UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS,
BIOQUÍMICAS Y BIOTECNOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
BIOTECNOLÓGICA
ASIGNATURA:
MATEMÁTICA
ESTUDIANTE:
VANESA IVONNE LOPA LAZO
SEMESTRE:
II
AREQUIPA-2015
UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS,
BIOQUÍMICAS Y BIOTECNOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
BIOTECNOLÓGICA
ASIGNATURA:
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
ESTUDIANTES
VANESA LOPA LAZO
PAMELA GAMERO BEGAZO
NEYDIN HUACO ARENAS
NOEMI YANQUE JARA
VICTOR QUEA
SEMESTRE:
II
AREQUIPA-2015
1. TÍTULO: Evaluación del efecto antioxidante de las antocianinas del maíz morado (Zea Mays
L.) en el estrés oxidativo de ratas con problemas cardiovasculares inducidos
2. JUSTIFICACIÓN
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
4. OBJETIVOS
4.1. OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto antioxidante de las antocianinas del maíz morado en el estrés
oxidativo de ratas con problemas cardiovasculares inducidos.
4.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
4.2.1. Evaluar los niveles de antocianinas contenidas en extractos de maíz morado.
4.2.2. Determinar la capacidad antioxidante de las antocianinas del maíz morado.
4.2.3. Reducir el estrés oxidativo de ratas con diabetes y ratas con obesidad
inducidas.
5. HIPÓTESIS
6. VARIABLES E INDICADORES
VARIABLE INDEPENDIENTE: CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE ANTOCIANINAS.
VARIABLES (Secundarias) INDICADORES ESCALA DE MEDICIÓN
Extracto de Antocianinas mg de antocianinas/100g de Razón
maíz morado
% de reducción del radical
Capacidad antioxidante Razón
DPPH.
VARIABLE DEPENDIENTE: ESTRÉS OXIDATIVO
VARIABLES (Secundarias) INDICADORES ESCALA DE MEDICIÓN
Niveles de oxidación de nmol MDA/mL de suero Razón
lípidos
7. MARCO TEÓRICO
7.1. MAIZ MORADO
7.1.1. Descripción Botánica.- En Arequipa (La Joya) los cultivares de maíz morado
alcanzan una altura entre 160 y 180 cm, con un periodo de cultivo de 170 días con
las plantas y mazorcas en estado parcialmente seco, el peso de la mazorca de 120 g
en promedio (1)
7.1.2. Zonas de Producción.- El maíz morado es una planta nativa de América, cultivada
principalmente en México y Perú, pero actualmente su cultivo se distribuye en todo
el mundo. En el Perú se produce en zonas ubicadas en la Cordillera de los Andes, en
altitudes entre 500 a 1200 – 4000 m.s.n.m, el tiempo de mayor disponibilidad es
durante los meses de abril, noviembre y diciembre. (2)
7.1.3. Valor Nutritivo
7.1.3.1. Composición Química
Se ha determinado su composición proximal obteniéndose valores para
humedad de 12,20 y 12,70%, cenizas entre 1,80 y 1,90%, grasa de 4,00, 4,20 y
4,30%, carbohidratos de 71,60, 71,80 y 72,40%, proteínas obtenidas a partir del
factor 6,25 del contenido de nitrógeno total de 9,30, 9,50 y 10,10%, y energía
total (kcal) de 362,8, 363,00 y 365,50. (1)
7.1.4. Formas de Uso
Las antocianinas del maíz morado se utilizan particularmente en la industria
alimentaria, farmacéutica, para la elaboración de cosméticos y para la industria
textil. Tienen la propiedad de dar color a bebidas, así como a dulces y muchos
productos de confitería, también son usados en la industria de la panificación,
elaboración de conservas de pescado, grasas y aceites, también se utilizan para dar
color a mermeladas, jaleas, frutas confitadas, etc. (2)
7.2. ANTIOXIDANTES
7.2.1. Definición
Frente al daño que se produce por la acción de los radicales libres el organismo
exhibe mecanismos de defensa que son de naturaleza enzimática y no enzimática
permitiendo de esta manera defenderse del estrés oxidativo (3).
