. Café y productos del

café. Determinación del contenido de
cafeína Usando cromatografía liquida de
alto desempeño (HPLC). Método de
referencia.