7.2.2. Clasificación
7.2.3. Sistema Antioxidante Endógeno
7.2.3.1. Superóxido Dismutasa (SOD)
Se conoce en esta denominación a una familia de metaloproteínas, que se encuentran en
todas las células que en su metabolismo está presente el oxígeno.
Su actividad fue se ha descrito por primera vez por McCord y Fridovich en 1969. La
superóxido dismutasa (SOD) transforma el radical superóxido en peróxido de hidrógeno,
siendo el primer medio de defensa. (4)
7.2.3.2. Catalasa
La catalasa es la enzima que participa eliminando el peróxido de hidrógeno, dando como
resultado el agua y una molécula de oxígeno.
También puede catalizar algunas reacciones de peroxidación que presentan H 2O2, actuando
sobre algunos alcoholes, aldehídos y ácidos orgánicos como sustratos (4, 5)
La catalasa se halla principalmente en los peroxisomas.
7.2.3.3. Glutation (GSH)
La glutatión peroxidasa (GPX) se encuentra en la categoría de un antioxidante
primario. Transforma el peróxido de hidrógeno y los peróxidos de lípidos en
moléculas inofensivas. Hay dos tipos de glutatión peroxidasa, y ambas requieren
glutatión reducido como dador de agentes reductores: (4)
7.2.4. Sistema Antioxidante Exógeno
7.2.4.1. Vitamina C
Es uno de los más poderosos y probablemente el menos tóxico de los
antioxidantes naturales. Es soluble en agua y se está presente en concentraciones
elevadas en muchos tejidos, el plasma contiene alrededor de 60 µmol/L. Muchas
plantas y la mayoría de los animales pueden sintetizarla a partir de la glucosa,
pero los seres humanos, muchos primates superiores y los cobayos no tienen una
de las enzimas imprescindibles para su síntesis, teniendo que ser aportada con la
dieta.
Cuando se produce la reacción con un ERO se oxida a dihidroascorbato que será
convertido a ácido ascórbico por el enzima dihidroascorbato reductasa. Así, el
dihidroascorbato se encuentra en concentraciones mucho más bajas que el
ascorbato (6).
7.2.4.2. Vitamina E
Los tocoferoles y los tocotrienoles son una familia de compuestos fenólicos. En
el organismo existen 4 tipos considerados como principales siendo: alfa, beta,
gamma y delta tocoferol. Por su naturaleza lipofílica, tienden a concentrarse en
las membranas biológicas y en lipoproteínas plasmáticas.
Es el antioxidante más potente del organismo, el mecanismo de acción se centra
en su capacidad como bloqueador de la cadena de lipoperoxidación (7)
La vitamina E secuestra radicales peroxil lipídicos produciendo hidroperóxidos
lipídicos y radical tocoferoxilo. El cual puede ser reducido por el ascorbato y el
glutatión oxidado a la respectiva quinona.
7.2.4.3. Flavonoides: Antocianinas
Son un gran grupo de antioxidantes polifenólicos que se hallan en muchas frutas,
vegetales y bebidas como el te, el vino y la cerveza principalmente como O-
glicósidos. Son eficientes antioxidantes capaces de reaccionar con radicales como
los radicales peroxilos, el radical hidroxilo, O2 -, formando el radical fenoxi.
En este grupo se incluyen distintos subgrupos como los flavonoles catequinas,
epicatequinas), flavonoles (quercetina, miricetina, caemferol), flavanonas
(naringenina, taxifolina), flavonas (apigenina, hesperetina), isoflavonas
(genisteína), o antocianidinas (cianidina, malvidina) (8).
La antocianina es un ingrediente natural que se extrae de la coronta y granos del
maíz morado, variedad de maíz que es originario del altiplano andino. Existen
diferentes clases de antocianina, siendo la cianidina-3-b glucósido, su pigmento
mayoritario. Desintoxican al cuerpo de los agentes de la contaminación
ambiental, desactivan sustancias cancerígenas, fortalecen el sistema inmune y
protegen al cuerpo en el desarrollo de enfermedades crónicas degenerativas
como cataratas, artritis, tensión alta, diabetes, envejecimiento, arterosclerosis y
enfermedades cardiacas. Incrementa la agudeza visual y mejora la visión
nocturna. Ayuda también en el tratamiento del glaucoma y la retinopatía.(2)
7.3. ANTOCIANINAS
7.3.1. Definición
Las antocianinas son compuestos fenólicos, y los flavonoides son una subcategoría
de ellos. En un subgrupo de los flavonoides se encuentran las antocianinas. Su color
va desde el azul, pasa por el púrpura, violeta, magenta y rojo, hasta el amarillo. (8)
7.3.2. Estabilidad: Efecto de pH, temperatura
Son pigmentos relativamente inestables. La degradación de la antocianina es
principalmente por el pH, la temperatura y la concentración de oxígeno. Otros
factores son el ácido ascórbico, dióxido de azufre, los iones metálicos y azúcares. (8)
7.3.3. Efecto de las antocianinas en la salud
Garzón, (9) en el 2008 describe en su revisión que las antocianinas poseen efectos
terapéuticos conocidos que incluyen la reducción de la enfermedad coronaria,
muestra además efectos anticancerígenos, antitumorales, antiinflamatorios y
antidiabéticos; además se ha visto que personas que la consumen muestran
mejoramiento de la agudeza visual, y también mejora en el comportamiento
cognitivo.
Los efectos terapéuticos de las antocianinas se relacionan con su actividad
antioxidante. Otros estudios con fracciones de antocianinas del vino han mostrado
que también son efectivas en atrapar especies reactivas del oxígeno, así como de
inhibir la oxidación de lipoproteínas y la agregación de plaquetas.
El contenido de antocianinas en el vino estudiado fueron de 226,97 mg/L. Ghiselli et
al. 12, determinó que la fracción de vino que contenía las antocianinas resultó la más
efectiva en su capacidad de atrapar especies reactivas de oxígeno como en su
capacidad de inhibir la oxidación de LDL y la agregación plaquetaria, siendo las
antocianinas la subclase fenólica cuantitativamente más abundante en el vino tinto.
Las otras dos fracciones que contenían los ácidos fenólicos y quercetina-*3-
glucorónido; y procianidinas, catequinas y quercetina-3- glucósido eran menos
activas. Por otro lado Fuentes13, demostró en 10 voluntarios, que disminuyó la
agregación plaquetaria, inducida por epinefrina, con vino tinto y con refresco de
maíz morado, debido probablemente, a una menor actividad de la ciclo oxigenasa y
fosfodiesterasa.(16)
7.3.4. Cuantificación de Antocianinas: Extracción y Valoración
Selección En esta operación se realiza la separación de las mazorcas con granos
dañados o deterioradas.
Lavado Se realiza con agua a presión para limpiar los granos y retirar las impurezas.
Secado Se realiza con aire caliente hasta alcanzar valores de humedad del 11 al 14
%.
Desgranado Para separar el grano de la coronta la cual es utilizada posteriormente.
Molienda Se realiza con un molino de martillo y cuchillas.Extracción. Se utiliza
solventes adecuados sea por maceración o por calentamiento (2)
7.4. ESTRÉS OXIDATIVO
La definición de estrés oxidativo data de 1985, fue H. Sies, quien propuso el concepto de
“estrés oxidativo” como un desbalance, en el cual se produce un aumento de agentes
oxidantes o una disminución de antioxidantes, en comparación con la situación definida
como normal. Recientemente se ha propuesto la definición como la exposición de la materia
viva a diversas fuentes que producen una ruptura del equilibrio que siempre debe existir
entre sustancias o factores prooxidantes y aquellos mecanismos antioxidantes que son los
encargados de eliminar las especies químicas prooxidantes, ya sea por un déficit de las
defensas o por un incremento elevado de la producción de especies reactivas de oxígeno
(10)
7.4.1. Concepto de Radical libre
Se puede entender por radicales libres a todas especies químicas que poseen un
electrón desapareado en su capa externa, y que por su naturaleza pueden ser capaces
de dar lugar a múltiples reacciones con otros compuestos presentes en el organismo
(11). En este medio los radicales libres si se acumulan por la toxicidad que presentan
pueden ocasionar daño oxidativo a las macromoléculas biológicas como proteínas,
lípidos, carbohidratos y DNA (11; 12). La presencia de radicales libres se ha
asociado a muchos procesos patológicos como: cáncer, diabetes, patologías
cardiovasculares, procesos reumáticos, patologías gastroentéricas, afecciones
broncopulmonares y procesos neurodegenerativos. (12).
7.4.2. Fuentes de Radicales Libres
1.1.1. Todos los radicales libres a los que está expuesto nuestro organismo pueden
proceder de nuestro propio organismo como de agentes externos.
1.1.1.1. Fuentes exógenas
a) Sustancias químicas (10) Dentro de este grupo están las sustancias
productoras de radicales libres son:
- Agentes antineoplásicos
- Productos cíclicos de naturaleza redox
- Medicamentos.
b) Irradiación de los organismos por las radiaciones electromagnéticas
y la luz solar a la que estamos expuestos.
c) Factores ambientales (tabaco, solventes, anestésicos e
hidrocarburos aromáticos, etc.).
1.1.1.2. Fuentes Endógenas.- Las principales fuentes endógenas son:
a) Cadena de transporte electrónico mitocondrial.- La cadena
de transporte electrónico en la mitocondria es una de las principales
fuentes de radicales libres en la célula. Esto porque la mitocondria
es la responsable de más del 90% del consumo de oxígeno celular,
que puede ser reducido a través de reacciones enzimáticas, pero del
2-5% escapa a esta reducción bivalente y elige la monovalente, y
de ello resulta la formación de los ERO (13)
b) Sistemas de transporte electrónico del retículo endoplásmico y
membrana nuclear. – Estos dos sistemas de membranas
intracelulares contienen en su estructura los citocromos P450 y B5,
los citocromos P450 los cuales son los más poderosos oxidantes in
vivo, aunque también pueden actuar como agentes reductores (13).
c) Peroxisomas.- Normalmente los peroxisomas producen H 2O2 pero
no peróxido. La oxidación peroxisomal de ácidos grasos es una
fuente importante de H2O2 (13). En este organelos existe la
catalasa peroxisomal que es la enzima que metaboliza la mayor
parte del peróxido de hidrógeno que producen las oxidasas de los
peroxisomas.
d) Polimorfonucleares.- Al activarse los polimorfonucleares
neutrófilos, liberan O2. Estas células activadas son capaces de
causar peroxidación lipídica en células vecinas, como los eritrocitos
porque sus productos son capaces de atravesar la membrana celular
y producir oxidación de la hemoglobina (14).
e) Ejercicio físico.- Es conocido que durante el ejercicio el consumo
total de oxígeno aumenta entre 10 y 20 veces (14). En el ejercicio
extenuante el empleo de oxígeno por parte del músculo aumenta en
100 ó 200 veces si se compara con el estado de reposo. Esto es
capaz de inducir un aumento en el flujo de electrones a través de la
cadena respiratoria mitocondrial, lo que a su vez va a redundar en
el alza de la producción de ERO. Últimamente se ha determinado
que la mitocondria también genera NO, lo que estaría
contribuyendo en parte de la producción total de radicales libres en
el ejercicio. Cuando el NO reacciona con O 2 forma peroxinitrito
(14).
7.4.3. Efecto de los radicales libres en el organismo
1.1.1.3. . Daño oxidativo a lípidos.- La peroxidación de lípidos se produce cuando los
ácidos grasos son atacados por los radicales libres como el radical hidroxilo
(OH), el peróxido (ROO), el alcóxido (RO) y el alquílico.(R),
particularmente son afectados por los ácidos grasos poliinsaturados de las
membranas celulares. Esta reacción se produce de manera particular en los
carbonos contiguos a enlaces dobles de los ácidos grasos poliinsaturados, ya
que los radicales formados se pueden estabilizar por resonancia con el doble
enlace
La acción de los radicales libres sobre las proteínas tiene acción sobre los
enlaces insaturados, los anillos aromáticos y los grupos tiol (-SH). Los
aminoácidos siendo componentes primarios en las proteínas contienen
residuos que presentan susceptibilidad de ser atacados por los radicales libres,
especialmente por el radical hidroxilo, pero algunos casos son los que sufren
más estos procesos oxidativos tales como la fenilalanina, tirosina, triptófano,
histidina, metionina y cisteína (10).
1.1.1.4. Daño oxidativo a glúcidos.- Los carbohidratos reaccionan con facilidad con
los radicales hidroxilo. Los mono y disacáridos son capaces de resistir la
acción de los radicales libres de oxígeno. La glucosa en el organismo
constituye un captador del radical superóxido, al retenerlo e impedir su acción
sobre otras moléculas. La manosa y el manitol son eliminadores del radical
hidroxilo. Por esto, se ha observado que diversos polisacáridos actúan como
agentes protectores celulares.
El daño oxidativo a los glúcidos es de suma importancia cuando se trata de
polisacáridos de función estructural, debido a que los polisacáridos son
despolimerizados por los radicales libres dando lugar a procesos degenerativos
(15).
1.1.1.5. Daño oxidativo al DNA.-El ADN también es muy susceptible de daño
oxidativo en todos sus componentes. La producción excesiva de radicales
libres in vitro como in vivo por fuentes endógenas o exógenas, pueden dañar
al DNA, el cual puede producirse en el esqueleto azúcar-fosfato como, en la
base. produciendo a la fragmentación del azúcar, la pérdida de una base con
parte del residuo de azúcar que aún permanece unido y al corte de la cadena.
(15)
7.4.4. Patologías Asociadas al Estrés Oxidativo
7.4.5. Envejecimiento
7.4.6. Ateroesclerosis
7.4.7. Cáncer
7.4.8. Diabetes Mellitus
7.5. MÉTODOS PARA EVALUAR LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
7.5.1. Método de Inhibición de Radicales Libres (DPPH)
8. DISEÑO METODOLÓGICO
Tipo de Estudio
Población y Muestra
Diseño Experimental / Modelo Experimental
(Etapas Metodológicas)
Métodos y Técnicas.
8. RECURSOS
Humanos
Materiales
Presupuesto
9. ANÁLISIS ESTADÍSTICO/DISEÑO ESTADÍSTICO
10. CRONOGRAMA
11. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
12. ANEXOS.
1. Materiales y Métodos
1.1 Materiales
1.1.1. Variedades nativas de maíz como el:
A) Arrocillo: Raza Caracterizada por mazorcas pequeñas y de grano semi-
cristalino, apiculado (puntiagudo), a semi-dentado. Es cultivado en las
regiones templadas-frías con alta nubosidad.
B) Cónico: Su uso es amplio, tortillas, elotes, antojitos y como forrajee. Ha
sido empleado como fuente de materiales mejorados de valles.
C) Peruano: Más conocido como el choclo en el Perú puede crecer desde
el medio metro hasta los seis metros de alto.
D) Purépecha: Antiguamente se le llamaba así.
1.1.2. Utilizaremos el Etanol (liquido incoloro de olor fuerte e inflamable que se
obtiene por destilación de productos de fermentación de sustancias
azucaradas), o Metanol (Liquido incoloro y muy toxico, obtenido por
destilación de la madera a baja temperatura o reacción del monóxido de
carbono) En proporciones 10.
1.1.3. Ácido Acético ( Podemos encontrarlo en el vinagre) En proporción 1
E) Agua. En proporciones 9
F) Fenol o compuesto fenólico, compuesto orgánico, son clasificados
como metabolitos secundarios de las plantas.
G) Pectina: Sustancia neutra que está en muchos tejidos vegetales.
3.3.1. ACCIONES PREVIAS A LA EXTRACCIÓN
a. Purificación
Es necesaria la purificación de los extractos para eliminar materiales extraños como otras sustancias
fenólicas, pectina, etc., que pueden influenciar en la estabilidad y/o análisis de dichos pigmentos.
La purificación de antocianinas para propósitos analíticos ha sido llevada a cabo primariamente mediante técnicas
cromatografías, y tradicional mente por cromatografía en papel. Varios métodos son descritos en la literatura para la
purificación preliminar de antocianinas presentes en soluciones que contienen altas concentraciones de azúcar, tales
como solvente de extracción; precipitación con acetato de plomo, mercurio y zinc; el empleo de columnas de
poliamida y resinas de intercambio iónico.
b. Concentración
Es el proceso en el cual se separa por ebullición una parte del líquido contenido en una disolución o
suspensión. Los fines principales de esta operación, según Brennan son:
- Como una operación intermedia de un proceso, por ejemplo, antes del secado por atomización, secado en
tambor, cristalización, etc.
- La disminución del volumen de líquido para reducir los costos del almacenamiento, embalaje y
transporte.
- Para aumentar la concentración de sólidos solubles de los productos alimenticios, a fin de facilitar la
preservación. En el caso de pigmentos naturales, durante la evaporación, se deben mantener baja la
temperatura de ebullición y utilizar tiempos de residencia cortos de la solución en la zona de calefacción.
Las temperaturas de ebullición se disminuyen reduciendo la presión de trabajo del evaporador. Con ello
es posible obtener diferencias de temperatura satisfactoria con un medio de calefacción a temperaturas
equivalentemente más bajas. Varios son los tipos de evaporadores que se pueden adquirir en el mercado.
Su clasificación se da en función a la forma, configuración de la superficie de calefacción, y, en función
de los medios empleados para proveer la circulación con agitación del líquido.
Para productos sensibles al calor, los evaporadores rotatorios o de película barrida son los que cada día tienen
mayor aplicación.
c. Secado
Es la operación básica con la que se extrae casi toda el agua normalmente presente en el producto
alimenticio por evaporación o sublimación, resultante de aplicarle calor en condiciones perfectamente controladas.
Las razones para desecar son múltiples, siendo algunas las siguientes:
- Facilitar la manipulación en algún tratamiento posterior.
- Permitir el uso satisfactorio del producto final.
- Reducir los costos de transporte.
- Aumentar la capacidad de otros aparatos o instalaciones del proceso.
- Conservar un producto durante su almacenamiento y su transporte.
- Aumentar el valor y la utilidad de los desperdicios o los subproductos obtenidos.
- Los métodos a usarse en esta operación según Brennan et al. (1970), se clasifican en: Secado con aire
caliente: El alimento está en contacto con una corriente de aire caliente. El calor suministrado al producto
es principalmente por convección. Secado por contacto directo con una superficie caliente: El calor
suministrado al producto es principalmente por conducción y Secado por aplicación de energía
procedente de una fuente radian te, de microondas o dieléctrica. Secado por congelación: Se congela la
humedad contenida en el alimento y luego se la sublima hasta vapor, normalmente mediante la
aplicación de calor en condiciones de presión muy bajas.
3.3.3.- MÉTODOS DE EXTRACCIÓN
a.- Extracción por maceración
Esta extracción es sencilla. Se somete únicamente a la disolución del soluto en un
solvente, dejando reposar hasta que el solvente penetre en la estructura celular, lo ablande y
disuelva las porciones solubles, controlando convenientemente la temperatura y la duración del
proceso. Se recomienda que la maceración se realice a una temperatura de 15 a 20°C. Si el
tiempo de maceración es muy prolongado debe usarse conservadores para evitar alteraciones
microbianas. La ventaja de este método de extracción es producir un extracto con una
concentración uniforme, sin embargo resulta laboriosa, y para conseguir mejores rendimientos se
requiere de mayor tiempo de extracción. En esta etapa se evalúa lo siguiente:
- Influencia del tiempo de maceración.
- Influencia de la relación M.P/Solvente de extracción
- Influencia del ácido.
- Influencia de la concentración del ácido.
- Influencia de la temperatura de maceración
b. Extracción por el método de agitación mecánica o difusión
La extracción consiste en colocar la muestra con el solvente elegido en un vaso de precipitado y
mediante un agitador mecánico se pone en contacto el solvente con la materia prima para obtener el colorante
deseado.
c. Extracción por cocciones
Los cocimientos son preparados líquidos que se confeccionan hirviendo con agua las sustancias
vegetales. La muestra se coloca en un recipiente de vidrio, se agrega el solvente y se somete a ebullición por
diferentes tiempos. La temperatura de extracción debe ser tal que no afecte a la estructura del colorante. En este
método de extracción de la antocianina del maíz morado se evalúa:
-Influencia del número de etapas de extracción.
-Influencia del tiempo y temperatura de calentamiento en la extracción.
d. Lixiviación
La lixiviación es la extracción en la que una mezcla o una fase sólida se descompone en sus
componentes o en la que un componente valioso se quita y recupera de una masa sólida mediante el tratamiento
por un líquido. En general las operaciones que comprenden el tratamiento de sólidos por disolventes incluyen cierto
número de circunstancias distintas. El sólido suele consistir en una mezcla heterogénea de varios constituyentes,
uno o más de los cuales pueden ser líquidos o sólidos en disolución, pero puede ser una mezcla homogénea tal
como una solución sólida o una sal doble. Los sólidos que se lixivian se hallan en una diversidad de formas físicas,
y a menudo se requiere su desintegración para formar una gran superficie de contacto con el disolvente.
Posiblemente, la clase más importante de las operaciones de lixiviación es la eliminación del componente soluble
del interior del sólido inerte efectuado por un proceso lento de difusión a través de una membrana vegetal o animal.
Son ejemplos, la recuperación del disolvente de aceites de semillas, nueces y sustancias vegetales semejantes; los
extractos medicinales; la extracción de taninos, trementina y colofonia a partir de la madera mediante el proceso por
disolventes; de la clorofila a partir de la alfalfa; y la extracción del azúcar de remolacha por lixiviación con agua
(Perry, 1979).Las fuerzas físicas que tienen efecto importante en la lixiviación son: gravedad, viscosidad,
adherencia, fricción, ósmosis, capilaridad y solución.
4. DIAGRAMA DE PROCESO DE EXTRACCION
Para la extracción del colorante de maíz morado (antocianina), se utiliza el flujo general de operaciones que se
muestra en la Figura 02.
* No especifica nivel de presión
3.4.1. DESCRIPCIÓN DEL FLUJO DE OPERACIONES
a. Selección
Esta operación se efectuó manualmente, con el fin de separar las mazorcas que presentaban signos de
deterioro, granos dañados o con indicios de pudrición.
b. Lavado
Se realizó utilizando agua a presión para eliminar suciedad e impurezas.
c. Secado
Esta operación tuvo por objeto lograr una disminución de la humedad de la mazorca de maíz hasta llegar
a 11-14 %, para así conservar sus características durante el almacenamiento. Se realizó en túnel de aire caliente
a2.80 m/seg y 50ºC de velocidad y temperatura de aire respectivamente.
d. Desgranado
El desgranado se realizó en forma manual, separándose el grano de la coronta, quedando así únicamente
la coronta libre para la siguiente operación.
e. Molienda
Se realizó esta operación en un molino de martillo y cuchillas según sea el caso, con el objeto de
aumentar la superficie de contacto inter facial entre soluto y solvente, y por lo tanto, aumentar la velocidad de
extracción.
f. Extracción
Esta operación tuvo por finalidad separar las antocianinas de la coronta del maíz morado con disolventes
apropiados. La extracción de la antocianina se realizó mediante dos métodos de extracción: La primera, por
maceración para determinar parámetros de extracción y la segunda, por calentamiento para aumentar la eficiencia
de extracción. Esta operación se realizó en un evaporador rotatorio a una temperatura menor de 40ºC y a una
presión de vacío de 70 mm de Hg.
4. PROCEDIMIENTO
4.1 Materiales y Equipo
4.1.1 Material Biológico
Se utilizó ratas albinas Holtzmann de 9 semanas de edad; con peso promedio de 180 ± 20 g y
fueron acondicionados en el Bioterio de la Facultad de Ingeniería Biotecnológica de la
Universidad Católica de Santa María, con acondicionamiento previo de 48 horas, con agua y
alimento ad libitum, ciclo luz-día de 12 horas y temperatura de 22 a 26 °C.
La Coronta de maíz Zea mays L. Variedad morada. Fue procesada de la siguiente manera:
Preparación del extracto hidroalcohólico de Zea mays L. Se separa los granos de la coronta.
Esta se llevó a sequedad a temperatura menor de 40°C, se la pulverizó en molino, luego se llevó
a maceración en una solución hidroalcohólica y, después de 8 días, se filtró y el producto
obtenido se sometió a una operación de atomización, el resultado obtenido fue un polvo fino
denominado extracto atomizado de Zea mays L, lo mezclamos con maltodextrina para mejorar
su estabilidad.
4.1.2 Material de Laboratorio
• Pipetas Pasteur
• Tubos microcentrífuga Eppendorf
• Tubos de vidrio c/tapa rosca
• Beackers 500 y 1000 ml Kimax
• Placas Petri
• Jeringas descartables
4.1.3 Equipos
• Molino de cuchillas
• Homogenizador de Potter (Elvehjem)
• Estufa de aire circulante
• Cocinilla eléctrica (general electric)
• Balanza analítica (Mettler)
• pH metro (Fisher Scientific. Accumet Basic. Model AB 15)
• Centrifuga (International Portable Refrigerated. Model PR-2)
• Espectrofotómetro (Spectronic. Genesys Z)
• Estufa con termóstato adaptado
• Vacutainer
• Equipo de disección
4.1.4 Material farmacológico y reactivo
• Tetracloruro de Carbono
• Agua Destilada
• Silimarina
• Fenobarbital
4.1.5 Preparación de los animales
Los animales fueron mantenidas en jaulas de crianza, a una temperatura ambiente
aproximadamente de 23°C, con un ciclo de luz-oscuridad 12:12. Recibieron una dieta
balanceada para roedores y agua ad libitum. Luego fueron sometidos a una semana de
adaptación al ambiente de bioterio.
4.2 INDUCCIÓN DE LA LESIÓN
La inducción de la lesión se realizó mediante 1 modelo experimental:
4.2.1 MODELO EXPERIMENTAL
Se les administró fenobarbital de 200 mg a concentración de 0,5 g / L en agua potable (ad
libitum), por un tiempo de dos semanas, luego de este tiempo se le administró tetracloruro de
carbono (CCl4) a una dosis de 0.2 ml/kg, se administró por vía oral. Los indicadores de
evaluación para este modelo fueron el stress oxidativo y la observación de las láminas
histopatológicas.
La actividad antioxidante se determinó en suero al último día de experimento de acuerdo a la
técnica de Buege J, (Buege JA. 1978), perfil hepático e histopatología. Los indicadores de
evaluación del perfil hepático fueron: las transaminasas (TGP, TGO), albuminas (proteínas) i
bilirrubina.
Tabla 1. Diseño experimental para la inducción de la lesión hepática utilizando fenobarbital +
tetracloruro de carbono.
TRATAMIENTO MUESTRA
Control normal 10
Control con CCl4 0.2 mL/kg (TCL) 10
CCl4 + Silimarina 25mg/kg 10
CCl4 + Maíz morado 500 mg/kg 10
CCl4 + Maíz morado 1000 mg/kg 10
CCl4 + Maíz morado 2000 mg/kg 10
